Method Article

Droplets tarafından Başlığı Hücre Kapsülleme

DOI:

10.3791/316

⸱

October 1st, 2007

 ,  ,  ,  , 
1Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's, Harvard Medical School, 2Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's Hospital, 3Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 4Harvard-MIT Division of Health Sciences and Technology, Massachusetts Institute of Technology; Center for Biomedical Engineering, Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital

In This Article

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NIH3T3 hücrelerinin hazırlanması:

Ejeksiyon için A. Hücreler

  1. Sonra da hücre, hücre medya ile seyreltilmiş 1:1, ve T75 balonuna 15 ml Falcon tüp transfer Trypsinize
  2. Santrifüj edilerek pelet hücreleri aşağı Spin süpernatant aspirat ve hücreleri DPBS ile yıkayın
  3. Pelet içine hücreleri tekrar aşağı çevirin ve süpernatant aspirat
  4. Medyada yeniden süspanse hücreleri
  5. Hemasitometre (~ 200 X 10 4 T75 şişesi başına hücre / ml) ile hücre yoğunluğunu
  6. Santrifüj hücre çözümü, supernatant aspirat, medya uygun miktarda ve değişik hücre konsantrasyonları için tekrar süspansiyon

B. Hücre ejeksiyon

  1. Çıkarılmaya kullanmadan önce Vortex hücreleri
  2. Enjektöre hücre çözümü 200 mcL transfer
  3. Darbe jeneratörü uygun modu ayarlama
    1. Çıkarırken, tek damlacıkları ve çoklu damlacıkları (patlamaları), "E. BUR" modunda darbe jeneratör
    2. Sürekli damlacık ejeksiyon için, "NORM" moduna darbe jeneratör
  4. Sinyali ayarları değiştirin
    1. 5 V ve LOL 0 V ve emin olun "LIM" LED HIL: yüksek seviye ve düşük seviye çıkış voltajı ayarla
    2. Sinyal kare dalga olarak ayarlayın
    3. Solenoid valf "WID" değerini değiştirerek veya görev döngüsü değişen açık damlacık ejeksiyon zaman miktarını değiştirme ("HİZMET")
    4. "BAŞINA" değerini değiştirerek ejeksiyon frekans değiştir
    5. "BUR" değerini değiştirerek bir patlama çıkarılır damlacıkların sayısını değiştirme
  5. Mikroskobu ile görüntüleme için hazırlanmış yüzey üzerine Çıkar hücre çözümü

C. Boyama

  1. 0.5 mcL Calcein-AM ve DPBS ml başına 2 mcL ethidium homodimer boya çözüm Makyaj
  2. Boya çözüm daldırın hazırlanan substrat
  3. İzin örnek 37 az 10 dakika süreyle inkübe ° C görüntüleme önce

Deney Doğrulama

  1. Nikon Eclipse TE-2000 U Floresan Mikroskobu
    1. Spot gelişmiş yazılım (Diagnostics, Inc.)
    2. Ölü / Canlı Testi

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Floresan MikroskopNikon InstrumentsEclipse TE-2000 U
Solenoid valf hücresi ejektörüÇalışma frekansı: 1 KHz, 30psi, 50nl ~ 0.5ul. 12V Valf Sürücüsü: 2.5 Amp sürücü akımı
5 Galon Taşınabilir hava tankıColemanPowermate CT5Basınçlı hava: 30 PSI
Basınç regülatörleriMarsh Bellofram
Darbe JeneratörüHP8112AÇalıştırma frekansı üretimi: 50 MHz
XYZ aşamalıNewmark SistemleriStep motorlu motorlar: 6 inç seyahat xy-aşaması (NLS4-6-25), 2.5 inç hareket z-aşaması (NLS4-2.5-25), 3 eksenli kontrolör (NSC-G3), 0.1um çözünürlük
NIH 3T3Hücre hattıfibroblastları
Tripsin% 0.05 çözelti
NIH 3T3 hücre ortamı
DPBSTampon
T75Doku kültürü şişeleri
Plastik konik tüpler15 ml, doku kültürü için

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cell EncapsulationDroplet PrintingCell PrintingSolenoid ValveMotorized StageCell DensityHemocytometerLive Dead AssayCalcium AMEthidium Homodimer

Related Articles