$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
<
p style='line-height:1.2;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;text-align:justify;' dir='ltr'>
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Floresan Boya Enjeksiyonu
- #5 forseps kullanarak anestezi uygulanmış bir farenin derisini medial sol uylukta sıkıştırın. Cildi nazikçe yukarı doğru çekin ve cildi kesmek ve çıkarmak için makas kullanın. Dekstran konjuge kırmızı yayan rodamin boyası (70 kDa) (tuzlu su içinde çözülmüş 10 mg / kg) hazırlayın.
- Femoral veni bulun. 30 G'lik bir iğne takılı 1 ml'lik bir şırınga kullanarak, şırınganın 130 μl çizgisine görüntüleme için uygun bir floresan boya çözeltisi çekin. Boyayı tamamen şırıngaya çekerek ve şırınga duvarını sıkıca vurarak tüm hava kabarcıklarını çıkarın.
- 30 G iğneyi eğimli tarafı yukarı bakacak şekilde sert bir yüzeye bastırarak yaklaşık 30 derecelik bir açıyla bükün. İğneyi boya ile doldurun ve fazla sıvıyı atın, geriye 100 μl'lik bir numune bırakın.
- 100 μl'lik boya örneğini yavaşça femoral ven içine enjekte edin. İğneyi çıkardıktan sonra, herhangi bir kanamayı durdurmak için enjeksiyon bölgesine sabit, hafif bir baskı uygulayın. Boyanın 5 dakika dolaşmasına izin verin.
- Cildi 4-0'lık bir dikişle birbirine dikerek sol uyluğu kapatın, ardından fareyi dikkatlice karnına çevirin ve fare başlık plakası koşum takımına yerleştirin.
2. In Vivo İki Fotonlu Görüntüleme
- Cerrahi cihazı iki fotonlu mikroskoba taşıyın, sürekli anestezi seviyelerini koruduğunuzdan emin olun. Başlık plakası rezervuarına az miktarda %0,9 salin koyun ve mikroskop objektifini tuzlu su ile temas edecek şekilde indirin. Parlak alan görüntüleme hedefini kullanarak ilgilendiğiniz alanı bulun.
- İki fotonlu lazer uyarımını floresan boya için uygun bir dalga boyuna ayarlayın. 25x objektifi kullanarak iki fotonlu görüntülemeye başlayın.
Bu deneylerde, 780 nm dalga boyunda uyarılmış kırmızı yayan bir rodamin boyasına konjuge edilmiş bir dekstran kullandığımızı unutmayın. Boyadan floresanı tespit etmek için bir 607/36 bant geçiren emisyon filtresi ve arteriyel otofloresansı tespit etmek için bir 480/20 bant geçiren emisyon filtresi kullanıldı. - Görüntüleme ekranında bir kılcal yatak bulun ve optik yakınlaştırma 2 kullanarak bu alanı büyütün. İki fotonlu görüntüleme yazılımını kullanarak kılcal damarların görüntülerini elde edin.