Glioblastoma için İmmünkompetan Bir Fare Modelinin Biyolüminesans Görüntülemesi

Bu makalede

Özet

Kaynak: Clark, A.J., et al. Glioblastoma için İmmün Yetmezliği Olan Bir Hayvan Modelinin Biyolüminesans Görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu video, tümör büyümesini non-invaziv olarak ölçmek için lusiferaz eksprese eden tümör hücreleri ve lusiferin kullanarak, immün yetmezliği olan bir fare modelinde glioblastoma ilerlemesini izlemek için biyolüminesans görüntülemeyi göstermektedir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. GL261 Tümör Büyümesinin Biyolüminesans Görüntülemesi

Temiz bir kağıt havlu üzerine bol miktarda dezenfektan (% 0.05 dimetil amonyum klorür çözeltisi) püskürtün. Hayvanların cihazla temas edeceği görüntüleme odasının içindeki siyah çarşafı, burun konilerini ve bölücüyü iyice silmek için dezenfektanla ıslatılmış kağıt havluyu kullanın. Tüm yüzeyleri temiz, kuru bir kağıt havluyla iyice silin. Bunu bir kez daha tekrarlayın ve 5 dakika bekleyin.
Görüntüleme istasyonunu başlatın.
Fareyi intraperitoneal enjeksiyon ile 200 μl Ketamin / Ksilazin ve 100 μl lusiferin (D-Luciferin potasyum tuzu, 150 mg / kg) içeren 300 μl'lik bir karışımla uyuşturun.
Enjeksiyondan sonra 10 dakika bekleyin ve kuyruğu sıkıştırarak farelerin tamamen anestezi altında olup olmadığını onaylayın. Görüntüleme sistemini kurmak için "Lüminesan", "Otomatik" pozlama süresi ve "Orta" gruplamayı seçin. Fareleri görüntüleme istasyonuna yerleştirin ve görüntüyü başlatmak için "Al" düğmesine tıklayın. Enjeksiyondan sonraki sürenin her görüntüleme seansı ile tutarlı olduğundan emin olun.
Görüntü başarıyla alındıktan sonra, bir görüntü penceresi ve araç paleti görünmelidir. İlgilendiğiniz bölgeyi (ROI) veya "ROI Araçları"na tıklayın ve daire simgesinden "otomatik"i seçin. ROI'leri tanımlamak için, görüntüdeki sinyal alanını daire içine alın ve ardından ROI'nin ölçümlerini bir foton/sn/sr/cm2 birimi olarak alın.
Fareleri görüntüleme odasından çıkarın ve ambulant hale gelene ve normal aktivitelerini koruyana kadar izleyin. Tipik olarak, iyileşme süresi yaklaşık 15 dakikadır. Anesteziden tamamen iyileşene kadar fareleri diğer hayvanlarla birlikte kafese geri koymayın.
Hayvanlar aşağıdaki semptomları gösterene kadar haftada iki kez biyolüminesans görüntüleme ile tümör büyümesini izleyin: kilo kaybı (implantasyondan önceki ağırlığa göre% 20'den fazla kayıp), iştahsızlık (24 saat boyunca tam iştahsızlık) ve hafif uyaranlara sürekli amaçlı yanıt eksikliği (zayıf kalkma girişimi), bu sırada ötenazi yapılması gerekir.
Lüminesans değerlerini, biyolüminesans görüntülemenin ilk gününde elde edilen karşılık gelen okumalara karşı her gün için normalleştirin (Şekil 1A).
İstatistiksel analiz için, Kaplan-Meier tahmincisini kullanarak hayatta kalma eğrileri oluşturun ve bir log-rank testi kullanarak hayatta kalma eğrileri arasındaki farkları karşılaştırın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 1. Lusiferaz ekspresyonu etkilemez in vivo tümör büyümesi ve hayvan sağkalımı. (A) Biyolüminesans izleme, intrakraniyal GL261'in ilerleyici büyümesini gösterir. C57BL / 6 farelerinde Luc (lusiferaz eksprese eden GL261 glioblastoma hücreleri) tümörü....