Dopamin Yüklü Bir Eksozom Taşıyıcı Sisteminin Formüle Edilmesi

Özet

Kaynak: Yavuz, B., et al. Eksozom Bazlı Dopamin Taşıyıcı Sistemin Formüle Edilmesi ve Karakterize Edilmesi. J. Vis. Uzm. (2022)

Bu video, eksozomlar içinde dopamin kapsüllemesini geliştirmek için saponin kaynaklı zar geçirgenliğine odaklanan dopamin yüklü eksozomların formülasyonunu göstermektedir.

Protokol

1. Eksozomlara dopamin yüklemesi

NOT: Wharton's Jelly mezenkimal kök hücreleri (WJ-MSC'ler) eksozomlarının karakterizasyonu tamamlandıktan sonra, ilaç taşıyıcı sistem olarak dopamin yüklü eksozomlar elde edildi. Eksozomlara ilaç yüklemesi inkübasyon yöntemi kullanılarak gerçekleştirilir.

1. Eksozom süspansiyonuna 3 mL fosfat tamponlu salin (PBS) ekleyin. Seyreltilmiş süspansiyonu 0.22 μm filtreler kullanarak filtreleyerek sterilize edin. Sterilize edilmiş eksozom süspansiyonunun 500 μL'sini başka bir tüpe aktarın.
2. Damıtılmış su ile dopamin çözeltisi (0.5 mg / mL) hazırlayın. Eksozomları içeren tüplere 500 μL dopamin çözeltisi ekleyin.
3. Adım 1.2'de süspansiyona saponin ekleyin. Hazırlanan eksozom-dopamin süspansiyonunu 37 ° C'de 24 saat inkübe edin. NOT: Saponin konsantrasyonu toplam çözeltinin% 0.002'sini geçmemelidir.
4. Ortamdan serbest dopamin ve saponini çıkarmak için süspansiyonu 70 dakika boyunca 90.000 × g'da ultrasantrifüj edin. İzole edilmiş eksozomları daha fazla analiz için kullanılana kadar -20 °C'de saklayın. not: Hazırlanan dopamin çözeltisinin stabilitesi için% 0.02 askorbik asit ekleyin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
0.22 μm membran filtre	Aisimo		Sterilizasyon işlemi için kullanılır
15 mL Falcon tube	Nest		Hücre kültürü adımında kullanılır
50 mL Falcon tube	Nest Hücrede		kullanılır kültür adımı
Santrifüj	Hitachi	CF16RN	Eksozom izolasyon adımında kullanılır
Dopamin hidroklorür H8502-10G	Sigma	H8502-10G	Eksozom dopamin yüklemesinde kullanılır
Optima XPN-100 Ultrasantrifüj	Beckman Coulter		Eksozom izolasyon adımında kullanılır
PBS tablet	Biomatik	43602	PBS çözeltisinin hazırlanmasında
Saponin	Sigma	47036-50G-F	eksozom dopamin yükleme işleminde toplam çözeltiye ilave edilerek kullanılmıştır.
Wharton'un jöle mezenkimal kök hücreleri	ATCC