Fare Beyninde TRPV1 Duyarsızlaştırma için Resiniferatoksin ile İntraserebroventriküler Tedavi

Bu makalede

Özet

Kaynak: Fukushima, A., et al. Farelerde Resiniferatoksin ve Ağrı Testleri ile İntraserebroventriküler Tedavi. J. Vis. Uzm. (2020)

Bu video, beyindeki TRPV1 reseptörlerini duyarsızlaştırmak için farelerde resiniferatoksinin intraserebroventriküler enjeksiyonu prosedürünü göstermektedir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. RTX'in İntraserebroventriküler Enjeksiyonu

Fareleri pentobarbital sodyum tuzu (intraperitoneal olarak 60 mg / kg) ile uyuşturun ve doğru refleks kaybını kontrol edin.
İntraserebroventriküler (i.c.v.) tedavi için, sağ lateral ventriküle 5 μL resiniferatoksin (RTX) (20 μg/mL) enjekte edin. Kontrol grubu için araca (%10 etanol, %10 polioksietilen (20) sorbitan monooleat ve %80 yapay beyin omurilik sıvısı (ACSF)) aynı şekilde enjekte edin.
1. İğnenin 27-0.8 mm ucunu ortaya çıkarmak için tek kullanımlık 3.0 G'lik bir iğneyi metal bir tüpten (3.5 mm ID) geçirin (Şekil 1A).
2. Farenin başını %70 alkolle dezenfekte edin ve farenin skuamöz kemiklerini parmaklarınızla sıkıca tutun (Şekil 1B). not: Skuamöz çıkıntıların konumlarına dikkat edin, çünkü bu çıkıntılar enjeksiyon için yer işaretleri olarak işlev görecektir.
3. İğneyi kafa derisi üzerinde yanal olarak hareket ettirin ve iğne ucu dikişe takıldığı için sagital ipliği bulun.
4. Ucu yaklaşık 1 mm sağa hareket ettirin, ardından ucu rostral olarak hareket ettirin ve koronal sütürü bulun. (Şekil 1B).
5. İğneyi yavaş ve dikey olarak yerleştirin, RTX solüsyonunu yaklaşık 10 saniye içinde enjekte edin ve yaklaşık 10 saniye tutun.
6. İğneyi yavaşça çekin ve fareyi ev kafesine geri koyun. Kanama genellikle minimaldir veya yoktur. Büyük kanama meydana gelirse, başka bir farenin kullanılması düşünülmelidir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 1: İntraserebroventriküler (i.c.v.) enjeksiyonunun fotoğrafik ve şematik görünümleri. (A) ICV enjeksiyonu için kullanılan iğne. (B) Fare kafatasının şeması ve iğne ucunun hareketi. Skuamöz kemikler mavi...