Method Article

Hidrojel Bazlı Bir Mikro Sütun Kullanarak Mikro Doku Mühendisliğine Sahip Bir Sinir Ağı Geliştirme

August 7th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Struzyna, L. A. et. al., Sinir Sistemi Yeniden Yapılandırması, Modülasyonu ve Modellemesi için Anatomik Olarak İlham Alan Üç Boyutlu Mikro Doku Tasarlanmış Sinir Ağları. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu video, hücre dışı matris çekirdeğe sahip bir hidrojel mikro sütun kullanılarak mikro doku mühendisliği yapılmış sinir ağlarının gelişimini göstermektedir. Tohumlanmış nöronal agregatlar yapışır, projeksiyonları uzatır ve yapılandırılmış sinir ağları oluşturarak nörogelişim ve nöroterapötik araştırmalardaki ilerlemelere katkıda bulunur.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Agaroz Hidrojelin Geliştirilmesi (Mikro doku mühendisliği yapılmış sinir ağlarının (mikro-TENN'ler) Aselüler Bileşeni

)
  1. Agaroz çözeltisi hazırlama
    1. Bir biyogüvenlik kabini içinde, iki adet 10 cm'lik Petri kabının her birine 20 mL Dulbecco'nun fosfat tamponlu salinini (DPBS) aktararak mikro sütunlar için rezervuarlar hazırlayın. İnce forsepsleri ve mikro neşterleri sıcak boncuk sterilizatörü ile sterilize edin.
    2. 3 g agarozu tartın ve biyogüvenlik kabini içindeki st....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
figure-results-1

Şekil 1: Hücre agregasyonu için lazerle kesilmiş mikro kolon üretim cihazının ve 3D baskılı piramidal mikro kuyu kalıbının planları. (A)-(B) Hidrojel mikro sütunları imal etmek için kullanılan silindirik kanal dizisinin sırasıyla alt ve üst yarılarının pl.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Lazer kesiciÜniversal lazer sistemleriPLS4.75Lazer kesim mikro kanal kalıbını imal etmek için kullanılır.
Lazer kesim mikro kolon imalat cihazıIsmarlama--------------İlgileniyorsanız araştırma grubumuzla iletişime geçin. El yazmasında sağlanan boyutlar ve planlar.
Vidalar----------------------------#40, diş çapı 3,05 mm
Somunlar----------------------------#40, diş çapı 3,05 mm
olan Akupunktur iğnesi (180 μm çap)Lhasa medikalsj.16X40Çap, mikro kolon lümeni için istenen boyuta göre değiştirilebilir.
Petri kabıFisher08772B
Dulbecco'nun fosfat tamponlu salin (DPBS)Invitrogen14200075
Polistiren tek kullanımlık serolojik pipetFisher13-678-11D
AgaroseSigmaA9539-50G
Kılcal tüp (398 μm çap)Fisher21170DÇap, mikro kolon kabuğu için istenen boyuta göre değiştirilebilir.
Sıcak plakaFisherSP88857200
Manyetik çubukFisher1451352
MikropipetSigmaZ683884-1EA
25 mm ölçer iğneFisher14-826-49
Mikro NeşterRoboz cerrahiRS-6270
MakasGüzel bilim araçları14081-09
ForsepsDünyası hassas aletler501985
Sıcak boncuk sterilizatörüSigmaZ378550-1EA
StereoskopNikonSMZ800NTüm diseksiyon adımları ve mikro-TENN üretimi için kullanılır.
Sıçan kuyruğu tip I kollajenCorning3542364 ºC'de koruyun ve sadece gerektiğinde çıkarın. Kullanım sırasında sıcaklığını korumak için buz kullanın.
Mikrosantrifüj tüpüFisher02-681-256
Fare lamininCorning3542324 ºC'de muhafaza edin ve sadece gerektiğinde çıkarın. Kullanım sırasında sıcaklığını korumak için buz kullanın.
Nörobazal ortamInvitrogen21103049Doğum öncesi ve embriyonik nöronal hücrelerin kültürü için bazal ortam. Kullanmadan önce 4ºC'de saklayın ve 37 ºC'de ısıtın.
Sodyum hidroksit (NaOH)FisherSS2661
Hidroklorik asit (HCl)FisherSA48-1
Turnusol kağıdıFisher09-876-18
Hank'in dengeli tuz çözeltisi (HBSS)İnvitrojen14170112 4 ºC'de saklayın.
% 0.25 Tripsin-EDTAInvitrogen25200056Kullanmadan önce -20 ºC'de saklayın ve 37 ºC'de ısıtın.
Sığır pankreatik deoksiribonükleaz (DNaz) ISigma10104159001Kullanmadan önce -20 ºC'de saklayın ve 37 ºC'de ısıtın.
B-27 Takviyesiİnvitrojen12587010Hipokampal ve kortikal nöronların kültürü için nörobazal ortama eklenen takviye. Kullanmadan önce -20 ºC'de saklayın ve 37 ºC'de ısıtın.
L-glutaminInvitrogen35050061Kullanmadan önce -20 ºC'de saklayın ve 37 ºC'de ısıtın.
Sprague Dawley embriyonik gün 18 sıçanlarCharles RiverStrain 001
Pasteur pipetFisher22-042816
15 mL santrifüj tüpüEMESCO1194-352099
VortexFisher02-215-414
SantrifüjFisher05-413-115
HemositometreFisher02-671-6
Objet30 3D YazıcıStratasys--------------Piramidal mikro kuyu kalıplarını imal etmek için kullanılır.
3D baskılı piramidal kuyu kalıbıIsmarlama--------------İlgileniyorsanız araştırma grubumuzla iletişime geçin. El yazmasında sağlanan boyutlar ve planlar.
Polidimetilsiloksan (PDMS) ve sertleştiriciFisherNC9285739Elastomer ve kürleme maddesi içeren kit olarak gelir. Kimyasal davlumbazın içinde kullanın.
HuniFisher10-348C
1 ml pipet ampulüSigmaZ509035
Mikro spatulaFisherS50821
12 oyuklu kültür plakasıEMESCO1194-353043
FırınFisher11-475-154
KuluçkaBalıkçısı13 998 076
Eclipse Ti-S MikroskopNikon--------------Faz kontrastlı görüntülerin alınması için kullanılır. Nikon elements temel araştırma yazılımı (4.10.01) ile arabirim içeren bir QiClick kamera kullanılarak dijital görüntü elde etme ile.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Micro Tissue Engineered Neural NetworkHydrogel Micro ColumnExtracellular Matrix CoreNeuronal Cell AggregatesStereomicroscope ObservationCell Attachment ECMAxon Growth ExtensionMedium Replacement ProtocolBidirectional Neural ArchitectureLong Term Culture

Related Articles