Bu video, iki foton mikroskobu kullanılarak in vivo retinal görüntüleme için bir tekniği göstermektedir. Anestezi uygulanmış fareler, başlarını sabitleyerek, göz kayganlaştırıcı uygulayarak ve gözün üzerine bir lamel yerleştirerek görüntülemeye hazırlanır. Floresan proteinleri eksprese eden retinal ganglion hücreleri (RGC'ler) ilk olarak hizalama için epifloresan kullanılarak görselleştirilir. Son olarak, RGC'lerin yüksek çözünürlüklü görselleştirilmesine olanak tanıyan iki fotonlu görüntüleme kullanılır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Fare Retinasının İki Fotonlu İn Vivo Görüntülemesi
1.8K görüntülenme
⸱
28 Nisan 2025
Bu makalede
Özet
Protokol
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Görüntü alımı
- için farenin hazırlanmasıGörüntüleme için anestezi faresi
NOT: İzoflura maruz kalmayı azaltmak için uygun atık gaz temizlemeyi sağlayın. Anestezi indüksiyon odasının egzoz portunun pasif ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1: Farelerin in vivo görüntüleme için konumlandırılması. Fareyi göz bebeği ile ışık yolu ile eksen üzerinde konumlandırmak için, anestezi uygulanmış fare önce bir kafa tutucuya dizilir, kafa döndürülür ve açılandırılır, göze büyük bir damla kayganlaştırıcı göz jeli yerleştirilir ve fare sahneye yerleştirilir. Lamel, lamel tutucusuna ışık yolun.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| #1.5 lamel | ThermoFisher | 152440 | Richard-Allan #1.5 24 mm x 40 mm |
| 50 mL cam şırınga | Hamilton | 80950 | 22G çimentolu iğne |
| Anestezi Hava Pompası | RWD Life Science | R510-30 | |
| Atropin | Sigma | A0132 | Öğrenci dilatör çözümü |
| Temel Küçük Hayvan Anestezi Cihazı | RWD Life Science | R500IE | |
| Borosilikat cam kılcal | Sutter | B150-86-10 | Dış çap 1.50 mm, iç çap 0.86 mm, uzunluk 10 cm |
| CFP/YFP filtre küpü | Chroma | custom | 480/40, 505 uzun geçiş, 535/30< |
| Scientifica | S-MPLG-1002 | ||
| Sirkülasyonlu ısıtma pompası | Braintree Scientific | tp-700 | 37 °C'ye |
| Sting film | VWR | 10713-916 | |
| Kompakt Filtre Tutucu | ThorLabs | DH1 | Mouse eye |
| Cx3cr1-GFP transgenik fareler (B6.129P2(Cg)-Cx3cr1tm1Litt/J) | The Jackson Laboratory | 5582 | |
| DAQ denetleyici şasisi | National Instruments | PXIe-1073 | |
| Veri toplama cihazı | National Instruments | BNC-2090A | |
| Sayısallaştırıcılı FPGA modülü | National Instruments | NI-5734 | |
| Gas Tahliye Aparatı | RWD Life Science | R546W | |
| GenTeal Severe kayganlaştırıcı göz jeli | Alcon | (yerel eczaneden) | Görüntüleme |
| GFP/Red filter cube | Chroma | custom | 535/30, 560 uzun geçiş, 605/70< |
| McKesson Medical and Surgical | 190147 | ||
| Pockels Cell Scientifica | S-MP-101080 ile kullanım için HyperScope Fırlatma Optiği | ||
| HyperScope Ana modül | Scientifica | S-MP-100466 | |
| HyperScope Scan Path | Scientifica | S-MP-100406 | |
| HyperScope X galvo Module | Scientifica | MP-100443 | |
| ImageJ Fiji software | Freeware | ||
| Isoflurane | Patterson Veterinary | NDC 14043-704-06 | |
| Isofluran gaz filtresi cannister (aktif süpürme) | RWD Life Science | R510-31 | |
| Isofluran gaz filtresi tenekesi (pasif süpürme) | RWD Life Science | R510-31S | |
| ketamin HCl (100 mg / mL) | Vedco | NDC 50989-161-06 | |
| M32 - M26 adaptörü | ThorLabs | M32M26S | |
| MaiTai GUI yazılımı | Spectra-Physics | NA | |
| MATLAB yazılımı | MathWorks | NA | R2015b |
| meloksikam (5 mg/mL) | Boehringer Ingelheim | NDC 0010-6013-01 | Analjezik |
| Mikroskop Objektif | Edmund Optics | 46-404 | Mitutoyo WE715042319 |
| mikropipet çektirme | Sutter | Flaming/Brown Model P-97 | |
| Mineral yağ | Fisher | BP2629-1 | |
| Mini bulldog hemostatik kelepçe | Güzel Bilim Araçları | 18053-28 | |
| Minyatür EVA Boru 0.02" ID, 0.06" OD | McMaster Carr | 1883T1 | |
| Minyatür EVA Boru 0.05" ID, 0.09" OD | McMaster Carr | 1883T4 | |
| Fare kafa tutucu | Narishige | SGM-4 | |
| No. 5 Forseps | Güzel Bilim Araçları | 11251-10 | |
| Optik Direkler 1/2" | ThorLabs | TR3-P5 | |
| Optik güç ölçer kiti | ThorLabs | PM100D | |
| pE-300 Ultra LLG Deivery | Scientifica | COO-LED3ULLGs | |
| Fenilefrin hidroklorür | Sigma | P6126 | Öğrenci dilatör çözeltisi |
| Pockels hücre | Konoptik | 350-80-02 | |
| Pockels hücre amplifikatörü | Konoptik | Model 302RM | |
| Proparakain hidroklorür | Sigma | 1571001 | Göz hareketsizleştirmesi |
| Kırmızı ve Uzak Kırmızı kısa geçiren filtre Cube | Chroma | custom | 560 kısa geçiş |
| Dönen 1/2" direk kelepçesi | ThorLabs | SWC | |
| ScanImage paketi | Vidrio Technologies | Freeware | Görüntü elde etme yazılımı; Sürüm 5.4.0 (2018); MATLAB |
| sodyum klorür çözeltisi, steril (%0.9) | gerektirir Fresenius Kabi | NDC 63323-186-01 | |
| Stereomikroskop | Leica | S9 E | |
| Masaüstü santrifüj | Oxford | Benchmate C8 | |
| Terramisin oksitetrasiklin/polimiksin B antibiyotik oftalmik merhem | Zoetisus | NA | İntravitreal enjeksiyondan |
| ThermoRack soğutma sistemi | Katı Hal Soğutma Sistemleri | ThermoRack 401 | 20 °C'ye |
| Ultrafast Ti:Sapphire lazer | Spectra-Physics | Mai Tai DeepSee | |
| Vgat-Cre transgenik fareler (Slc32a1tm2(cre)Lowl/J) | Jackson Laboratuvarı | 16962 | |
| VGlut2-Cre transgenik fareler (Slc17a6tm2(cre)Lowl/J) | The Jackson Laboratory | 16963 | |
| VivoScope for In Vivo Imaging | Scientifica | S-MPVS-1200-00P | |
| Beyaz vazelin-mineral yağ kayganlaştırıcı göz merhemi | Arpacık | NA | için Görüntülemeden sonra kullanın |
| ksilazin HCl (20 mg/mL)Akorn NDC 59399-110-20 | |||
