Taramalı Elektron Mikroskobu Kullanılarak Bir Fare Beyin Koroid Pleksusunun Görselleştirilmesi

Özet

Kaynak: Van Wonterghem, E., et al. Fare Koroid Pleksusunun Mikrodiseksiyonu ve Tam Montajlı Taramalı Elektron Mikroskobu Görselleştirmesi. J. Vis. Uzm. (2022)

Bu video, taramalı elektron mikroskobu (SEM) kullanılarak bir fare beyninden alınan koroid pleksus dokusunun hazırlanmasını ve görüntülenmesini göstermektedir. İşlem, numuneyi stabilize etmek ve görüntülemeye hazırlamak için doku fiksasyonu, dehidrasyon ve iletken bir platin tabaka ile kaplamayı içerir. SEM, mikrovilluslu epitel hücrelerinin ayrıntılı görüntülerini yakalayarak dokunun yapısal özellikleri hakkında bilgi sağlar.

Protokol

Hayvan örneklerini içeren tüm prosedürler, uygun hayvan etik inceleme komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.

1. Taramalı elektron mikroskobu (SEM) kullanılarak koroid pleksus (CP) dokusunun morfolojik analizi

DİKKAT: Aşağıdaki işlem adımlarında toksik çözeltiler kullanılır. Numune hazırlamanın çeker ocakta yapılması tavsiye edilir.

1. SEM için numune hazırlığını aşağıda açıklandığı gibi gerçekleştirin.
   1. Taze izole edilmiş CP'yi, 0.1 M Na-kakodilat tamponunda (pH 7.4) %2 paraformaldehit ve %2.5 glutaraldehit içeren yeni yapılmış fiksasyon çözeltisine aktarın. Gece boyunca 4 °C'....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Alüminyum numune bağlantıları	EM Sciences	75220
Kakodilat tamponu	EM Sciences	11652
Karbon yapışkan tırnaklar -12 mm	EM Sciences	77825-12
Kritik nokta kurutucu	Bal-Tec	CPD030
Kiriş 540	Zeiss		SEM sistemi
Forseps	Güzel Bilim Araçları GmbH	91197-00
Glutaraldehit	EM Bilimleri	16220
Osmiyum Tetroksit	EM Bilimleri	19170
Paraformaldehit	Sigma-Aldrich	P6148
Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS)	Lonza	BE17-516F
Platin	Çekirdek	Q150T ES	PBS, Ca⁺⁺, Mg⁺⁺ veya fenol kırmızısı içermez; steril filtreli
Numune Sepeti Paslanmaz Çelik	EM Bilimleri	70190-01