Bir fare modelinde beyin ödemini azaltmak için reseptör blokerlerinin intravenöz verilmesi

Özet

Kaynak: Zeynalov, E. et. al., Sürekli IV İnfüzyonu, İnme ile Uyarılmış Beyin Ödemini İncelemek İçin Farelerde Arginin-vazopressin Reseptör Blokeri Conivaptan için Seçim Tedavi Yoludur. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu video, bir fare modelinde bir arginin-vazopressin (AVP) reseptör antagonistinin intravenöz iletimini göstermektedir. Geçici orta serebral arter tıkanıklığı beyin ödemine neden olur. Bir AVP reseptör antagonisti, sol juguler vendeki bir kateter yoluyla uygulanır ve ödemi hafifletir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. In Vivo İnme İndüksiyonu

1. Ameliyattan önce filamenti diş reçinesi ile önceden kaplayın.
   1. 7-0 naylon dikişten 12 mm uzunluğunda bir filament parçası kesin. Reçinenin 2 kısmını 1 kısım sertleştirici ile karıştırın ve ardından filamentin ucunu tüm uzunluğun yaklaşık 1 / 3'ünü kaplayacak şekilde hemen karışıma batırın. Hızlı bir şekilde çıkarın ve pürüzsüz yüzeyli bir diş reçinesi tabakası ile kaplandığını doğrulayın.
   2. Kullanmadan önce filamenti 2 saat havayla kurutun.
2. Fareyi bir anestezi indüksiyon odasına (2 L hacim) yerleştirin ve %25 oksijenle zenginleştirilmiş oda havasındaki %1,5 izofluran akışını odaya girerken 2 L/dk'ya ayarlayın.
3. Farenin, kuyruk sıkışmasına yanıt vermeme ile belirlendiği gibi, tamamen uyuşturulana kadar indüksiyon odasında kalmasına izin verin.
4. Fareyi ısıtılmış bir ped ile ameliyat masasına yerleştirin ve burun konisinden kendiliğinden verilen anestezinin sürdürülmesi için izofluran konsantrasyonunu% 1'e ayarlayın.
5. Boynun önündeki ve arkasındaki saçları kırpın ve boynuna ispirto püskürtün. Her iki göze de veteriner oftalmik merhem sürün.
6. Vücut ısısını sürekli olarak izlemek için, ameliyat sırasında dijital bir ekrana bağlı bir rektal sıcaklık probu kullanın.
7. Fareyi sırtüstü pozisyona getirin, dezenfeksiyon için povidon-iyot% 10 ovma solüsyonu uygulayın, steril bir örtü ile örtün ve ardından 10 numara cerrahi neşter bıçağı ile boyun boyunca orta hat kesisi yapın.
8. Sol ana karotis arteri (CCA) 6.0 ipek sütür ile geçici olarak bağlayın.
9. Sol dış karotis artere (ECA) başka bir bağ yerleştirin.
10. İç karotis artere (ICA) bir mikrovasküler klips yerleştirin.
11. Mikrovasküler makasla dış karotis arter üzerinde küçük bir delik açın. ECA'daki açıklığa diş reçinesi ile kaplanmış 7-0 naylon sütürden yapılmış bir filament yerleştirin ve klipsi çıkarırken direnç hissedilene kadar (CCA'nın çatallanma noktasından yaklaşık 5-7 mm) sefalal olarak ilerletin.
12. Filamenti yerine sabitlemek için iç karotis artere geçici bir bağ yerleştirin. Şemaya bakın, Şekil 1A. Cildi ipek bir sütürle kapatın ve adım 2.6'da olduğu gibi boynun ön tarafındaki yarayı 0.2 ml% 0.5 bupivakain ile sızın.
13. Farenin anesteziden uyanmasına ve 60 dakika boyunca bir iyileşme odasında bilincini geri kazanmasına izin verin. Sternal yaslanmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar hayvanı gözetimsiz bırakmayın.
14. Fareyi nörolojik defisit skorlaması (NDS) için aşağıdaki gibi test edin: 0 = normal motor fonksiyon, 1 = kuyruk kaldırmada gövde ve kontralateral ön ayağın fleksiyonu, 2 = karşı tarafa daire çizme ancak istirahatte normal duruş, 3 = istirahatte karşı tarafa eğilme, 4 = spontan motor aktivite yok.
    1. NDS testi için fareyi kuyruğundan kaldırın ve gözlem için düz bir yüzeye yerleştirin (2-3 dk). Alternatif olarak, kurtarma odasındaki fareleri gözlemleyin. Orta karotis arterin (MCA) yetersiz tıkanması nedeniyle 2'den düşük NDS sergileyen fareleri deneyden çıkarın.
       NOT: MCA oklüzyonunu doğrulamak için lazer Doppler akış metrisi tekniği kullanılabilir.
15. Yukarıda tarif edildiği gibi indüksiyon odasında 60 dakikalık iyileşmeden sonra hayvanı yeniden uyuşturun, önceki cilt kesisini %10 povidon-iyot ovma solüsyonu ile yeniden sterilize edin ve ipek dikişi kesip çıkararak boynun önündeki cerrahi yarayı yeniden açın.
16. Filamenti ECA'dan çıkarmak için aşağıdaki adımları gerçekleştirin:
    1. ICA'ya bir mikrovasküler klips yerleştirin. ICA üzerindeki dikişi çözün ve klipsi açık tutarken filamenti dışarı çekin.
    2. Klipsi kapatın ve kesime yakın bir şekilde ECA'ya bir bağ yerleştirin.
    3. Beyne giden kan akışını yeniden sağlamak için klipsi ve bağı CCA'dan çıkarın. Şemaya bakın, Şekil 1B.

