$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Orta Serebral Arter Oklüzyonu (MCAO) Fare Modeli
- , 6 haftalık ve 22-25 g ağırlığında erkek C57BL / 6 fare kullanın. Tüm hayvanlara standart yem ve suya ücretsiz erişim sağlayın ve onları kontrollü sıcaklığa (22 ±1 ° C) ve 12 saatlik aydınlık / karanlık döngüsüne sahip bir ortamda barındırın.
- Fareleri, sahte olarak çalıştırılan normal, kontrol ve Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GRex) tedavi gruplarından oluşması gereken altı fareden oluşan gruplara ayırın.
- Stereo mikroskop kullanarak kontrol ve GRex tedavi gruplarında MCAO ameliyatı yapın.
- % 70 azot oksit (N₂O) ve% 30 oksijen (O₂) içinde% 2 izofluran kullanarak farelerde inhalasyon anestezisini indükleyin. Farenin kuyruğuna uygulanan mekanik bir uyarana tepkisiz hale gelmesi durumunda anestezi yeterli kabul edilir. Bir termometreye bağlı vücut ısısını tutan bir battaniye kullanarak farelerin vücut ısısını 36,5 ± 0,5 °C'de tutun.
- Farelerin göğüslerindeki ve boyunlarındaki tüm tüyleri tıraş ederek ve ardından tüy dökücü krem kullanarak alın. Cildin cerrahi bölgesini iki kez alkolle dönüşümlü olarak betadin ovma ile dezenfekte edin ve ardından boynun ortasında cerrahi bir bıçakla yaklaşık 2 cm uzunluğunda bir kesi yapın. Sol ortak karotis arteri (LCCA), dış karotis arteri ve iç karotis arterin dalını çevredeki bağ dokularından dikkatlice izole edin.
- Ameliyat sırasında iç karotis artere kan akışını geçici olarak engellemek için dış karotis arteri ve ana karotis arteri cerrahi bir dikişle (4-0 ipek dikiş, yarım askı düğümü) bağlayın.
- Silikon kaplı bir naylon sütür (8-0 monofilament, 11 mm uzunluğunda) internal karotis arterden sol MCA'nın orijinine yerleştirin. Filamentin silikon kaplı kısmının kalınlığını 0.10-0.12 mm aralığına ayarlayın.
- Bir lazer Doppler akış ölçer kullanarak MCA'daki bağıl serebral kan akışındaki (rCBF) azalmayı ölçün. MCAO, rCBF tüm iskemik dönem boyunca dinlenme durumu değerlerinin <% 20'sinde tutulduğunda doğrulanacaktır.
- Serebral arter tıkalıyken yerleştirilen filamenti 2 saat boyunca kan damarına sabitleyin ve ardından 22 saatlik reperfüzyon için kan akışını eski haline getirmek için filamenti dikkatlice geri çekin. Cildi beş yerden dikerek (3-0 ipek dikiş, iki yarım düğüm) dikin ve her farenin anesteziden uyanmasına izin verin.