Method Article

Germ-free Mouse Aşamalı Kolonizasyon sırasında Karaciğer metabolik değişiklikler Değerlendirilmesi 1 H-NMR Spektroskopi

DOI:

10.3791/3642

December 15th, 2011

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İlerici bir kolonizasyon prosedürü daha ev sahipliği karaciğer metabolizması üzerine olan etkisini değerlendirmek için tarif edilir. Yüksek Çözünürlüklü Magic Angle İplik (İK MAS) bozulmamış biyopsi NMR profil hepatik metabolizma tarafından değerlendirilir Kolonizasyon NMR tabanlı metabolik profil mikrobiyal co-metabolitleri idrar atılımı değerlendirerek invazif olmayan izlenir.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bağırsak bakterileri bağışıklık koruma ve vitamin sentezi olarak bir dizi faydalar sağlayarak, ev sahibi homeostazı önemli ölçüde katkıda bulunduğunu çok iyi bilinmektedir. Ayrıca bu ekosistemin önemli bir metabolik organı ile ev sahipliği yaparak, hatırı sayılır bir miktarda besin kaynağı. Bağırsak florası ve metabolik sendrom arasındaki bağlantı, konak ve gut Mikrobiyota arasındaki metabolik etkileşimi anlamaya artan kanıtlar çerçevesinde modern biyolojinin önemli bir sorun haline geliyor. 1-4

Kolonizasyon (normalleşme süreci olarak anılacaktır), eski bir germ-free hayvan mikro-organizmaların kurulması atar. Doğumda meydana gelen doğal bir süreç olmakla birlikte, aynı zamanda bağırsak çiçek ekosistem kontrolü ve daha fazla ana metabolizması üzerindeki etkisini belirlemek için, yetişkin germ-free hayvanlarda kullanılmaktadır. Sömürgeleştirme sürecini kontrol etmek için yaygın bir yöntemdir, bir singl sonda yöntemi kullanmak içine veya mikro-organizmaların bir karışımı. Bu yöntem, çok hızlı bir kolonizasyon sonuçları ve 5 derece stresli olma dezavantajı sunar . Bu nedenle, stresi en aza indirmek için ve bakteriyel kurulması yavaş yavaş ev sahibi metabolizması üzerine etkisini gözlemlemek için daha yavaş bir kolonizasyon süreci elde etmek için yararlıdır.

Bu yazıda, bir tahribatsız metabolik profil tekniği kullanılarak kademeli bir kolonizasyon süreci sırasında hepatik metabolizma değişiklik değerlendirmek için bir prosedür açıklanmaktadır. Biz, 1 H-NMR tabanlı metabolik profil mikrobiyal co-metabolitleri idrar atılımı tarafından yansıtılan bağırsak mikrobiyal metabolik aktivite değerlendirerek bağırsak mikrobiyal kolonizasyon izlemek için öneriyoruz . Bu bağırsak mikrobiyal aktivite, genellikle DGGE (denatüre edici gradient jel elektroforezi) fekal bakteri izlenmesi ile değerlendirildi bağırsak mikrobiyal ekosistem kararlı kurulması ötesinde istikrar takdir sağlar. 6kolonizasyonu konvansiyonel açık bir ortamda gerçekleşir ve kontrol grubu olarak hizmet verecek geleneksel hayvanlar, kirli kirli bir çöp tarafından başlatılan. Kemirgenler coprophagous hayvanlar olmak, bu, daha önce açıklandığı gibi, homojen bir kolonizasyon sağlar. 7

Karaciğer metabolik profil, 1 H NMR spektroskopisi İplik Yüksek Çözünürlüklü Magic Angle kullanarak sağlam bir karaciğer biyopsisi doğrudan ölçülür . Bu yarı-kantitatif bir tekniktir hücre yapısına zarar vermeden, hızlı bir şekilde değerlendirmek için, trigliserit, glikoz ve glikojen gibi önemli metabolitleri daha da ilerletmek için kolonizasyon süreci ve karaciğer metabolizmasını 7-10 arasındaki karmaşık bir etkileşim tahmin ediyoruz . Bu yöntem, herhangi bir doku biyopsisi 11,12 için de uygulanabilir .

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Germ-free hayvan ve örnek toplama kolonizasyonu

  1. Mikrop ücretsiz hayvanlar kafeslerde denetimleri (Şekil 1) olarak görev yapacak konvansiyonel hayvanların ön filtresi ile donatılmış bir geleneksel hayvancılık oda izolatörler ve ev onları çıkarın.
  2. Germ-free hayvanların çöp kontrolü geleneksel kafes alınan çöp Mix yarısı (eski 3 gün). Her zaman kirli geleneksel çöp 1 / 3, bir bakteri düzeyi (en az 3 gün için saklayın) korumak için, yenilemek için gerekli olan her zaman tutmak.
  3. Tüp üzerinde fare işleme 1,5 mL mikrotüp idrar toplamak ve barsak nazikçe masaj işeme yardımcı. Snap-dondurma, sıvı azot hemen. NMR analizi kadar, en az -40 ° C'd....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, daha sağlam biyopsi 1 H İK MAS NMR profil ile değerlendirildi, gut Mikrobiyota, karaciğer metabolizması üzerine etkisini araştırmak için açık bir ortamda ilerici bir kolonizasyon usulü nitelendirdi . Kolonizasyonu literatürde çeşitli yöntemler tarif edilmiştir. Tanımlanmış bir Mikrobiyota hayvanlar kolonize için en yaygın yöntemlerden ağızdan sonda ile veya kontamine içme suyu 19,20. Fekal aşılama, daha önce 21 açıklandığı gibi de kullanılabilir . Burada sunulan kolonizasyon.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz ifşa etmek başka bir şey var.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Açıklayıcı örnekler olarak kullanılan tüm NMR spektrumları, Nestlé tarafından mali olarak desteklenen bir daha önce yayımlanan bir çalışmada 7 türetilmiştir .

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Özel reaktifler ve ekipman Tablo:

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Reaktifi Adı Şirket Katalog numarası Yorumlar
2.5 mm mikrotüp New Era NE-H5/2.5-V-Br
1,7 mm kılcal tüp Sigma-Aldrich NORS175001
Kılcal adaptörü New Era NE-325-5/1.7
Ekstraksiyon çubuk New Era KD-341-5
HR-50 mcL MAS rotor BL4
küresel teflon ayırıcı kiti
Bruker HZ07213
50 mcL uçlar için araç kiti Bruker B2950
Peşin III 600MHz NMR Bruker
1 H İK MAS NMR katı prob Bruker
Döteryum oksit% 99,9 Sigma-Aldrich 530.867-1L
3 - (trimethylsilyl) propiyonik
asit-d 4 (TSP)
Sigma-Aldrich 269913

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cani, P. D., Delzenne, N. M. Gut microflora as a target for energy and metabolic. Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. 10, 729-734 (2007).
  2. Ley, R. E., Turnbaugh, P. J., Klein, S., Gordon, J. I. Microbial ecology: human gut microbes associated with obesity. Nature. ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hepatic Metabolic ProfilingGerm free Mouse Colonization1H NMR SpectroscopyHigh Resolution Magic Angle SpinningUrinary Metabolite AnalysisLiver Biopsy PreparationGut Microbiota InteractionMetabolic Pathway AnalysisNMR Spectral AcquisitionProgressive Colonization Monitoring

Related Articles