Toksinlerin Civciv Embriyo Sinir Ağı Gelişimi Üzerine Etkilerinin Çok Elektrotlu Diziler Kullanılarak Değerlendirilmesi

Özet

Kaynak: Sanchez, K. R., et.al. Çok Elektrotlu Diziler Kullanılarak Endokrin Bozucu Bileşiklerin Omurgalı Sinir Ağı Fonksiyonunun Gelişimi Üzerindeki Etkilerinin Değerlendirilmesi. J. Vis. Uzm. (2018).

Bu video, toksinlerin erken embriyonik civciv nöronal kültürleri üzerindeki etkilerini incelemek için çok elektrotlu dizilerin (MEA) kullanımını göstermektedir. MEA, nöronal ağdaki nöronların senkron aktivitesini izleyerek, toksin maruziyetine yanıt olarak nöronal ağın fonksiyonel dinamiklerini yakalar. Toksin maruziyeti üzerine azalan senkronizasyon ve ateşleme oranları, nöronal ağ olgunlaşması ve işlevi üzerindeki zararlı etkisini vurgulamaktadır.

Protokol

1. Nöronal Ağ Aktivitesini Kaydetme

1. Edinme gününde, kültür ortamını taze nörobazal ortamla değiştirin ve MEA'ları kayıttan önce en az 2 saat boyunca CO₂ inkübatörüne geri koyun. Kayıt yazılımını başlatın ve sıcaklık simgesine tıklayarak MEA'nın sıcaklığını 37 °C'ye ayarlayın.
   not: Kayıt, kaplamanın 3. günü kadar erken bir tarihte başlayabilir ve kültürler canlı olduğu sürece devam edebilir.
2. "Muse" simgesine sağ tıklayarak (sol pencere panelindeki Akışlar altında) ve "İşleme Ekle" ve "Spike Detector"ı seçip açılır pencerede Tamam'a tıklayarak alım parametrelerini ayarlayın. Dosya adının altında "Spike Detector (6 x STD)" görünecektir.
3. Daha sonra Spike Detector'a sağ tıklayın, "Add Processing (İşleme Ekle) ve "Burst Detector" (Patlama Dedektörü) seçeneklerini seçin ve açılan pencerede Tamam'a tıklayın. Muse simgesinin altında "Burst Detector" (ISI) görünür.
4. Ardından Burst Detector'a sağ tıklayın, "Add Processing" ve "Neural Statistics Compiler"ı seçin. Açılan pencerede, File Header, Aggregated Well Statistics ve Synchrony'nin seçili olduğundan emin olun. Tamam'a tıklayın. "İstatistik Derleyicisi" aşağıda görünecektir.
   not: Bu, uyarlanabilir eşik geçişini (6x STD filtresi), minimum ani yükselme sayısı 5 ile 100 ms'de ani yükselmeler arası aralığı, 10 ms'de bir senkronizasyon parametresi ile 20 s'de ortalama ateşleme hızı algılamasını ve minimum ani yükselme oranını dakikada 0,083333 ani artışta ayarlayacaktır.
5. Alttaki saat simgesine tıklayarak 5 dakikalık (300.000 ms) kayıt süresi için programlanmış kaydı ayarlayın. Bu, ayar bölümündeki bilgileri her 5.1 dakikada bir kayıt yapacak ve 5 dakika boyunca kayıt yapacak şekilde değiştirerek elde edilir. Bu hemen başlatılacak ve bir kez yürütülecektir.
6. MEA'yı hareket ettirmeden önce MEA sıcaklığının 37 °C'ye ulaştığından emin olun. MEA'yı inkübatörden çıkarın, kayıt ünitesine yerleştirin ve MEA'yı kilitleyin. Zamanlanmış kayıt bölümündeki kaydı başlat'a veya "Dosya Oynat" penceresindeki kayıt simgesine tıklayarak ağ etkinliğini kaydetmeye başlayın. Tipik olarak, 5 dakikalık (300.000 ms) bir kayıt süresi yeterlidir, ancak 10 dakikaya kadar daha uzun kayıtlar elde edilebilir.
7. Kayıttan sonra MEA'yı inkübatöre geri koyun.
   not: Steriliteyi korumak ve MEA'nın inkübatörün dışında kaldığı süreyi en aza indirmek için özen gösterilmelidir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Axion İlham Perisi MEA	Axion Biyosistemler	M64-GL1-30Pt200	Makalede MEA sistemi olarak adlandırılacaktır
Eksen Yazılımı	Axion Biyosistemler		Makalede kayıt yazılımı olarak adlandırılacaktır
Bpa	Sigma-Aldrich	239658-250g
EtOH (ÖİK	Sigma-Aldrich	64-17-5
Nörobazal ortam	Beyin Bitleri	Nb4-500
Neuroexplorer istatistiksel yazılımı	Nex Teknolojileri	Neuroexplorer sürüm 5