Üç Fotonlu Floresan Mikroskobu Kullanılarak Bir Zebra Balığı Beyninin Derin Doku Görüntülemesi

Özet

Kaynak: Hontani, Y., et al. Sağlam fare ve zebra balığı beyninde derin doku üç fotonlu floresan mikroskobu. J. Vis. Uzm. (2022)

Bu video, anestezi uygulanmış bir zebra balığı beyninde üç fotonlu görüntülemenin kurulumunu ve yürütülmesini göstermektedir. Protokol, floresan etiketli nöronların derin doku görselleştirmesini sağlayarak, sinirbilim araştırma uygulamaları için gerçek zamanlı nöronal aktiviteyi ve yapıları ortaya çıkarır.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Zebra balığı beyninde intravital görüntüleme
   NOT: Balık beynini objektif merceğin altına düzgün bir şekilde yerleştirmek için, geniş alan görüntüleme için uyarma ışığıyla aynı yolda ikincil bir şarj bağlantılı cihaz (CCD) kamerası kullanılır.
   
   1. Mikroskobu kurun ve gücü kalibre edin.
   2. Mikroskoba düşük büyütmeli (tipik olarak 4x) bir objektif yerleştirin.
   3. Balıkları ve tüpleri içeren Petri kabını mikroskop altına yerleştirin.
   4. Petri kabını aydınlatm....

Sonuçlar

Şekil 1: Balıklarda intravital Görüntüleme için temsili ekran görüntüleri (protokol bölüm 1). (Bir) 4x objektif lens yerinde iken görüntü elde etme yazılımının kamera modu görünümü. Yazılımın temel özellikleri aşağıdaki gibi.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
5% Povidon-iyot	Amazon	NDC 67818-155-32	Cerrahi alanların aseptik temizliği
%70 Etanol	Thermo Fisher Scientific	CAS 64-17-5	Cerrahi alanların aseptik temizliği
Agarose	Sigma	A4718-256	Zebra balığı odasının hazırlanması
Bergamo II	Thorlabs		Multifoton Görüntüleme Mikroskobu
Bupivakain	Cornell Veteriner Bakımı
GaAsP Güçlendirilmiş PMT	Thorlabs	PMT2100	PMT dedektör
Isıtıcı (800 W)	Finnex		Akvaryum ısıtıcısı)
Kimwipes	Zebra	balığı hazırlamak için Kimtech
36 G iğneli Nanofil şırınga (10 mikrometre)	WPI	NANOFIL + NF36BV	Pankuronyum bromür enjeksiyonu için şırınga ve iğne
Peristaltik Pompa	Elemental Bilim	ESI MP2	Zebra balığı kurulumu için su pompası
Polietilen boru (ID 0.58 mm., OD 0.965 mm.)	Elemental Science	MP2 pompa borusu	Zebra balığının ağzına giren boru
SR400	Stanford Araştırma Sistemleri	SR400	Foton sayacı
Standart Fotodiyot Güç Sensörü	Thorlabs	S122C	Güç dedektörü
İnce şerit boks mumu	Corning Rubber Co., Inc.		Zebra balığı odasında boruyu yerinde tutma
ThorImage	Thorlabs		Görüntü elde etme yazılımı
Trikain (Etil-m-aminobenzoat metansülfonat tuzu)	MP	103106	Zebra balığı anestezisi ve ötenazi
Tygon tüpü (ID 1/16 inç, OD 1/8 inç)	Zebra balığı hazırlığı için su akışı için	Tygon
VaporGuard	VetEquip	931401	İzofluranın geri dönüşümü için
Vetbond doku yapıştırıcısı	3M	1469SB	Cam pencereyi fare kafatasına yapıştırmak ve balığı hazırlarken laboratuvar dokusunu yapıştırmak için.
XLPLN25XWMP2	Olympus		Multifoton Uyarım Özel Objektifi

Zebra balığı suyu için Laboratuvar dokusu Boru