$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Hayvan Hazırlama
Notu: Hafif yaralanma geçirecek hayvanlar, uzak iskemiden önceki gece koyu adaptasyona ihtiyaç duyarlar. Işık hasarı geçiren hayvanlar karanlık yetiştirme gerektirir (12 saat ışık: karanlık döngü, 5 lüks)
- Uyanık veya anestezi uygulanmış kemirgenlerde uzak iskemi gerçekleştirin. Hayvanların sağlıklı bir kas tonusuna sahip olduğundan emin olun. Yeterli kas olduğunu doğrulamak için üst arka uzuvu sıkıştırarak bunu sağlayın. Hafif yaralanmalara karşı RIP kaynaklı koruma, 6 aya kadar olan hareketsiz sıçanlarda test edilmiştir.
- Uzaktan iskemik ön koşullandırma (RIP) için anestezi uygulanmış hazırlık
- Sıçanlara 60 mg / kg ketamin ve 5 mg / kg ksilazin intraperitoneal enjeksiyonu enjekte edin. Bacağınızı uzatarak ve ayağın alt tarafındaki cildi sıkıştırarak anestezi derinliğini kontrol edin. Hayvanın derin anestezi uygulandığında refleksi yoktur. Anestezi altındayken kornea kuruluğunu önlemek için suni gözyaşı uygulayın.
- 37.5 ° C'lik sabit bir vücut sıcaklığını korumak için fareleri bir ısıtma yastığı veya sirkülasyonlu su ısıtıcı borusu üzerine yerleştirin. Fareyi, alt ekstremitelerin ayak pedleri yukarı bakacak şekilde yüzüstü pozisyonda konumlandırın. Sağ veya sol ekstremite uzak iskemi geçirebilir.
2. Cilt Sıcaklık Probunun Uygulanması
:
- İskemi geçirecek olan farenin bacağını uzatın ve cilt probunu ayak pedine yerleştirin. Sıcaklık probu ile cilt arasındaki teması en üst düzeye çıkarmak için cilt probunu konumlandırın. Probu ayak pedine sıkıca itin ve probu kağıt bantla yapıştırın.
- Sıcaklık kayıt yazılımındaki sıcaklığı takip ederek cilt probu yerleşimini kontrol edin. Cilt sıcaklığının 30-34 °C arasında olduğundan ve sabit kaldığından emin olun. Cilt sıcaklığını 1-2 dakika takip edin. Sıcaklık kararsızsa veya 30 °C'nin altındaysa cilt probunu ayarlayın.
3. Uzaktan İskemi
- Manşeti söndürün ve hava basınç valfinin kapalı olduğundan emin olun. Bacağınızı uzatın ve manşeti üst arka bacakta gevşek bir şekilde sarın. Bacağınızı uzatmak için işaret parmağınızı ve başparmağınızı kullanın ve gevşemiş manşeti yerinde tutmak için alt rakamları kullanın.
- Anestezi uygulanmış hayvanın manşet basıncını 160 mmHg'ye yükseltin ve uyanık hayvanlarda manşet basıncını 180 mmHg'ye yükseltin.
Not: Sıçanların anestezi altındaki kan basıncı 120-140 mmHg arasında değişir ve bilinçli olduğunda 160 mmHg'ye yükselir. Doğru basınca ulaşıldığında zamanlayıcıyı ve ayak sıcaklığı kayıtlarını başlatın.
Not: 2 dakikalık sabit basınçtan sonra ayak sıcaklığı 5 °C düşmelidir. - Manşetin pozisyonunu iskemi boyunca hayvanın "dizinin" üzerinde tutun. Manşet basıncı birkaç dakika sonra veya farenin uzvu hareket ediyorsa düşmeye başlayacaktır.
- İstenen manşet basıncını korumak için şişirme ampulünü kısa aralıklarla tekrar tekrar pompalayın, tekrarlayan kısa pompalama patlamaları
- Uzaktan iskemi 5 ila 15 dakika arasında sürekli olarak verilebilir. İskemi reperfüzyon protokolü, 5 dakikalık iskemi ve 5 dakikalık reperfüzyondan oluşan 2 periyodu içerir.
- Hava basınç valfini gevşeterek manşet basıncını söndürün. İskemi protokolü boyunca sıcaklık değişimini kontrol edin. Manşeti serbest bırakın.
- Yaralanma deneylerine devam edin. Anestezi etkisi altındaki hayvanların bir ısı yastığına yerleştirilmesi gerekecektir. Ambulatuvar olana kadar hayvanları izlemeye devam edin. Hayvanlar yürüyene kadar barınağa geri gönderilemez.