Yüksek Yoğunluklu Lipoprotein Taklit Eden Nanopartiküllerde Kapsülleyici Sinir Büyüme Faktörü

Özet

Kaynak: Zhu, J., et. al., Sinir Büyüme Faktörü Kapsüllemesi için Yeni HDL Taklit Eden Nanopartiküllerin Hazırlanması ve Karakterizasyonu. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu video, potansiyel nörotrofik dağıtım uygulamaları için protamin destekli kapsülleme ve lipid bazlı kendi kendine montaj kullanarak NGF yüklü HDL'yi taklit eden nanopartiküllerin aşamalı montajını göstermektedir.

Protokol

1. NGF HDL'yi taklit eden Nanopartiküllerin Hazırlanması

1. Eksipiyanları, fosfatidilkolin (PC), sfingomyelin (SM), fosfatidilserin (PS), kolesteril oleat (CO) ve D-α-tokoferil polietilen glikol süksinatı (TPGS) etanol içinde çözün ve 1 mg / mL'de stok çözeltileri hazırlayın.
   NOT: Stok çözeltileri aliquoted edildi ve -20 ° C'de saklandı. Kolesteril oleat koyu renkli şişelerde saklandı. PC, SM, PS ve CO stok çözeltileri -20 °C'de sırasıyla 6, 3, 12 ve 12 aya kadar stabil kaldı. TPGS çözeltisi -20 ° C'de en az 12 ay boyunca stabildi.
2. 1.5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpünde 10 μL NGF (suda 1 mg/mL) ile 10 μL NGF'yi (suda 1 mg/mL) karıştırın ve kompleksi oluşturmak için oda sıcaklığında 10 dakika bekletin.
   NOT: NGF ve protamin stok çözeltileri alikote edildi ve -20 °C'de saklandı. NGF stoğu için tekrarlanan dondurma ve çözdürme önerilmez.
3. Bir cam şişeye 59 μL PC, 11 μL SM, 4 μL PS, 15 μL CO ve 45 μL TPGS ekleyin. Etanolü hafif bir nitrojen akışı altında yaklaşık 5 dakika karıştırın ve buharlaştırın; Tüm yardımcı maddeler, cam şişenin altında yağlı, ince bir film oluşturmalıdır.
4. Şişeye 1 mL ultra saf (tip 1) su ekleyin ve prototip nanopartikülleri (NP'ler) oluşturmak için oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 9.500 rpm'de (8.600 x g) homojenize edin.
5. Adım 1.2'de hazırlanan kompleksi prototip NP'lere ekleyin ve cam şişede küçük bir karıştırma çubuğu kullanarak karıştırarak 37 ° C'de 30 dakika inkübe edin.
6. NP'leri oda sıcaklığında 30 dakika daha karıştırarak soğutun. Bu soğuduktan sonra, 106 μL Apo A-I (1.49 mg / mL) ekleyin ve son NGF HDL'yi taklit eden NP'leri oluşturmak için gece boyunca oda sıcaklığında karıştırın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Rekombinant İnsan Beta-NGF	Creative Biomart	NGF-05H
LA-Fosfatidilkolin (PC)	Avanti	131601P	%95, Yumurta, Tavuk
Sfingomyelin (SM)	Avanti	860062P	Beyin, Domuz
Fosfatidilserin (PS)	Avanti	840032P	Beyin, Domuz
Kolesteril oleat (CO)	Sigma	C9253
D-α-Tokoferil polietilen glikol süksinat (TPGS)	BASF	9002-96-4	E Vitamini Polietilen Glikol Süksinat
Protamin sülfat	Sigma	P3369	USP test spesifikasyonlarını karşılar
Apolipoprotein A1, İnsan plazması	Atina Araştırma ve Teknoloji	16-16-120101	671 μl 10 mM amonyum bikarbonatta 1 mg, pH 7.4
Homojenizatör	Tekmar	T 25-S1
Polytron homojenizatör	Kinematica	PT 1200C

,