Yakın kızılötesi floresan ve yüksek çözünürlüklü tarama kullanarak kemirgen beynindeki protein ekspresyonunun ölçülmesi

Hayvan örneklerini içeren tüm prosedürler, uygun hayvan etik inceleme komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.

1. Imaging

1. Slaytları, doku aşağı bakacak şekilde yakın kızılötesi tarama arayüzüne yerleştirin. Bir seçim aracı kullanarak aynı anda bir cam slayt veya birden çok slayt görüntüleyin.

2. Görüntü, 0 nm uzaklık ve 21 μm çözünürlükle en yüksek kalite ayarı kullanılarak kayar. Tarama, kullanılan tarama ekipmanına bağlı olarak tipik olarak 13-19 saat sürecektir.

3. Yarı kantitatif proteini görüntülemek ve işaretlemek için görüntüleri görüntü analiz yazılımına (örneğin, Image Studio) aktarın analiz.

2. Protein İfade Analizi

1. Görüntü analizi yazılımını açın ve Çalışma Alanı görüntünün içine tarandı.

2. Taramayı görüntülemek için taranan görüntüyü görüntü analiz yazılımında açın ve hangi dalga boylarının görüntüleneceğini de ayarlayın ham görüntüyü veya toplam niceliksel emisyonu değiştirmeden gösterilen kontrast, parlaklık ve büyütme olarak.

3. Niceleme için anahtar bölgeleri belirleyin ve Analysis sayfanın üst kısmındaki sekmeyi tıklayın, ardından Draw Rectangle (or Draw Elipse/ Draw Freehand) miktarı belirlenecek alanın üzerine bir dikdörtgen çizmek için.

4. Dikdörtgenin boyutunu görüntülemek için Shapes ekranın sol alt kısmında, then select Columns sağ alt boyunca. Add Height ve Width.

NOT: Nicelemeyi karşılaştırırken şekil boyutunu kontrol etmek önemlidir. O bölge için emisyonların doğru bir şekilde örneklenmesini sağlamak için, istenen nicelik belirleme konumuna yerleştirilmiş aynı şekillerin kullanılması önerilir.

5. Ardından şekli adlandırın ve tekrarlayın. Tüm bölgeler örneklendikten sonra, columns tab olabilir toplanmış ve analiz edilmiştir.