Glukozdan Yoksun Nöroblastom Hücrelerinde Atmosferik Basınç Plazma Tedavisinin Değerlendirilmesi

Özet

Kaynak: Yan, X., et. al., SH-SY5Y Hücrelerinin Glikoz Yoksunluğuna Bağlı Hasara Karşı Nöro-Koruyucu Ajan Olarak Atmosferik Basınçlı Plazma Jetinin Yeni Uygulaması. J. Vis. Uzm. (2017)

Video, oksidatif stresi modüle ederek ve hücre canlılığını artırarak glikozdan yoksun nöroblastom hücrelerinde düşük doz atmosferik basınçlı plazma tedavisinin nöroprotektif aktivitesini göstermektedir.

Protokol

1. SH-SY5Y'nin APPJ (Atmosferik Basınçlı Plazma Jet) tedavisi

1. Kuvars tüpün nozulu ile 96 oyuklu plakanın yerleştirileceği platform arasındaki mesafeyi 3 cm'ye ayarlayın. Işının kültür ortamının yüzeyine temas edebildiğinden emin olun.
   NOT: Mesafe, plakanın altından ölçülmez. İlk olarak kuvars tüpün nozulu ile 96 oyuklu plakayı yerleştirmek için kullanılan platform arasında 3 cm'ye ayarlanır.
2. APPJ (Atmosferik Basınçlı Plazma Jet) işleminden önce, kontrol kuyuları hariç her kuyucuktaki kültür ortamını glikoz ortamı içermeyen RPMI 1640 olarak değiştirin.
3. Plakayı APPJ nozulunun altına yerleştirin ve jetlerin her bir kuyucuğa dikey olarak ateş edebildiğinden emin olun.
4. Hücreleri 0 s, 1 s, 2 s, 4 s, 8 s ve 12 s.
   NOT: APPJ, helyumun iyonlaştırılmasıyla üretilir (Şekil 1). Glikoz yoksunluğundan zarar gören hücreler, helyumun hücreler üzerindeki etkilerini ortadan kaldırmak için 4 s ve 8 s helyum akışı ile tedavi edilir. Tüm tedaviler üç nüsha halinde yapılmalıdır.

2. Hücre Canlılığı Testi

NOT: Bu adımda ortamı değiştirmeyin.

1. APPJ işleminden sonra, hücreleri bir hücre inkübatöründe 1 saat inkübe edin.
2. Her kuyucuğa 10 μL Hücre Sayma Kiti-8 (CCK-8) çözeltisi ekleyin.
3. Hücreleri 37 ° C'de 4 saat boyunca inkübe edin < > NOT: SH-SY5Y hücre hattı, glikoz yoksunluğu koşullarına duyarlıdır. Hücre canlılığı, farmakodinamik çalışmalar için en uygun hücre canlılığı koşulu olan 1 saatlik glikoz yoksunluğundan sonra yaklaşık% 50'ye düşer. CCK-8'in hücreler için sitotoksisitesi yoktur ve hücreler, hücre canlılığını kontrol etmek için APPJ tedavisinden sonra glikoz yoksunluğu koşullarında 4 saat daha CCK-8 reaktifi ile inkübe edilir. 8 saatlik glukoz yoksunluğu ve APPJ tedavisinden sonra, APPJ'nin koruyucu etkisi önemli ölçüde azalmıştır, çünkü uzun süreli glukoz yoksunluğu SH-SY5Y hücrelerinde ciddi hasara yol açmıştır. 24 saatlik glikoz yoksunluğundan sonra canlı hücrelere dair bir kanıt yoktu.
4. Bir mikroplaka okuyucu ile 450 nm'de absorbansı ölçün.

Sonuçlar

Şekil 1: APPJ (Atmosferik Basınçlı Plazma Jet) emisyonlarında tipik RNS (Reaktif nitrojen türleri) ve ROS (Reaktif oksijen türleri) reaksiyonları.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
SH-SY5Y hücre hattı	Çin Tip Kültür Koleksiyonu Merkezi	3111C0001CCC000026
RPMI 1640 orta	Thermo Scientific	21875091	4 °C'de saklanır
RPMI 1640 orta glikoz içermez	Thermo Bilimsel	11879020	4 °C'de saklanır
Fetal buzağı serumu	Thermo Scientific	16000044	-20 °C'de saklanır
96 kuyu plakası	Corning	3599
Hücre Sayma Seti-8 (CCK-8)	Dojindo Laboratories	CK04	4 °C'de saklanır
Mikroplaka okuyucu	Tecan	M200 Pro	450 nm'de absorbansı ölçmek için
Yüksek voltajlı Güç Amplifikatörü	Trek	PD06087	Gücü yükseltmek için
Fonksiyon Sinyal Üreteci	MaZe Elektronik Bilim ve Teknoloji	AT30120	Belirli sinyali sağlamak için
Yüksek Gerilim Probu	Tektronix	P6015A	Yüksek voltajı tespit etmek için
Dijital Osiloskop	Tektronix	DPO4104B	Sinyali görüntülemek için