<figure class='table'><table class='ck-table-resized' style='border-collapse:collapse;font-family:Calibri;font-size:11pt;table-layout:fixed;' cellspacing='0' cellpadding='0' dir='ltr' border='1' data-sheets-root='1' data-sheets-baot='1'><colgroup><col style='width:25%;' width='151'><col style='width:25%;' width='174'><col style='width:25%;' width='172'><col style='width:25%;' width='297'></colgroup><tbody><tr style='height:20px;'><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Apochromat objektif 40×, NA 1.1</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Leica Microsystems</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>15506357</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Suya daldırma tipi. </td></tr><tr style='height:20px;'><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Floromyelin Yeşili</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Thermo Fisher</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>F34651</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> </td></tr><tr style='height:20px;'><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>{{}}Leica SP8 TCS mikroskobu</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Leica Microsystems</td>} <td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>SP8</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> </td></tr><tr style='height:20px;'><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Görüntüleme yazılımı</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Leica Microsystems</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>LAS-X</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> </td>{{TAG_ 48}}<tr style='height:20px;'><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Matlab</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>MathWorks</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> </td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> </td></tr><tr style='height:20px;'><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Ayna</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Thorlabs</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>PF10-03-P01</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Korumalı gümüş ile kaplanmıştır. </td></tr><tr style='height:20px;'><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Kapak kayması</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Thermo Fisher</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>3306</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Kalınlık: #1 (0,13 ila 0,17 mm). </td></tr><tr style='height:20px;'><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Sürgülü cam</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Muto Saf Kimyasallar</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>5116-20F</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Kalınlık: ~1 mm.</td></tr><tr style='height:20px;'><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'></td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Henkel</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Loctite 406</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Cilt veya göz temasını önlemek için bir dağıtım ekipmanı kullanın. </td></tr><tr style='height:20px;'><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Beyaz ışık lazeri</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>NKT fotonik</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>EXB-6</td><td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>EXB-6 durduruldu ve EXU-6 ile değiştirildi. </td></tr></tbody></table></figure>

sabit bir fare beyin diliminde miyelinli akson Çaplarını belirlemek için spektral reflektometri kullanma

Using Spectral Reflectometry to Determine Myelinated Axon Diameters in a Fixed Mouse Brain Slice

Kaynak: <a style='text-decoration:none;' href='https://app.jove.com/v/57965/spectral-reflectometric-microscopy-on-myelinated-axons-in-situ'><span style='-webkit-text-decoration-skip:none;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration-skip-ink:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'>Kwon, J., ve diğerleri. <span style='-webkit-text-decoration-skip:none;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration-skip-ink:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'>, Miyelinli Aksonlar Üzerinde Spektral Reflektometrik Mikroskopi In Situ . J. Vis. Uzm.<span style='-webkit-text-decoration-skip:none;font-family:Arial,sans-serif;font-size:12pt;font-style:normal;font-variant:normal;font-weight:400;text-decoration-skip-ink:none;vertical-align:baseline;white-space:pre-wrap;'> (2018)</a> Bu video, girişim modellerini analiz etmek ve sabit beyin dokusu dilimlerinde miyelinli akson çaplarını belirlemek için hiperspektral konfokal mikroskop ile spektral reflektometrinin kullanımını göstermektedir.

Sabit Bir Fare Beyin Diliminde Miyelinli Akson Çaplarını Belirlemek için Spektral Reflektometri Kullanma

Source:&#160;Kwon, J.,&#160;et al., Spectral Reflectometric Microscopy on Myelinated Axons In Situ. J. Vis. Exp. (2018)&#160;This video demonstrates the ...

Beyin dokusu miyelin kılıf nanoyapısını çözmek için geniş bir spektral aralık için yapılandırılmış stabilize bir lazer kaynağına sahip bir hiperspektral konfokal mikroskop alın.Temel yansıma spektrumunu yakalamak için bir referans aynası kullanın. Aynayı çıkarın ve dedektör gürültü düzeltmesi için karanlık bir ofset spektrumu elde edin.Sabit bir beyin dokusu kesiti olan bir odayı mikroskop aşamasına aktarın.Odak düzlemini ilgilenilen doku bölgesine hizalayın ve cam-doku arayüzünden gelen paraziti en aza indirmek için yeterli derinliği sağlayın.Lazer ışığı, aksonların çok katmanlı miyelin kılıfına yönlendirilir.Işık miyelin ile etkileşime girdiğinde, katmanların arayüzlerinde kısmi yansımalar meydana gelir ve değişen katman kalınlıkları ve kırılma indisleri nedeniyle girişim desenleri üretir.Bu girişim modellerinin spektral görüntülerini elde edin.Temel düzeltme ve sinyal analizinden sonra, yansıma spektrumu, miyelinli akson çaplarının belirlenmesine izin veren dalga sayısı periyodikliğini ortaya çıkarır.

