NIH3T3 hücrelerinin hazırlanması:
Ejeksiyon için A. Hücreler
- Sonra da hücre, hücre medya ile seyreltilmiş 1:1, ve T75 balonuna 15 ml Falcon tüp transfer Trypsinize
- Santrifüj edilerek pelet hücreleri aşağı Spin süpernatant aspirat ve hücreleri DPBS ile yıkayın
- Pelet içine hücreleri tekrar aşağı çevirin ve süpernatant aspirat
- Medyada yeniden süspanse hücreleri
- Hemasitometre (~ 200 X 10 4 T75 şişesi başına hücre / ml) ile hücre yoğunluğunu
- Santrifüj hücre çözümü, supernatant aspirat, medya uygun miktarda ve değişik hücre konsantrasyonları için tekrar süspansiyon
B. Hücre ejeksiyon
- Çıkarılmaya kullanmadan önce Vortex hücreleri
- Enjektöre hücre çözümü 200 mcL transfer
- Darbe jeneratörü uygun modu ayarlama
- Çıkarırken, tek damlacıkları ve çoklu damlacıkları (patlamaları), "E. BUR" modunda darbe jeneratör
- Sürekli damlacık ejeksiyon için, "NORM" moduna darbe jeneratör
- Sinyali ayarları değiştirin
- 5 V ve LOL 0 V ve emin olun "LIM" LED HIL: yüksek seviye ve düşük seviye çıkış voltajı ayarla
- Sinyal kare dalga olarak ayarlayın
- Solenoid valf "WID" değerini değiştirerek veya görev döngüsü değişen açık damlacık ejeksiyon zaman miktarını değiştirme ("HİZMET")
- "BAŞINA" değerini değiştirerek ejeksiyon frekans değiştir
- "BUR" değerini değiştirerek bir patlama çıkarılır damlacıkların sayısını değiştirme
- Mikroskobu ile görüntüleme için hazırlanmış yüzey üzerine Çıkar hücre çözümü
C. Boyama
- 0.5 mcL Calcein-AM ve DPBS ml başına 2 mcL ethidium homodimer boya çözüm Makyaj
- Boya çözüm daldırın hazırlanan substrat
- İzin örnek 37 az 10 dakika süreyle inkübe ° C görüntüleme önce
Deney Doğrulama
- Nikon Eclipse TE-2000 U Floresan Mikroskobu
- Spot gelişmiş yazılım (Diagnostics, Inc.)
- Ölü / Canlı Testi
