Bu video, konfokal mikroskopi ile yeşil floresan proteini (GFP) eksprese eden glioblastoma doku dilimlerinin görüntülenmesini göstermektedir. Tümör hücresi hareketini ve yönünü izlemek için tutarlı aralıklarla yüksek çözünürlüklü görüntüler yakalanır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Glioblastoma Dokusunda Tümör Hücresi Migrasyonunun Hızlandırılmış Taramalı Konfokal Mikroskopi Kullanılarak Görüntülenmesi
741 görüntülenme
⸱
17 Haziran 2025
Bu makalede
Özet
Protokol
Numune toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
1. Retrovirüs İfade Eden Yeşil Floresan Protein Yoluyla Tümör Hücresi Etiketleme
NOT: Tümör hücresi göçünün analizi için hızlandırılmış mikroskopi, dilim kültürü içindeki hücrelerin kararlı, uzun süreli floresan etiketlemesini gerektirir. Retrovirüsün kullanılması önerilmektedir, çünkü bölünen hücreleri seçici olarak enfekte eder, böylece dilim içinde bulunan mikroglia veya diğer hücre tiplerinin aksine tümör hücresi popülasyonu içindeki floresan etiketlemeyi zenginleştirir. Enfeksiyonun standardi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| DMEM Yüksek Glikoz | İnvitrojen (Gibco) | 11960-044 | |
| Neurobazal-A Orta, eksi fenol kırmızısı | Invitrogen (Gibco) | 12349-015 | |
| B-27 Takviyesi (50X), serum içermeyen | Invitrogen (Gibco) | 17504-044 | |
| Penisilin-Streptomisin (10.000 U/mL) | İnvitrojen (Gibco) | 15140-122 | |
| GlutaMAX Takviyesi | İnvitrojen (Gibco) | 35050-061 | |
| L-Glutamin (200 mM) | İnvitrojen (Gibco) | 25030-081 | |
| HEPES (1 M) | İnvitrojen (Gibco) | 15630-080 | |
| Nistatin Süspansiyon | Sigma-Aldrich | N1638-20ML | DPBS'de 10.000 birim / mL, aseptik olarak işlenmiş, BioReagent, hücre kültürü için uygun |
| UltraPure Düşük Erime Noktalı Agaroz | Invitrogen (Gibco) | 16520-050 | 65.5 ° C'de erir, 37 ° C'de sıvı kalır ve hızla 25 ° C'nin altına düşer. |
| Griffonia simplicifolia'dan İzolektin GS-IB4, Alexa Fluor 647 Konjuge | Thermo Fisher (Moleküler Problar) | I32450 | Mikroglia/Makrofajları etiketlemek için medyada kullanılır |
| pRetroX-IRES-ZsGreen1 Vector | Clonetech | 632520 | |
| Retro-X Konsantratör | Clonetech | 31455 | Viral süpernatanların ultrasantrifüj olmayan konsantrasyonu için bağlayıcı reçine |
| pVSG-G Vektör | Clonetech | 631530 | Retro-X Evrensel Retroviral Ekspresyon Sisteminin bir parçası |
| GP2-293 Viral paketleme hücreleri | Clonetech | 631530 | Retro-X Evrensel Retroviral Ekspresyon Sisteminin bir parçası |
| Siyanoakrilat Tutkal (Süper Yapıştırıcı) | Sigma-Aldrich | Z105899 | Orta viskoziteli |
| Peel-A-Way Gömme Kalıbı (Kare - S22) | Polysciences, Inc. | 18646A-1 | Tümör örneği gömme için kalıplar |
| Paslanmaz Çelik Mikro Spatulalar | Fisher Scientific | S50823 | Kaşık bıçağının boynunda 45 derece bükme aleti |
| Kavisli Fisherbrand Diseksiyon İnce Uçlu Forseps Fisher | Scientific | 08-875 | |
| Tek Kenarlı Tıraş Bıçağı (Amerikan Emniyetli Tıraş Makineleri) | Fisher Scientific | 17-989-001 | Bıçak kenarı 0,009" kalınlığındadır. Vibratom üzerine yüklenmeden önce kıvrımlı künt kenarlı kapak çıkarılır. |
| Leica VT1000 S Vibratom | Leica Biosystems | VT1000 S | |
| Hidrofilik PTFE hücre kültürü eki | EMD Millipore | PICM0RG50 | 30 mm, hidrofilik PTFE, 0,4 μm gözenek boyutu |
| 35 mm Cam Alt Tabaklar | MatTek | P35G-1.5-20-C Kılıf | 20mm cam çapı. Lamel cam kalınlığı 1.5 |
| LSM 510 Konfokal Mikroskop | Zeiss | LSM 510 | 10x Hava Objektifi (c-Apochromat NA 0.45) |
| PECON Sahne Üstü İnkübatör | PeCON Almanya | (Üretimi Durduruldu) | İnkübatör PM 2000 RBT, Zeiss Mikroskopları ile kullanılmak üzere tasarlanmış uyumlu bir üründür. |
