Lipozomal Kompleksler Kullanılarak Prion Protein Susturması için Nöronlara Hedeflenen siRNA Dağıtımı

Özet

Kaynak: Bender, H. R., et.al. Terapötik siRNA'nın katyonik ve anyonik lipozomlar kullanılarak CNS'ye verilmesi. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu video, prion proteini (PrP) siRNA'nın lipozomal siRNA-peptit kompleksleri (LSPC'ler) kullanılarak nöronlara hedefli dağıtımını göstermektedir. Katyonik lipozomlar, kan-beyin bariyeri boyunca reseptör aracılı taşıma için RVG-9r peptidi tarafından daha da stabilize edilen PrP hedefleme siRNA'yı elektrostatik olarak bağlar. Beynin içine girdikten sonra, LSPC'ler nöronlarda endositoza uğrar, RNA girişimini başlatmak için siRNA'yı serbest bırakır, PrP ekspresyonunu azaltır ve prion hastalığının ilerlemesini kesintiye uğratır.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. LSPC'lerin Hazırlanması LSPC'ler

1. için 1: 1 DOTAP (1,2-dioleoil-3-trimetilamonyum-propan) kullanın: kolesterol oranı. 4 nmol lipozom hazırlığı için, 2 nmol DOTAP ve 2 nmol kolesterolü bir şişede 10 ml 1: 1 kloroform: metanol çözeltisine karıştırın.
2. Bir davlumbazda N₂ gazı kullanarak 9 ml kloroform: metanol çözeltisini buharlaştırın. Son 1 ml çözücüyü bir çeker ocakta gece boyunca gazsız olarak buharlaştırın. Şişenin dibinde ince bir lipit filmi gözlemleyin.
3. 10 ml% 10'luk bir sükroz ....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
DOTAP lipid	Avanti Lipids	890890
Kolesterol	Avanti Lipidleri	700000
Kloroform	Fisher Scientific	AC268320010
Metanol	EMD Millipore 113351
N₂ Gazlı	AirGas
Sükroz	Fisher Scientific	S5-500
Ekstruder	Avanti Lipids	610023
1.0, 0.4 ve 0.2 μm filtreler	Avanti Lipids	610010, 610007, 610006