$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
- Orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO):
- Anestezi uygulanmış fareyi (kafatasına takılı lazer doppler flowmetri (LDF) probu ile) sırtüstü pozisyona getirin ve sabitleyin ve ameliyat boyunca bir ısı lambası kullanarak vücut ısısını koruyun. Boynu% 70 etil alkol ile dezenfekte edin.
- Bir neşter kullanarak boynunda paramedian bir cilt kesisi yapın; Damarları açığa çıkarmak için yumuşak dokuları forseps ile künt diseksiyon. Maruz kalan dokulara nemli kalmaları için bir damla salin ekleyin.
- Oftalmik forseps kullanarak ortak karotis arteri çevreleyen dokudan ve vagus sinirinden diseksiyon yapın. Vagus sinirine zarar vermemeye dikkat edin. Ortak karotis arter açığa çıktıktan sonra boynun derisini tekrar iyodofor ile dezenfekte edin.
- Ortak karotis arterin distal ucuna bir mikrodamar klempi yerleştirin ve ardından proksimal uçta 6-0 ipek dikişlerle ölü bir düğüm atın. Sonraki işlemler için kelepçeyi mümkün olduğunca yakına yerleştirin. Kelepçe ile ölü düğüm arasındaki kabın uzunluğunun sonraki işlemler için mümkün olduğu kadar uzun olduğundan emin olun.
- Gevşek bir düğüm bağlayarak kelepçeye proksimalde geçici bir dikiş atın. Monofilament yerleştirme için iki düğüm arasında yeterli boşluk olduğundan emin olun.
- Mikro-oftalmik makasla iki düğüm arasında küçük bir uzunlamasına kesi yapın. Sonraki operasyonlar için insizyonun ölü düğüme mümkün olduğunca yakın olduğundan emin olun. Gemiyi kesmemeye dikkat edin.
- Arter lümenine girmek ve birkaç mm ilerletmek için kesiden 12 mm uçlu körelmiş bir monofilament yerleştirin. Monofilamentin ucunun etrafındaki gevşek düğümü sıkın ve ardından kelepçeyi çıkarın.
- LDF yazılımı kan akışında keskin bir düşüş (başlangıç kan akışından %>80 azalma) gösterene kadar filamenti oftalmik forseps ile iç karotid artere (orta serebral arteri tıkamak için 10 mm) ilerletin. Oklüzyonun başlangıç zamanını kaydedin.
- Orta serebral arteri 1 saat boyunca tıkayın. LDF probunu kesin ve fareleri oklüzyon süresi boyunca 30 ° C'lik bir inkübatöre koyun.
- Reperfüzyon ve Asidik Son Koşullandırma (APC):
- Oklüzyonun başlangıç zamanından 55 dakika sonra hayvanları yukarıda anlatıldığı gibi izofluran ile yeniden uyuşturun. Fareleri sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve sabitleyin. Boyun kesisini açın ve ortak karotis arteri yeniden ortaya çıkarın.
- Reperfüzyon elde etmek için oklüzyon döneminden sonra oftalmik forseps ile filamenti nazikçe dışarı çekin ve düğümü sıkarak geçici ipliği kalıcı hale getirin.
- Asidoz tedavisi için, burun konisi tarafından solunan gazı, reperfüzyondan 5, 50 veya 100 dakika sonra 5 dakika boyunca% 20CO2,% 20O2 ve% 60N2 içeren gazların karışımına değiştirin. Kesi kesilen bir cerrahi dikiş ile kapatın.
- Fareler bilinçlerini geri kazanana kadar fareleri 30 ° C'lik bir ısı kafesine yerleştirin ve ardından fareleri temiz, bireysel kafeslere geri koyun. Farelere bir Petri kabı su ve nemli yiyecek sağlayın. Ameliyattan sonra fareleri aşırı ağrı ve ölüm açısından yakından izleyin.