Nöromüsküler Kavşak Rejenerasyonunu İncelemek İçin Bir Farede Fibular Sinir Yaralanmasına İndükleme

Özet

Kaynak: Dalkin, W., et al. Fibular sinir yaralanması yöntemi: nöromüsküler kavşakları onaran faktörleri belirlemek ve test etmek için güvenilir bir test. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu video, nöromüsküler kavşak (NMJ) rejenerasyonunu incelemek için bir farede fibular sinir yaralanmasını indüklemek için cerrahi bir prosedürü göstermektedir. Prosedür, fibula sinirinin açığa çıkarılmasını, yaralanmayı indüklemek için kontrollü basınç uygulanmasını ve aksonal rejenerasyonu desteklemek için epinöryumun sağlam kalmasını sağlamayı içerir. Zamanla, makrofajlar aksonal kalıntıları temizleyerek sinir onarımını ve NMJ'lerin yeniden kurulmasını kolaylaştırır.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Hayvanların Ameliyata Hazırlanması

:

1. Fareleri ketamin (90 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) karışımı ile steril 1 ml insülin şırıngası ile deri altı kasık enjeksiyonu ile uyuşturun. Taşıyıcı çözelti,% 0.9 salin, 17.4 mg / ml ketamin ve 2.6 mg / ml ksilazin karışımı içerir. İlacın etkisini göstermesini beklerken hayvanları kafeslere geri koyun.
   NOT: Yükleme dozu işlem süresince yeterli anestezi sağlamazsa, yükleme dozunun %25'i daha enjekte edilebilir.
2. Sabit solunum hızlarını ve uyarılma seviyelerinin uygun düşüşünü kontrol etmek için enjeksiyondan sonra hayvanları izleyin. Uyarılma seviyesini, yeterince anestezi uygulandığında yanıt vermemesi gereken bir arka ayak çimdiklemesi ile kontrol edin.
   NOT: Bu, ortalama 25 ila 30 g ağırlığındaki genç yetişkin bir fare için genellikle 3-5 dakika sürer. Hayvan enjeksiyondan 10 dakika sonra hala yanıt veriyorsa, anestezik yükleme dozunun ek %25'i enjekte edilebilir.
3. Kuruluğu önlemek için hayvanın gözlerine vazelin ve hafif mineral yağ oftalmik merhem sürün. Hayvanları kafesten çıkarın ve temiz, düz bir yüzeye koyun. İstenilen arka bacak ayağını ayaktan pelvise kadar elektrikli bir saç düzeltici kullanarak tıraş edin ve uzvun sadece yan tarafını açığa çıkarın.
4. Tıraş edilen bölgeye 1 dakika boyunca kimyasal bir saç çıkarıcı uygulayın. Laboratuvar mendilleri kullanarak saçları manuel olarak çıkarın. Epilasyonun alındığı alanı etanole batırılmış bir laboratuvar mendili ile temizleyin.

2. Cerrahi Prosedür

1. : Cerrahi aletleri otoklav veya diğer uygun yöntemle sterilize edin. Cerrahi bölgeyi ve cerrahi levhayı% 80 etanol / H₂O ile temizleyin. Cerrahi bölgeyi providon ile dezenfekte edin. Fareyi cerrahi tahtanın üzerine yerleştirin ve uzuv destekleri ile hizalayın. Hedef arka uzuvu, diz eklemi iç veya dış rotasyon olmadan hafifçe uzatılmış olarak anatomik olarak doğal bir pozisyonda tutun.
2. Hayvanı ve tahtayı cerrahi mikroskobun altına yerleştirin. Yüzeysel yer işaretlerinin, özellikle kemikli diz ekleminin ve tibialis anterior ve gastroknemius kasları arasındaki çıkıntının palpasyonu yoluyla uygun insizyon bölgesine yönlendirin.
3. Kavramak için genel forseps kullanırken neşter veya yaylı makas kullanarak ciltten yaklaşık 3 cm'lik bir kesi yapın. İnsizyonu, ortak fibula sinirinin altta yatan seyrine dik olarak yapın.
4. Biceps femoris ve vastus lateralis kaslarını açığa çıkararak yüzeysel fasya boyunca insizyona devam edin. Bağlantılı derin fasyayı keserek bu kasları ayırın. 1-2 cm'lik bir kesi yeterli olmalıdır.
5. Mekanik ekartörler kullanarak biseps femoris kasını kaudal olarak geri çekin ve ortak fibular siniri ortaya çıkarın.
6. Gastroknemius kasının lateral başının tendonu ile kesişimi bulunana kadar siniri proksimal olarak izleyin.
   Not: Maruz kalma, geri çekilen cilt ve kasın ek manipülasyonunu gerektirebilir. Bu kavşak, sinir yaralanması için sağlam bir dönüm noktası olarak kullanılır.
7. Siniri ince bir forseps ile kavrayın, uçları gastroknemius tendonunun yan sınırına paralel bir şekilde hizalayın. 5 saniye boyunca sabit, sert bir basınç uygulayarak ortak fibula sinirini ezin.
8. Cerrahi kapsam boyunca görsel inceleme ile sinirin tam ezilmesini doğrulayın. Yaralanma bölgesinde yarı saydam görünecektir. Periferik aksonlarda floresan proteinlerini eksprese eden fareler kullanılıyorsa, floresan yaralanma bölgesinden kaybolacaktır.
9. Ekartörleri çıkarın ve kasları anatomik pozisyonlarında yeniden hizalayın. Kesi yerini 6-0 ipek dikişlerle kapatın. 1-3 basit kesintili dikiş yeterlidir. İyileşen fareyi temiz bir kafeste bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin.
10. Solunumu ve anesteziye karşı herhangi bir olumsuz reaksiyon olup olmadığını kontrol etmek için ameliyattan sonra 2 saat boyunca tüm hayvanları izleyin. Ameliyattan iyileşmeden hemen sonra deri altı kasık enjeksiyonu yoluyla 0.05-0.10 mg / kg'lık bir başlangıç dozu buprenorfin uygulayın. Önümüzdeki 48 saat boyunca her 12 saatte bir 3 ek doz verin. Tamamen iyileştikten sonra, fareleri hayvan bakım tesisine geri koyun.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Ketamine	VetOne	501072
Xylazine	Lloyd Inc.	3437
Buprenorfin	Zoopharm	1Z-73000-150910
Nair	Nair
Kim-mendil Kimtech		34155
Elektrikli Tıraş Bıçağı	Braintree Scientific	CLP-64800
%80 EtOH/H₂O
%10 Proviodine
1 ml İnsülin Şırınga
Yaylı Makas	Vannas	91500-09
No. 15 neşter	Braintree Scientific	SSS 15
#5 Forseps	Dumont	11252-00
6-0 ters kesme iğnesi üzerinde ipek sütür	Sütür Ekspres	752B
Kemirgen Isıtma Yastığı	Braintree Scientific	AP-R-18.5
Alexa 555 konjuge alfa-BTX	Moleküler Problar	B35451
Vectashield	Vektör Laboratuvarları	H-1000
Olympus Stereo Zoom Mikroskop	Olympus	562037192
Zeiss 700 Konfokal Mikroskop	Zeiss
Değişken akışlı peristaltik perfüzyon pompası	Fisher Scientific	13-876-3