Mikroskop aşamasına, yüzeyi objektif merceğe bakacak şekilde bir referans aynası monte edin. Aynayı mikroskop tablasına koymak kolay değilse, düz plakaya bir ayna yapıştırın. Odak düzlemini ayna yüzeyine hizalamak için mikroskop aşamasını ayarlayın. Ardından, dedektörün dinamik aralığını göz önünde bulundurarak PMT kazancını ve lazer gücünü ayarlayın.Sahte bir renk altında, dalga boyu aralığı boyunca doygunluk olmadığını kontrol edin. Doygunluk gözlenirse, lazer gücünü düşürün. Ardından, lambda taraması alımını çalıştırın. Aynayı sahneden çıkarın ve karanlık referansı elde etmek için aynı alımı numune olmadan tekrarlayın. Ardından, verileri çok yığınlı bir TIFF biçiminde kaydedin.SpeRe görüntü alımını gerçekleştirmek için, monte edilen dokuyu mikroskop tablasına yerleştirin. Dokuyu bir göz merceği aracılığıyla objektif merceğin odak düzlemine kabaca hizalamak için geniş alanlı floresan modunu kullanın. Canlı tarama açıkken, odak düzlemini dokudaki ilgili bölgeye hizalamak için mikroskop aşamasını kontrol edin. Lameli arka plan gürültüsünü önlemek için, cam doku arayüzünden en az 15 mikrometre derinliğinde bir hedef bölge seçin.Bu videoda daha önce gösterildiği gibi aynı yordamı kullanarak hedef bölge için spektral görüntü yığınını alın. Ardından, doku ve koyu ofset için verileri çok yığınlı TIFF formatında kaydedin. ImageJ'deki görüntüleri işlemek için referans ayna ve beyin dokusu için spektral verileri açın.Açılan görüntü yığınları için ROI'leri, referans aynası için merkezi alanı ve beyin dokusu için bir akson lifinin segmentini seçin. Ardından, seçilen ROI'ler için ham spektrumları elde etmek için görüntüyü, yığınları, çizimleri z ekseni profilini çalıştırın.Akson lifleri, uzunlukları boyunca yapısal olarak heterojen olabilir, bu nedenle, kısmi hacim artefaktlarını en aza indirmek için tipik olarak 5 mikrometreden daha küçük olan küçük bir akson segmentinde ROI'nin seçilmesi önerilir.Biri referans aynası için, diğeri beyin dokusu için alınan koyu ofset verilerini açın ve z ekseni profilini az önce gösterildiği gibi çizin. Ardından, alınan tüm seçenekleri kaydetmek için kopyala ve yapıştır seçeneklerini kullanın.

using-spectral-reflectometry-to-determine-myelinated-axon-diameters

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

Sinirbilim

Neuroimaging

Nörogörüntüleme

Advanced Microscopy & Imaging Technologies

Gelişmiş Mikroskopi ve Görüntüleme Teknolojileri

621 Görüntüleme. Beyin dokusu miyelin kılıf nanoyapısını çözmek için geniş bir spektral aralık için yapılandırılmış stabilize bir lazer kaynağına sahip bir hiperspektral konfokal mikroskop alın.Temel yansıma spektrumunu yakalamak için bir referans aynası kullanın. Aynayı çıkarın ve dedektör gürültü düzeltmesi için karanlık bir ofset spektrumu elde edin.Sabit bir beyin dokusu kesiti olan bir odayı mikroskop aşamasına aktarın.Odak düzlemini ilgilenilen...

Abstract

Protocol

Sabit Bir Fare Beyin Diliminde Miyelinli Akson Çaplarını Belirlemek için Spektral Reflektometri Kullanma

Bu makalede

Özet

Protokol

Sonuçlar

Malzemeler

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İlgili makaleler

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Apochromat objektif 40×, NA 1.1	Leica Microsystems	15506357	Suya daldırma tipi.
Floromyelin Yeşili	Thermo Fisher	F34651
{{}}Leica SP8 TCS mikroskobu	Leica Microsystems	SP8
Görüntüleme yazılımı	Leica Microsystems	LAS-X
Matlab	MathWorks
Ayna	Thorlabs	PF10-03-P01	Korumalı gümüş ile kaplanmıştır.
Kapak kayması	Thermo Fisher	3306	Kalınlık: #1 (0,13 ila 0,17 mm).
Sürgülü cam	Muto Saf Kimyasallar	5116-20F	Kalınlık: ~1 mm.
	Henkel	Loctite 406	Cilt veya göz temasını önlemek için bir dağıtım ekipmanı kullanın.
Beyaz ışık lazeri	NKT fotonik	EXB-6	EXB-6 durduruldu ve EXU-6 ile değiştirildi.