Üç boyutlu görüntüleme ile beyin dilimlerinde gerçek zamanlı gen ekspresyonu izleme

Bu makalede

Özet

Kaynak: Shimojo, H., et al. Murin Nörojenezi Sırasında Çentik Sinyal Dinamiklerinin Gerçek Zamanlı Biyolüminesans Görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu videoda, transgenik fare embriyolarından alınan kortikal dilim kültürleri, üç boyutlu görüntüleme yoluyla gen ekspresyonunu izlemek için kullanılmıştır. Biyolüminesans, floresan ve parlak alan görüntüleri, doğal doku içindeki nöronal farklılaşma sırasında gerçek zamanlı gen ekspresyonunu görselleştirmek için kullanılır.

Protokol

Hayvan örneklerini içeren tüm prosedürler, uygun hayvan etik inceleme komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.

Dilim kültürlerinde lusiferaz raportör ifadesinin görselleştirilmesi
1. Diseksiyonu başlatmadan önce lüminesans canlı görüntüleme sistemini başlatın. Kortikal dilim kültürleri için aşağıdaki koşulları kullanın: %40 O₂,% 5 CO₂ ve 37 ° C.
2. Daldırma yağını 40x objektif merceğine koyun. Numune kabını mikroskop tablasına koyun. Floresan test görüntüsünü elde edin ve konum ve odak düzlemini, uyarma ışığının aydınlatması altında ilgilenilen bölgeye ayarlayın.
3. 24 saat boyunca 3 boyutlu (lüminesans, floresan ve parlak alan) alımlarla hızlandırılmış alımı çalıştırın (Şekil 1F-H). Lüminesans görüntü elde etmek için şu kamera ayarlarını kullanın: düşük aktarım hızı (50 kHz), 2x2/4x4 gruplama, 10 dk/5 dk pozlama süresi. Floresan ve parlak alan görüntüsü elde etmek için şu ayarları kullanın: ara aktarım hızı (1 MHz), 1x1 gruplama ve 100 ms pozlama süresi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 1: Embriyonik telensefalonun kortikal dilimlerinin yapılması ve kortikal dilim kültürlerinde Dll1 protein dinamiklerinin görselleştirilmesi. (A) Floresan stereoskopik mikroskop kullanarak EGFP ekspresyonunun kontrol edilmesi. Kırmızı ok...