Bir Fare Yavrusu Striatumunda Gen Manipülasyonu için Viral Bir Vektörün Stereotaktik Mikroenjeksiyonu

Özet

Kaynak: Chen, S., et al., Yenidoğan Fare Beyinlerinin Striatal Hücrelerinde Genetik Manipülasyon için Stereotaksik Cerrahi. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu video, Cre rekombinaz ve yeşil floresan proteini veya GFP'yi kodlayan bir viral vektörün, bir loxP ile çevrili STOP kasetini eksize ederek, kırmızı floresan proteinini veya RFP'yi bir raportör olarak aktive ederek gen manipülasyonu elde etmek için genetik olarak değiştirilmiş bir fare yavrusunun striatumuna stereotaksik enjeksiyonunu göstermektedir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1.

1. Mikroenjeksiyon: Stereotaksik aleti %70 etanol ile iyice silerek steril cerrahi hazırlayın. Cerrahi aleti sterilize etmek için% 70 etanole batırın.
2. Yavrunun kafasını %70 etanol ile ovalayın. Kafatasındaki yer işareti lambdasını bulun ve lambdayı bir işaretleyici kalemle işaretleyin. İğne ucunu lambdaya doğrultun ve ön-arka (AP) ve medial-lateral (ML) koordinatlarını sıfır olarak ayarlayın.
3. Enjeksiyon kolunu hedef bölgenin X ve Y koordinatlarına göre hedef bölgeye hareket ettirin. Doğum sonras....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
30G PrecisionGlide İğne	Becton Dickinson	REF 305106
Hamilton MİKROLITRE Şırınga	Hamilton	80300	30G iğne PE10 tüp için uygun; 26G iğne bir PE20 adaptörüne ihtiyaç duyar
Polietilen boru PE20	Becton Dickinson	427406
Polietilen boru PE10	Becton Dickinson	427401
Mikro Akış Hızı Şırınga Pompası	Daha Uzun Hassas Pompa Co.	TJ-2A (Denetleyici) ve L0107-2A (Sürücü Ünitesi)
25G şırınga	Becton Dickinson	REF 302105
Hızlı yeşil	Sigma-Aldrich	F-7252	%0.10
Standart Stereotaksik Aletler	RWD Yaşam Bilimleri	68037	68030 Fare / Yenidoğan Sıçan Adaptörü
LSM 880 kullanmadan Konfokal mikroskop	Zeiss	LSM 880
AAV9.hSynapsin.HI.eGFP-Cre.WPRE.SV40	Penn Vektör Çekirdeği	AV-9-PV1848	Lot # CS0987, 5.506x1013 (GC / mL)
B6. Cg-Gt(ROSA)26Sortm14(CAG-tdTomato)Hze/J	Jackson Laboratuvarı	7914	Ai14
B6(Cg)-Foxp2tm1.1Sfis/CfreJ	Jackson Laboratuvarı	26259	Foxp2fl/fl