Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
Motor Uç Plakalarında Kas İçi Enjeksiyonlar
- Cam mikropipetleri bir mikropipet çekicisi ile çekin (pistonlu kademeli mikropipetlerin kullanılması önerilir). Bir diseksiyon mikroskobu yardımıyla, mikropipetlerin uçlarını, mikropipetin lümeninin iç çapı yaklaşık 0,5 mm olacak şekilde bir çift forseps ile kırın.
- Kullanılan tüm cerrahi aletlerin yeni otoklavlanmış olduğundan ve cerrahi alanın steril olduğundan emin olun.
- Mikropipetleri Floro-Altın (damıtılmış suda% 5) ile doldurun.
- Bir indüksiyon odasında İzofluran (O2'de% 4) kullanarak hayvanda anesteziyi indükleyin. Doğrultma refleksini kontrol edin ve indüksiyon odasından çıkarmadan önce yokluğundan emin olun. Sıçanın burnunun üzerine bir burun konisi sabitleyin ve anestezinin sürdürülmesi için İzofluran (O2'de% 2) verin. Hayvanın ayak parmaklarını sıkıştırın ve hem pedal çekilmesinin hem de kornea reflekslerinin olmadığından emin olmak için hayvanın gözüne hafifçe dokunun.
NOT: Ketamin ve ksilazin karışımı da kullanılabilir (sırasıyla 80 ve 10 mg / kg, intraperitoneal olarak verilir). Ketamin, Çizelge 8 ("Kontrollü") bir ilaçtır ve ilacın satın alınması, kullanılması, depolanması ve atılması ile ilgili gerekli protokollere uyulması gerekecektir. - İşlem sırasında gözlerin kurumasını önlemek için göz kayganlaştırıcı uygulayın.
- Hedeflenen uzvu tıraş edin ve traş edilen alanı üç alternatif klorheksidin ve% 70 alkol fırçasıyla silmek için gazlı bez kullanın. Hayvanı cerrahi alana aktarın.
- Hayvanı temiz bir alt ped üzerine yerleştirin ve hedeflenen kas(lar)a iyi erişim sağlamak için uygun şekilde konumlandırın.
- Hedeflenen kasın üzerindeki cildi alttaki kas sisteminden uzaklaştırmak için diş tutamaklı bir çift forseps kullanın ve cerrahi makasla ciltte bir kesi yapın. Kesinin, ilgilenilen kas(lar)ı tamamen açığa çıkaracak kadar büyük olduğundan emin olun. Ön panoda minimum bozulma olduğundan emin olun.
- MEP bölgesinin konumunu ve şeklini kas(lar)a zihinsel olarak aktarmak için motor uç plakası (MEP) fotoğraflarını kullanın.
NOT: İnce keçeli bir işaretleyici, fotoğraftaki MEP bölgesinin ilgilenilen kas(lar) üzerine yeniden üretilmesine yardımcı olabilir. - MEP bölgesinin tüm uzunluğu boyunca birden fazla enjeksiyon yapın (Fluoro-Gold için, her biri 1-2 μl'lik 3 ila 4 enjeksiyon yeterli olmalıdır). Herhangi bir sızıntıyı gidermek için kasları nazikçe silin.
- Kesilen derinin iki ucunu künt forseps ile birbirine yaklaştırın ve yarayı cerrahi klipslerle kapatın. Yaranın tüm açıklığı boyunca 0.1 ml Bupivakain (suda% 0.5) (veya diğer lokal anestezikler) sızın.
- Anestezik makinesini kapatın ve anesteziden tamamen iyileşene kadar hayvanı izleyin.
- Kas içi enjeksiyonların uygulanması ile hayvanların perfüzyonu arasında 14 gün bekleyin.
