Optik Koherens Tomografi ile Tümör Sferoidlerinin Morfolojik ve Fizyolojik İzlenmesi

Özet

Source: Huang, Y. et. al., Optik Koherens Tomografi Kullanarak Üç Boyutlu Tümör Sferoidlerinin Boylamsal Morfolojik ve Fizyolojik İzlemesi. J. Vis. Exp. (2019)

Bu video, yüksek çözünürlüklü kesitsel görüntüler yakalayarak çok kuyulu bir plakadaki tümör sferoidlerini izlemek için optik koherens tomografinin (OCT) kullanımını göstermektedir. OCT, hücresel yapılardan gelen ışık yansımalarını analiz ederek, boyut ve şekil gibi morfolojik özellikleri değerlendirmek için 3D modeller oluştururken, aynı zamanda zaman içindeki ışık saçılımı değişikliklerine dayalı olarak canlı hücreleri canlı olmayan hücrelerden ayırt eder.

Protokol

1. Hücrelerin Hazırlanması

1. Nitelikli bir tedarikçiden hücre hatları edinin.
   NOT: İlgilenilen hücre hatlarından gelen hücrelerin kültür ortamında veya bir substrat (Matrigel gibi bazal membran matrisi) yardımıyla sferoidler oluşturabildiğini doğrulayın. Literatüre bakın veya kontrol için bir ön deney turu yapın.
2. Hücre hattı tedarikçisi tarafından sağlanan özel prosedürü izleyerek donmuş hücreleri çözün. Genel bir prosedür başka bir yerde bulunabilir.
3. Hücreleri 25 cm² kültür şişelerinde 1-2 geçiş için kültürleyin. Hücreler daha sonra 3D hücre kültürü için kullanıma hazırdır.
4. Hücrelerin sağlık durumunu günlük olarak izleyin ve standart koşullar altında (37 °C, %5 CO₂
   
5. 4. 
      
   6. 
      
   7. 
      
   8. 
      

1. 
   
8. 
   

1. 
   
4. 
   
5. 
   
   1. 
      
7. 
   

2. 
   
4. 
   

Sonuçlar

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Özel Spektral Alan OCT görüntüleme sistemi
Süper ışıldayan diyot (SLD)	Thorlabs	SLD1325	{{}}
2×2 tek modlu sigortalı fiber kuplör, 50::50 bölme oranı	AC Fotonik	WP13500202B201
{{}}		{{}} {TAG_47}}
Lens Tüpü	Thorlabs
Thorlabs
{{}}Birleştirilmiş Lens	Thorlabs	AC080-0200} -C
Odaklama Lensi	Thorlabs
Thorlabs
{{}}Ayna	Thorlabs
1D Çeviri Aşaması	Thorlabs
Thorlabs
	Thorlabs
Sıkıştırma çatalı	Thorlabs
Numune kolu
Lens tüpü	Thorlabs
Adapter	Thorlabs
Harmanlanan lens	Thorlabs	AC080-020-C
Galvanometre	Thorlabs{{ TAG_195 0}}
Röle lensi	Thorlabs	AC254-100-C	Teleskop yapmak için iki Röle lensi kurulum
Üçgen ayna montajı	Thorlabs
Ayna	Thorlabs
Amaç	Mitutoyo		{{ TAG_239}}
Yaya postası	Thorlabs
Sıkıştırma çatalı
Polarizasyon kontrolörü	Thorlabs		{{ TAG_269}}
30mm kafes montajı	Thorlabs
Kafes çubuğu
Stage			{{ TAG_299}}
3D motorlu çeviri aşaması	Beijing Mao Feng Optoelectronics Technology Co., Ltd.	JTH360XY
2D Eğme aşaması
Döndürme aşaması	{{TAG_ 325}}
Plaka tutucu			3D baskılı
Spektrometre
Lens tüpü	Thorlabs{{TAG_ 355}}
Adapter	Thorlabs
Thorlabs	AC080-020-C
Grating	Wasatch	G = 1145 lpmm
F-teta lens	Thorlabs	FTH-1064-100
InGaAs çizgi taramalı kamera	Sensör Sınırsız	SU1024-LDH2
Hücre Kültürü Bileşeni{{TAG_ 414}}
HCT 116 Hücre hattı	ATCC	CCL-247
Hücre kültürü şişesi	SPL Yaşam Bilimleri	70025
Pipet	Fisherbrand	14388100
Pipet uçları	Sorenson Bioscience	10340{{} TAG_459}}
Gibco GlutaMax DMEM	Thermo Fisher Scientific	10569044
Fetal sığır serumu, sertifikalı, ABD menşeli	Thermo Fisher Scientific	16000044
Antibiyotik-Antimikotik (100X)	Thermo Fisher Scientific	15240062
Corning 96 kuyulu şeffaf yuvarlak tabanlı ultra düşük ataşman mikroplaka	Corning	7007
Gibco PBS, pH 7.4	Thermo Fisher Scientific	10010023
Gibco Trypsin-EDTA (0.5%)	Thermo Fisher Scientific	15400054
Forma Serisi II 3110 Su Ceketli CO2 kuluçka makinesi	Thermo Fisher Scientific	3120
Eldivenler	VWR	89428-750
Parafilm	Sigma-Aldrich{{ TAG_555}}	P7793
Transfer pipetleri	Globe Scientific	138080
Santrifüj	Eppendorf	5702 R	15 mL tüpü santrifüjlemek için
Santrifüj{{ TAG_583}}	NUAIRE	AWEL CF 48-R	96 oyuklu plakayı santrifüjlemek için
Mikroskop	Olympus
SD-OCT sistemi	Thorlabs	Telesto Serisi
SD-OCT sistemi	Wasatch Photonics	WP OCT 1300 nm
Veri Analizi Yazılımı{{TAG_ 637}}
Temel Görüntü Analizi	NIH	ImageJ	Fiji de işe yarıyor.
3D Rendering	Thermo Fisher Scientific	Amira	Ticari yazılım. Seçenek 1
3D Rendering	Bitplane	Imaris	Ticari yazılım. Seçenek 2. Protokolde kullanılan
	, {{TAG_677 TAG_679}}	,	, C++ ile özel olarak geliştirilmiştir.
Sahne kontrolü	Beijing Mao Feng Optoelectronics Technology Co., Ltd.	MRC_3	Özel OCT edinme koduna dahil edilmiştir
{{}}OCT işleme yazılımı			Özel olarak C++ ile geliştirilmiştir. GPU'yu kullanın. Özel OCT edinme koduna dahil edilmiştir.
Morfolojik ve Fizyolojik Analizler			MATLAB'da özel olarak geliştirildi

{{}}{{ TAG_62}}Adapter{{TAG_ 92}}Kinematik Ayna Dağı{{ TAG_122}}Sürekli nötr yoğunluk filtresi{TAG_136{ }} {{ TAG_151}}{TAG_166{} }} {{TAG_ 181}}{{}}{TAG_254{}} }}Thorlabs{{}}{ {TAG_284}}Thorlabs{{TAG_340} }{ {TAG_372}}Harmanlanan lens{{TAG_ 386}} {TAG_400{}} }}{{TAG_ 473}}{{TAG_540 }}{{}}{ {TAG_570}} }{{ TAG_610}}