2. Sürekli 48 saatlik Tedavi için İntravenöz (IV) Kateterin Juguler Ven İçine Takılması

NOT: Adım 1.16.3'ten hemen sonra fareyi uyandırmadan kateterin kurulumuna devam edin.

1. İki farklı boyutta esnek boru kullanın: iç boruyu (0,94 mm dış çap; infüze edilen ilacı içermek için) dış boruya (3,18 mm dış çap; iç borunun korunması için) yerleştirin.
2. Fareyi yüzüstü pozisyona getirin, dezenfeksiyon için %10 povidon-iyot ovma solüsyonu uygulayın ve 1 numara cerrahi neşter bıçağı ile boynun arkasına 10 cm'lik bir kesi yapın. Fareyi sırtüstü pozisyona getirin, boynun ön tarafını %10 povidon-iyot ovma solüsyonu ile yeniden sterilize edin ve boynun ön tarafındaki cerrahi yarayı yeniden açın. Sırttan yapılan kesiden boynun ön kısmına kadar deri altına boru tüneli açın ve açık yaradan 1 cm dışarıya doğru çıkın.
3. Boynun ön kısmının sol tarafından, orta hattan yaklaşık 1 cm lateralde cilt altı yağ dokusunu çıkarın. Sol şah damarını bulun, damar boyunca 5 mm aralıklarla iki bağ yerleştirin ve damarı hafifçe gerin. Mikrovasküler makasla iki bağ arasındaki juguler vende küçük bir delik açın; İç borunun ucunu 5 mm derinliğinde kaudal olarak (kalbe doğru) yerleştirin.
4. Hortumu her iki bağı da juguler ven ile sabitleyin. Boynun ön kısmındaki deriyi 3-0 ipek dikiş ile kapatın. Şemaya bakın, Şekil 1C.
5. Tüpü bir dikişle boynun arkasındaki cilde sabitleyin ve hortumu bir döner vasıtasıyla bir mikroinfüzyon IV pompasına bağlayın. Fırdöndü, farelerin kafes içinde serbest dolaşımına ve yiyecek ve suya tam erişime izin verir.
6. Ameliyat sonrası ağrıyı önlemek için boynun ön ve arkasındaki cilt kesilerine 0,2 ml% 0,5 bupivakain ile sızın.
   NOT: Kuruma özgü hayvan protokollerine bağlı olarak, hayvanlar ameliyat öncesi ve sonrası opioidler, steroid olmayan antienflamatuar ilaçlar (NSAID'ler) veya antibiyotiklerle tedavi edilebilir. Bununla birlikte, söz konusu tedaviler iskemik inme sonucunun sonuçlarını değiştirebilir.
7. Hayvanın kurtarma odasında uyanmasına izin verin ve ardından deneyin son noktasına kadar hayvanı ayrı bir kafeste barındırın. Sternal yaslanmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar hayvanı gözetimsiz bırakmayın.
8. Conivananda (% 5 dekstrozda 0.14 mg / ml) veya aracın sürekli 48 saatlik IV tedavisi için infüzyon hızını 1.5 ml / kg / saat'te ayarlayın ve infüzyonu başlatın.
   NOT: IV ile infüze edilen toplam conivaptan miktarı, toplam 1.44 ml hacminde yaklaşık 0.2 mg / fare / gün olmalıdır.

Sonuçlar

Şekil 1: Deneysel inme modelinin diyagramı, IV kateter kurulumu ve inmeden 48 saat sonra temsili enfarktüs hacmi. Oklüzyon (A) ve reperfüzyon süresi (B) sırasında sol iç karotis arterde (ICA) reçine (yeşi...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Isıtmalı ped	K&H Manufacturing Inc	1060
Rektal problu sıcaklık monitörü	Physitemp	7029
İpek sütür makarası, 6-0	Cerrahi Uzmanlıklar Şirketi	SP114
İğne üzerinde ipek sütür, 3-0	Ethicon	1684G
Naylon sütür, 7-0	Ethicon	1696G
Heraeus Kulzer	ile diş reçinesi polisiloksan	65817930
Mikroinfüzyon IV pompası	Kent Scietific	GT0897
Döner 22GA	Instech	375/22PS
Laboratuvar hortumu, 0,94 x 0,51 mm	Dow Corning	508-002
Laboratuvar hortumu, 3,18 x 1,98 mm	Dow Corning	508-009

Sertleştirici