Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
860 görüntüleme
⸱
8 Temmuz 2025
Kaynak: Grimm, C., et al. Channelrhodopsinlerde iyon seçiciliğinin elektrofizyolojik tayini için tam hücre yama-kelepçe kayıtları. J. Vis. Uzm. (2017)
Bu videoda, bir floresan raportör ile kaynaşmış ışığa bağımlı iyon kanalı proteinlerini ifade eden embriyonik böbrek hücresi kültürleri, ışığın iyon hareketi üzerindeki etkisini göstermektedir. Tüm hücre yama kelepçesi, iyonların hareketini izlemek için kullanılır.
>1. Kayıtlardan Önce Kurulum
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| HEK293 hücreleri | Sigma Aldrich | 85120602 | İnsan embriyonik böbrek hücreleri |
| Retina | Sigma Aldrich | R2500 | all-trans retinal |
| FuGENE HD | Promega | E2312 | Transfeksiyon reaktifi |
| DMEM (Ömer Çiçeğ | Biyokrom | FG 0445 | Dulbecco'nun Modifiye Edilmiş Kartal Ortamı |
| agaroz | Roth | 3810 | Agar köprüleri |
| CaCl2 | Roth | 5239 | CaCl2 2H2O |
| CsCl (İngilizce | Biyomol | 2452 | |
| EGTA (EGTA) | Roth | 3054 | |
| FBS (FBS) | Biyokrom | S0615 Serisi | Hücre kültürü |
| glikoz | Roth | HN06 | D (+) - Glikoz |
| Kartal | Roth | 6781 | |
| MgCl2 | Roth | 2189 | MgCl2 6H2O |
| NaCl (Doğal) | Roth | 3957 | |
| NMG (Türkçe) | Sigma Aldrich | M2004 | N-Metil-D-glucamin |
| Na-Aspartat | Sigma Aldrich | A6683 | L-Aspartik asit sodyum tuzu monohidrat |
| Sitrik asit | Roth | 6490 | |
| Yaş I | ThermoFischer Bilimsel | ER1462 | Restriksiyon enzimi |
| XhoI | ThermoFischer Bilimsel | ER0695 | Restriksiyon enzimi |
| NheI | ThermoFischer Bilimsel | ER0975 | Restriksiyon enzimi |
| XL1Mavi E.coli/ | Agilent Teknolojileri | 200249 | Kemokompetan E.coli |
| Kanamisin | Roth | T832 | |
| Lizojeni et suyu ortamı | Roth | X964 | |
| Ağar-Ağar | Roth | 6494 | Agar plakaları |
| Plazmid saflaştırma kiti | Marchery-Nagel | 740727.25 | |
| Penisisilin/Streptomisin | Biyokrom | Bir 2213 | Hücre kültürü |
| Poli-D-lizin hidrobromür | Sigma Aldrich | P6407-5MG | Kapak kayma kaplaması |
| Mikro Forge | Özel yapım | Yangın parlatma | |
| Serolojik pipetler | TPP (Cesaret Partisi | Farklı boyutlar | |
| Temiz tezgah | Kojair | Biyobüyücü SL130 | |
| Karıştırıcı | İKA | RCT klasik | |
| Gümüş tel | Bilim Ürünleri | AG-T25; AG-T10 | Elektrotlar, 0,64 mm (banyo); 0,25 mm (elektrot) |
| pH ölçer | Koncuk | 765 Kalimetrik | |
| Ozmometre | Vogel | OM 815 | |
| mikroskop | Carl Zeiss | ID03 | Yangın parlatma |
| CO2 inkübatörü | ciltçi | CB150 | |
| Hücre kültürü yemekleri | TPP (Cesaret Partisi | 93040 | 34 mm iç çap |
| Kapak fişleri | Roth | P232 Serisi | 15 mm çap |
| termometre | Rössel Messtechnik | MTM12 | |
| Işın ayırıcı | Chroma | 21011 | 90/10 iletim |
| Pipet tutucu | ALA Bilimsel Cihazlar | PPH-1P-AXU-0-1.5 | |
| Sahne Başı | Moleküler Cihazlar | CV203BU | |
| yükselteç | Moleküler Cihazlar | AxoYama200B | |
| Sayısallaştırıcı | Moleküler Cihazlar | Dijital Veri1400 | Dijital analog dönüştürücü |
| Işık kaynağı | FOTONİK KADAR | Çok Renkli V | 540 nm tam yoğunluğa ayarlayın |
| mikroskop | Carl Zeiss | Eksen 100 | |
| kepenk | Vincent Ortakları | VS25 | |
| Deklanşör sürücüsü | Vincent Ortakları | VCM-D1 | |
| Cam kapilarlar | Warner Enstrümanları | G150F-3 | Ateşle parlatılmış uçları olan boresilikat kılcal damarlar OD 1,5 mm İç çap 0,86 mm |
| Mikropipet çektirme | Sutter Aletleri | P1000 Serisi | |
| Banyo işleyicisi | Lorenz Messgerätebau · | MPCU (MPCU | |
| Üç bantlı filtre seti | Chroma | 69008 | Floresan filtresi ECFP/EYFP/mCherry |
| CCD kamera | Watec Teknolojisi | Wat-221SCCD | |
| Optometre | Gigahertz Optik | P9710 Serisi | Işık yoğunluklarını ölçün |
| nesnel | Carl Zeiss | 421462-9900-000 | W Plan-Apochromat 40X/1.0 DIC |
| Mikromanipülatör | Bilimsel A | Yama Yıldızı | |
| Kayıt odası | Özel yapım | ||
| güç kaynağı | Manson | HCS-3202 | Mikroskobun dahili güç kaynağından kaynaklanan elektriksel gürültüyü önler |
| Titreşim yalıtımlı masa | Newport | M-VW-3636-OPS-01 | |
| Faraday kafesi | Özel yapım veya herhangi bir ticari eşleştirme masası | ||
| Hortum | Herhangi bir ticari; örneğin Roth | Banyo kullanımı ve pipet basıncının uygulanması için farklı boyutlar ve malzemeler; agar köprüleri | |
| Doğrusal çalkalayıcı | Sunlab Aletleri | SU 1000 Serisi | |
| Sıvı bağlantı potansiyeli hesaplayıcısı | Moleküler Cihazlar veya doğrudan Peter H. Barry'den | Program, Clampex edinme yazılımına dahildir veya p.barry@unsw.edu.au | |
| Veri toplama yazılımı | Moleküler Cihazlar | Kelepçe 10.X | |
| Veri değerlendirme yazılımı | Moleküler Cihazlar | Kelepçe Uyumlu 10.X | |
| PsACR1 (İngilizce | GenBank veya Addgene | KF992074.1 veya Addgene plazmidi #85465 | PsACR1 için gen kodlaması |
| Amplifikatör kılavuzu | Moleküler Cihazlar | Akson Rehberi |
