Bir sıçan modelinde akut elektrokonvülsif nöbetin indüklenmesi

Özet

Kaynak: Jang, S., et al, Postsinaptik Yoğunluk Proteinlerinde Nöbet Kaynaklı Değişiklikleri İncelemek İçin Sıçanlarda Elektrokonvülsif Nöbetler ve Hipokampuslarının Fraksiyonlanması. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu video, nöbetin neden olduğu nöroplastisiteyi incelemek için bir sıçan modelinde akut elektrokonvülsif nöbetin (ECS) indüksiyonunu göstermektedir. Araştırmacılar, kulak klipsi elektrotları aracılığıyla elektriksel stimülasyon uygulayarak nöronal hipereksitabiliteyi ve klonusu tetikler. Bu model, sinaptik plastisite, nöbet mekanizmaları ve elektrokonvülsif tedavi (EKT) ile ilişkili terapötik etkilerin araştırılmasına yardımcı olur.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Akut ECS'nin İndüksiyonu

NOT: Bkz. Şekil 1B, üst panel.

1. Kulak klipslerini steril tuzlu suyla ıslatın ve doymuş olduklarından emin olun.
2. Bir farenin kulaklarını tuzlu suya batırılmış gazlı bezle sararak steril tuzlu suyla ıslatın. Islandıklarında gazlı bezi çıkarın.
3. Her kulağa bir klips takın ve ana kıkırdak bandının ötesine yerleştirin.
4. ECS makinesinde gerçek bir döngünün kurulduğunu onaylayın; değilse, makinede bir hata mesajı veya "1" okuması görünecektir.
5. Kalın, metal olmayan bir eldiven giyin. Fareyi eldivenli bir elinde nazikçe tutarken, "ŞOK" düğmesine birkaç saniye basın ve nöbeti gözlemlemek için farenin üzerindeki tutuşu yavaşça bırakın. Sahte "nöbet yok" (NS) kontrolü için, fareyi aynı şekilde tutun, ancak akımı vermeyin.
6. Klonus başladığında kulak klipslerini çıkarın ve nöbet davranışını "ağız ve yüz hareketleri" (aşama 1), "baş sallama" (aşama 2), "ön ayak klonusu" (aşama 3), "ön ayak klonusu ile şahlanma" (evre 4) ve "ön uzuv klonusu ile şahlanma ve düşme" (evre 5) içeren revize edilmiş bir Racine ölçeğine göre kaydedin. Nöbet yaklaşık 10 saniye sürmelidir; Bir zamanlayıcı kullanarak nöbet süresini kaydedin.
7. Nöbet sona erdikten sonra, fareyi ev kafesine geri koyun. Sıçanın nöbetlerden kurtulduğundan emin olmak için sıçanı 5 dakika daha izleyin. Kafeste tek başına tutun ve kafesi uyanma odasına geri koyun.
8. Bir sonraki sıçan üzerinde ECS indüksiyonunu tekrarlayın.
9. Sıçanları günün geri kalanında ve deneyler için ötenazi yapılana kadar sabahları en az bir kez ve ertesi gün öğleden sonra bir kez izleyin.
   NOT: ECS indüksiyon yöntemi, dikkat gerektiren tesadüfi bir yan etki olarak klinik belirtilere yol açabilir. Örneğin, ECS indüksiyon protokolü, 15 saniyeden daha uzun süren nöbetlere neden olabilir ve sıçanlarda gereksiz sıkıntıya neden olabilir. Bu durumda, diazepam (10 mg / kg, i.p.) veya pentobarbital (25-30 mg / kg, i.p.) kullanarak nöbeti sonlandırın. Sıçanlar, nöbetin kesilmesini takiben solunum sıkıntısı veya ciddi davranışsal anormallikler geliştirirse, bunları karbondioksit soluma ve ardından dekapitasyon ile ötenazi yapın.

Sonuçlar

Şekil 1: Akut ECS ve kronik ECS'nin indüksiyonu için şema. (A) Bir sıçan, kulak klipsi elektrotları aracılığıyla bir nabız üretecine bağlandı ve evre 4-5 tonik-klonik nöbetleri ortaya çıkarmak için bir elektrik şoku (55 mA, ...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Sprague-Dawley faresi	Charles River Laboratories		ECS malzemeleri
darbe üreteci	Ugo Bsile, Comerio, İtalya	57800	ECS sarf malzemeleri

Bir