Yakın Kızılötesi Floresan Görüntüleme Kullanılarak Fare Serebral Trombüsünün Görselleştirilmesi

Hayvan örneklerini içeren tüm prosedürler, uygun hayvan etik inceleme komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.

1. Beyin Dokusunun Ex Vivo Yakın Kızılötesi Floresan (NIRF) Trombüs Görüntülemesi

1. Dekapitasyondan sonra, kafa derisini çıkarın ve foramen magnumdan sagital sütüre doğru makasla kafatasını kesin. Altta yatan beynin yaralanmasını önlerken, kesilen kafatasının kenarlarını makas kullanarak dikkatlice yükselterek kraniyal tonozu çıkarın, böylece yarım küreleri çıplak bırakın.
2. Beyin tabanındaki optik sinirleri beyin yüzeyine mümkün olduğunca yakın kesin, çünkü yakın kızılötesi floresan (NIRF) görüntülemede görüntülenmesi gereken Willis (COW) arterlerinin çemberi ile örtüşebilirler. Daha sonra, NIRF trombüs görüntülemesi için Y şeklindeki 'orta serebral arter (MCA) / anterior serebral arter (ACA) / distal internal karotid arter (ICA)'yi görselleştirmek için, kesme noktalarını ortaya çıkarmak için serebellar tabanı nazikçe sıkıştırdıktan sonra distal ICA'ları beyin yüzeyine mümkün olduğunca kesin (Şekil 1A).
3. Çıkarılan beyin dokusunun tabanı yukarı bakacak şekilde NIRF görüntülemesini (uyarma / emisyon, 675 / 690 nm; 1 saniye maruz kalma) gerçekleştirin (Şekil 1B, C), bu da COW arterlerinde floresan olarak işaretlenmiş tromboemboliyi görselleştirir (Şekil 1D). Ardından, beynin tepe noktası yukarı bakacak şekilde ek görüntüleme yapın, bu da kortikal tromboemboliyi görselleştirir. Dokuya birkaç damla salin koyarak beyni kurutmaktan kaçının.

Şekil 1: Serebral Tromboemboli'nin Ex Viv o Yakın Kızılötesi Floresan (NIRF) Görüntülemesine Genel Bakış.(A ve B) Tromboembolik inme geçiren bir fareden temsili bir beyin dokusu çıkarıldı. Beyni çıkarırken distal internal karotid arterin orta serebral arter (MCA) – anterior serebral arter (ACA) bifurkasyon alanındaki tromboembolileri (kırmızı ok) kaybetmemek için önlem alın (ICA, mavi oklar). (C ve D) Ex vivo NIRF trombüs görüntüleme. Beyin dokusu, MCA-ACA bifurkasyon alanının embolik oklüzyonundan önce Siyanin 5.5 (Cy5.5) floresan işaretleyici C15 ile önceden etiketlenmiş trombüsün (D'deki kırmızı ok) görselleştirilmesi için bir NIRF görüntüleyicinin (C) ışık geçirmez odasının içine yerleştirilir.