Bu video, gradyan kırılma indisi veya GRIN lens ve minyatür bir mikroskop kullanılarak bir farede in vivo kalsiyum görüntülemeyi göstermektedir. Kurulum, sürtünmesiz bir mobil kafes sistemi içinde kafa sabitlemesini birleştirir, nöronları uyarır ve kalsiyum iyonu akışını tetikler. GRIN lens, beyindeki kalsiyum sinyalini yakalayarak nöronal aktivitenin gerçek zamanlı olarak görselleştirilmesini sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Serbestçe Hareket Eden Bir Farede Gerçek Zamanlı Mikroendoskopik Kalsiyum Görüntüleme
1K görüntüleme
⸱
17 Haziran 2025
Bu makalede
Özet
Protokol
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
NOT: Bu protokol altı ana adımdan oluşur: virüs enjeksiyon cerrahisi, gradyan kırılma indisi (GRIN) lens implant cerrahisi, GRIN lens implantasyonunun doğrulanması, taban plakası bağlantısı, GCaMP'nin optik kaydı (yeşil floresan proteini (GFP), kalmodulin (CaM) ve M13, miyozin hafif zincirli kinazdan bir peptit dizisi) bir davranış testi sırasında sinyal ve veri işleme (Şekil 1A). Ameliyat dışında ticari yazılım paketi (Inscopix) kullanılmaktadır.
1. Stereotaksik cerrahi - Adeno-ilişkili vir....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1: LA'da in vivo mikroendoskopik kalsiyum görüntüleme için stereotaksik cerrahi için şematik iş akışı ve diyagramlar. (A) LA'da in vivo mikroendoskopik kalsiyum görüntülemenin şematik bir iş akışı. (B) Virüs enjeksiyonu ve GRIN lens implant cerrahi.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 26G iğne | BD | 302002 | Cerrahisi |
| AAV1-Syn-GCaMP7b-WPRE | Addgene | 104493-AAV1 | Cerrahisi |
| AAV2/1-CaMKiiα-GFP | ısmarlama | Cerrahi | |
| Akrilik-diş çimentosu (Orto-jet Akrilik Pembe) | Lang | 1334-pembe | Cerrahi ve taban plakası eki |
| Hava akışı manipülatörü | Neurotar | NTR000253-04 | Taban plakası eki |
| Amoksisilin | SIGMA | A8523-5G | Cerrahi |
| Karbon kafes | Neurotar | 180mm x 70mm | Taban plakası eki |
| Carprofen | SIGMA | PHR1452-1G | ameliyat |
| Veri işleme yazılımı | INSCOPIX | INSCOPIX Veri İşleme Yazılımı | Taban plakası eki ve davranış testi |
| Deksametazon | SIGMA | D1756-500MG | Cerrahi |
| Matkap | Seyang | maratonu-4 | Cerrahi |
| Matkap frez | ELA | US1/2, Shank104 | Cerrahi Cam |
| iğne | WPI | PG10165-4 | Cerrahi |
| GRIN lens (INSCOPIX Proview Lens Probu) | INSCOPIX | 1050-002208 | Cerrahi |
| Hamilton Şırınga | Hamilton | 84875 | Cerrahi |
| Kafa plakası | Neurotar | Model 5 | Ameliyat |
| Dizüstü bilgisayar | Samsung | NT950XBV | |
| Cerrahi Lens tutucu, Stereotaksik çubuk (INSCOPIX proview implant kiti)INSCOPIX | 1050-004223 | Cerrahi | |
| Mikroskop tutucu | INSCOPIX | 1050-002199 | Taban plakası eki |
| Mikroskop, DAQ yazılımı, donanım | INSCOPIX | nVista 3.0 | Taban plakası bağlantısı ve davranış testi |
| Mobil ev kafesi | Neurotar | MHC V5 | Taban plakası eki |
| Moterize kol | Neurostar | Özelleştirilmiş | Cerrahi |
| Moterize kol yazılımı | Neurostar | Özelleştirilmiş | Cerrahi |
| Çıkarılabilir epoksi bağ | WPI | Kwik-Cast | Cerrahi |
| Reçine çimentosu (Süper bağ) | Güneş tıbbi | Süper bağ C&B | Cerrahisi |
| Kafatası vidası | Çalmak | 51457 | Cerrahi |
| Stereotaksik çerçeve | Çalmak | 51600 | Cerrahi |
| Stereotaksik manipülatör | Çalma | 51600 | Taban plakası eki |
