Yöntem makalesi

Peptit Kendi Kendine Montajını İncelemek için Bir Fourier Dönüşümü Kızılötesi Spektroskopi Tekniği

13 Ağustos 2025

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Neves, R., et al. 1,2-Dithiolane Modifiye Kendi Kendine Birleşen Peptitlerin Sentezi ve Karakterizasyonu. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu video, amiloid peptitlerin Fourier dönüşümü kızılötesi spektroskopisi kullanılarak beta tabakası açısından zengin bir supramoleküler yapıya kendi kendine montajını göstermektedir. Bir kızılötesi ışın, yüksek kırılma indisine sahip bir kristalden geçirilir ve kristalin ve numunenin arayüzü boyunca enerji emilimi kaydedilir. Numune proteinlerinin ikincil yapıları, supramoleküler düzeneğin oluşumunu tanımlamaya yardımcı olan kızılötesi spektrumun belirli bölgelerindeki karakteristik absorpsiyon zirveleri analiz edilerek tanımlanır.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Supramoleküler Kendi Kendine Birleşen Yapıların Karakterizasyonu

  1. Amiloid Liflerinin Oluşumu
    1. Kendi kendine montaj çözeltisi hazırlamak için, analitik bir terazi kullanarak 1 mg peptit tozunu tartın. 1.5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpünde% 20 asetonitril ve 10 mM (4- (2-hidroksietil) -1-piperazineetansülfonik asit (HEPES) karışımı (pH 7.5) içinde, 1 mg / mL peptit montaj karışımının nihai konsantrasyonuna kadar çözün. Montaj solüsyonunu girdaplayın ve oda sıcaklığında montaja bırakın.
  2. Amiloid Liflerinin Spektroskopik Karakterizasyonu
    1. Birkaç günde bir Fourier dönüşümü kızılötesi (FTIR) spektroskopisi ile peptit montaj sürecini takip edin. 1670 cm-1 etrafında merkezlenmiş geniş bir tepe, numunedeki birleştirilmemiş peptitlerden kaynaklanan IR imzasıdır. Peptit montaj numuneleri, geniş birleştirilmemiş zirvenin kaybolması ve olgunlaşmaya ulaşması için genellikle bir ila iki hafta sürer.
      1. ATR elmas kristali üzerinde ince bir film olarak montaj çözeltisinin 8-10 μL'lik bir alikotunu kurutun. Kuru film oluşurken 1640 ila 1630 cm-1 arasında büyük ve geniş bir su zirvesinin kaybolmasını izleyin.
      2. 1500-1800 cm-1 arasında, 2 cm-1 çözünürlükte ortalama 50 tarama ile IR spektrumları elde edin. Her örnek taramasından önce arka plan taramalarını alın ve çıkarın. β tabakalı montaj için IR imzası, 1625 ile 1635 cm-1 arasında keskin bir tepe noktasıdır (Şekil 1A).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

FTIR spektrumları 1627/1676 cm⁻¹ (A), CD spektrumu 190-270 nm (B), TEM nanofiberler 100 nm ölçek (C).
Şekil 1. 1,2-ditiolan modifiye peptidin supramoleküler karakterizasyonu. (A) FT-IR 1 mg / mL 1,2-ditiolan-KLVFFAQ-NH2 lifleri 10mM HEPES içinde birleştirilmiş,% 20 CH3CN'de pH 7.5. 1627 cm-1'deki zirve, β tabakalı bir konfor...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmemiştir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
AsetonitrilFisher ScientificA998-4Yanıcı; gözleri tahriş eder; Kişisel koruyucu ekipman kullanın; Yalnızca çeker ocak altında kullanın; açık alevden veya sıcak yüzeyden uzak tutun; Temas halinde en az 15 dakika su ile durulayın ve tıbbi yardım alın
. 4- (2-Hidroksietil) piperazin-1-etansülfonik asitAcros OrganicsAC172571000Solumayın; açık havada veya iyi havalandırılan bir alanda kullanın
Fourier Dönüşümü Kızılötesi SpektrometresiAlfa Tensörü, Bruker

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Beta Tabakas Olu umuATR KristaliK z l tesi Spektrum AnaliziEvanesant DalgaDalga Say s l mAmyloid PeptitlerSupramolek ler Yapkincil Yap Tan mlama

İlgili makaleler