Yüksek Yoğunluklu Lipoprotein Taklit Eden Nanopartiküllerde Kapsülleyici Sinir Büyüme Faktörü

Özet

Kaynak: Zhu, J., et. al., Sinir Büyüme Faktörü Kapsüllemesi için Yeni HDL Taklit Eden Nanopartiküllerin Hazırlanması ve Karakterizasyonu. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu video, potansiyel nörotrofik dağıtım uygulamaları için protamin destekli kapsülleme ve lipid bazlı kendi kendine montaj kullanarak NGF yüklü HDL'yi taklit eden nanopartiküllerin aşamalı montajını göstermektedir.

Protokol

1. NGF HDL'yi taklit eden Nanopartiküllerin Hazırlanması

1. Eksipiyanları, fosfatidilkolin (PC), sfingomyelin (SM), fosfatidilserin (PS), kolesteril oleat (CO) ve D-α-tokoferil polietilen glikol süksinatı (TPGS) etanol içinde çözün ve 1 mg / mL'de stok çözeltileri hazırlayın.
   NOT: Stok çözeltileri aliquoted edildi ve -20 ° C'de saklandı. Kolesteril oleat koyu renkli şişelerde saklandı. PC, SM, PS ve CO stok çözeltileri -20 °C'de sırasıyla 6, 3, 12 ve 12 aya kadar stabil kaldı. TPGS çözeltisi -20 ° C'de en az 12 ay boyunca stabildi.
2. 1.5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpünde 10 μL NGF (suda 1 mg/mL) ile 10 μL NGF'yi (suda 1 mg/mL) karıştırın ve kompleksi oluşturmak için oda sıcaklığında 10 dakika bekletin.
   NOT: NGF ve protamin stok çözeltileri alikote edildi ve -20 °C'de saklandı. NGF stoğu için tekrarlanan dondurma ve çözdürme önerilmez.
3. Bir cam şişeye 59 μL PC, 11 μL SM, 4 μL PS, 15 μL CO ve 45 μL TPGS ekleyin. Etanolü hafif bir nitrojen akışı altında yaklaşık 5 dakika karıştırın ve buharlaştırın; Tüm yardımcı maddeler, cam şişenin altında yağlı, ince bir film oluşturmalıdır.
4. Şişeye 1 mL ultra saf (tip 1) su ekleyin ve prototip nanopartikülleri (NP'ler) oluşturmak için oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 9.500 rpm'de (8.600 x g) homojenize edin.
5. Adım 1.2'de hazırlanan kompleksi prototip NP'lere ekleyin ve cam şişede küçük bir karıştırma çubuğu kullanarak karıştırarak 37 ° C'de 30 dakika inkübe edin.
6. NP'leri oda sıcaklığında 30 dakika daha karıştırarak soğutun. Bu soğuduktan sonra, 106 μL Apo A-I (1.49 mg / mL) ekleyin ve son NGF HDL'yi taklit eden NP'leri oluşturmak için gece boyunca oda sıcaklığında karıştırın.

Malzemeler