Yöntem makalesi

Canlı Fare Hipokampusunda Floresan Olarak İşaretlenmiş Nöronların Uzunlamasına İki Fotonlu Görüntülenmesi

29 Mayıs 2025

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Ulivi, A. F., et. al. Canlı Farelerde Dorsal Hipokampal CA1'in Uzunlamasına İki Fotonlu Görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu video, canlı bir farede floresan olarak işaretlenmiş piramidal nöronların uzunlamasına iki fotonlu görüntülemesini göstermektedir. hipokampal CA1 bölgesindeki nöronal yapıyı incelemek için dendritlerin ve dendritik dikenlerin hazırlanmasını, kanül hizalamasını ve görüntülenmesini sergilemek.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

  1. Görüntüleme oturumunun hazırlanması
  2. Görüntüleme kurulumunu önceden açın ve gerekirse lazerin ısınmasına ve stabilize olmasına izin verin.
  3. Fareyi uyuşturun. Fareyi anestezi indüksiyon odasına 1 L/dk O2 %3 izofluran olacak şekilde yerleştirin ve bilincini kaybedene kadar bekleyin. Ayak parmağı sıkışma refleks testini kullanarak anesteziyi değerlendirin.
  4. Yapışkan filmi baş tutucu plakadan dikkatlice çıkarmak için forseps kullanın. Fareyi bir elinizle ve baş tutucu plakayı parmaklarınızla tutun. Preparasyona zarar vermemek için filmi nazikçe çıkarın.
  5. Fareyi mikroskobun altına, ısıtma halısının üzerine yerleştirin ve kafa plakasını tutucuya sabitleyin (Şekil 1D).
  6. Burun konisini burnu kaplayacak ve izofluranı% 1.5-2'ye düşecek şekilde konumlandırın.
  7. Farenin gözlerine oftalmik merhem sürün.
  8. Görüntüleme kanülünü deiyonize su ile durulayarak temizleyin. Kanüle su damlatmak için bir şırınga ve ince bir iğne ve çıkarmak için bir vakum pompası kullanın.

2. Görüntüleme oturumu

  1. Kanülde artık su, kir, bütünlük ve floresan varlığı açısından görsel olarak kontrol etmek için düşük büyütme ve uzun çalışma mesafesi hedefleri kullanın.
  2. Baş tutucu kolların açılarını ayarlayarak kanülü optik eksene hizalayın.
  3. 25X 1.0 NA (sayısal diyafram), 4 mm WD (çalışma mesafesi) veya 40X 0.8 NA, 3 mm WD, suya daldırma objektiflerine geçin. Kanülü doldurmak için yeterince deiyonize su ekleyin ve fazla suyu kanülün üzerinde tutun. Hava kabarcıklarının oluşumundan kaçının.
  4. İki fotonlu (2P) uyarma ve görüntü floresan sinyalleri kullanın.
    NOT: Görüntüleme protokolü, görüntülenecek zamana ve uzamsal ölçeklere büyük ölçüde bağlıdır. Bu makalede gösterilen görüntüleri oluşturmak için kullandığımız görüntüleme ayarlarıyla ilgili ayrıntılar için lütfen bölümün temsili sonuçlarına ve tartışmasına bakın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Paslanmaz çelik boru Ø 3,0 x 0,25 mm (İç Ø 2,5 mm) L = 500 mmSawadeR00303Kanül metal halka için paslanmaz çelik boru
Mikroskop Kapak camı (4 mm yuvarlak)Engelbrecht Medizin and Labortechnik Cam lameller kanül camı
Isofluran CP, Flasche 250 mlHenry Schein VET GmbH798932Liquid anestezi için isoflurane
Harvard Apparatus Isoflurane Funnel-Fill VaporizerHarvard Apparatus GmbH34-1040Isofluran vaporizer
Lab Active ScavengerGropper MedizintechnikUV17014Isoflurane çöpçü system
CMA 450 Sıcaklık Kontrol CihazıHugo Sachs Elektronik - Harvard Apparatus GmbH8003770Isıtma battaniyesi
Bepanthen Augen- und NasensalbeBayer AG Oftalmik merhem
Head platesCustom made 30 mm x 10 mm boyut; 8 mm çapında delik, titanium
Head plate clampCustom made Head plate holder
Kaide direk tutucularThorlabsPH20E/MKafa plakası tutucu
Paslanmaz çelik direkThorlabsTR30/MKafa plakası tutucu
Paslanmaz çelik direkThorlabsTR75/MKafa plakası tutucu
Paslanmaz çelik direkThorlabsTR150/MKafa plakası tutucu
Post bağlayıcı kelepçeleriCustom made <
Alüminyum Breadboard, 300 mm x 450 mm x 12,7 mm, M6 TapsThorlabsMB3045/MMikroskop aşaması
7" x 4" Lab JackThorlabsL490/MMikroskop aşaması
Düşük profilli yüz maskesi küçük farelerEmka TechnologiesVetFlo-0801Anestezi yüz maskesi tutucusu
Güç Ölçer Modeli 1918-RNewport Güç ölçer
X-Cite 120QExcelitas Technologies Floresan lamba
İki fotonlu mikroskopBrukerUltima IVİki fotonlu mikroskoplar
İki fotonlu mikroskopThorlabsBergamoİki fotonlu mikroskoplar
Plan N 4x/0.10 ∞/-/FN22Olympus Objective
Plan N 10x/0.25 ∞/-/FN22Olympus Objective
LMPlan FLN 20x/0.40 ∞/-/FN26.5Olympus Objective
XLPlan N 25x/1.00 SVMP ∞/0-0.23/FN18Olympus Objective
2P uyarma için Ultafast ayarlanabilir lazerSpectraphysicsMai Tai Deep SeeExcitaiton lasers
2P uyarma için Ultafast ayarlanabilir lazerSpectraphysicsInSight DS+ Dual beamExcitaiton lasers
3P uyarma için Ultafast ayarlanabilir lazerTutarlıMonacoExcitaiton Lazer
td style='background-color:#ffffff; Renk: #1a202c; yazı tipi ailesi:Roboto; yazı tipi boyutu: 7pt; font-weight:normal; taşma:gizli; dolgu: 0 piksel 3 piksel; dikey hizalama: alt; beyaz boşluk: normal; sözcük kaydırma:kesme sözcüğü; sarma-stratejisi:4;' >Kafa plakası tutucu

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Floresan N ronlarHipokampal CA1Kan l HizalamaDendritik DikenlerBoylamsal G r nt lemeSu Dald rmal ObjektifDeiyonize SuBa Plakas

İlgili makaleler