Bir Ortotopik Fare Beyin Tümörü Modelinde Kombinasyon Radyoterapi

Özet

Bu makalenin amacı, kemoradyoterapi çalışmaları için ortotopik glioblastoma modelinin kullanımı tanımlamaktır. Bu makale implante, hücre işleme rağmen gitmek ve bir intrakraniyal modeli kullanarak farenin radyoterapi olacaktır.

Özet

Glioblastoma multiforme (GBM) ¹ en yaygın ve agresif erişkin primer beyin tümörlerdir. Son yıllarda da, tümör mekaniğinin anlaşılması konusunda önemli ilerleme olmuştur ve tümörün doğrudan intraserebral inokülasyonu fizyolojik olarak uygun ortamda ² invaziv süreci gözlemleme fırsatı sağlar etti. Bildiğim kadarıyla insan beyin tümörleri ile ilgili olarak, mevcut ortotopik modelleri karmaşık bir kraniotomi prosedürü ³ ile tümörün sağlam bir parça hücre süspansiyonları veya implantasyon stereotaksik enjeksiyon yoluyla kurulur. Bizim teknik olarak beynin doğrudan implant kullanılan bir hücre süspansiyonu oluşturmak için doku kültürü hücreleri toplamak. Cerrahi süresi yaklaşık 30 dakika ve fare sabit bir cerrahi düzlemi içinde olması gerekmektedir olarak, enjekte edilebilir bir anestezik kullanılır. Fare Stoetling (Şekil 1) tarafından yapılan bir stereotaksik jig yerleştirilir. Kıçtaer cerrahi alan temizlenir ve hazırlanır, bir kesi yapılır ve bregma kraniotomi yerini belirlemek için yer almaktadır. Kraniotomi yeri sağ 2 mm ve bregma için rostral 1 mm'dir. Derinliği kafatası yüzeyinden 3 mm'dir ve hücreler 2 ul her bir 2 dakika arasında bir hızla enjekte edilir. Cilt 5-0 PDS ile sütüre edilir ve farenin bir ısıtma yastığı uyanmak için izin verilir. Bizim deneyim, hücre serisine bağlı olarak, cerrahi tedavi sonrası 7-10 gün arasında yer alabilir. İlaç dağıtım ilaç bileşimi bağlıdır. Radyasyon tedavisi için fareler anestezi, ve jig yapılan özel koymak. Kurşun farenin vücudu kaplar ve farenin sadece beynin ortaya koyar. Tümörogenez ve GBM için yeni tedavilerin değerlendirilmesi çalışması doğru ve tekrarlanabilir beyin tümörü hayvan modelleri gerektirir. Böylece YÜRÜRLÜK test etmek, beynin mikro ve tümörün etkileşimi incelemek için bu ortotopik beyin modeli kullanınradyasyon olan ve olmayan farklı terapötik ajanların ess.

Protokol

I. Hücre Hazırlık

1. Hücreler implante edilmesi her 5 fareler için bir 80% konfluent 225 cm ³ şişeyi yaklaşık% 10 FBS ile DMEM birleştiği yetiştirilmektedir.
2. Hücre kapama ortamı aspire; kalsiyum veya magnezyum olmaksızın PBS ile 10 ml ile yıkanır. Aspirat PBS kapalı hücreler.
3. Tripsin 3 ml hücreleri Trypsinize, 10-15 dakika bekleyin ve medya 15 ml tripsin nötralize.
4. Pipet bir 50 ml konik içine tüm hücreleri ve medya. İki büyük şişeler biri 50 ml konik içine sığacak.
5. 4 ° C'de 7 dakika boyunca 1600 rpm'de hücreleri Spin Tamamen süpernatant aspire. Soğuk PBS 10 ml hücre süspansiyon hale getirin ve yavaşça aşağı p....

Tartışma

Gibi glioblastoma multiforme Malign gliom, en sık rastlanan primer beyin tümörleri temsil ve kasvetli bir prognoz ⁴ var. GBM etkilenen hastaların sağkalım cerrahi, radyasyon ve kemoterapi ⁵ gelişmelere rağmen (9-12 yani ay sonrası tanı) son on yılda hemen hemen hiç değişmedi. Hücrelerinin, insan gliom histolojik özellikleri mümkün olduğunca yakın benzerlik olmalıdır;; tahmin edilebilir bir büyüme olmalıdır glioma muamele çalışma için uygun bir model özellikleri tekrarlanabilir bir tümör büyümesi ko.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Lab Standart Stereotaksik Instrutment	Fare ve Rat Adaptör Stoelting
Betadine	% 100 EtOH
% 70 EtOH	% 50 aseton
6 "Q-ipuçları	Alkol swablar
Hamilton enjektörü 80.008	Ethicon 5-0 PD
1701 SN 31-33G / 1 "/ PT3 iğne	1 ml şırınga
25G iğne	Isıtma pedi
Suni gözyaşları Merhem	Çok ince uçlu kalıcı bir kalem