Farelerde Uzun Süre Whole Body Hipertermi için protokol

1. Hayvan Etik

Fareler üzerinde uzun süre hipertermi gerçekleştirmeden önce prosedürü Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylandı emin olun. Bu yazıda ele alınan ve beraberindeki video gösterilen tüm prosedürleri İmmünoloji Ulusal Enstitüsü Kurumsal Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır.

2. Anlamak Hipertermi

Tüm Vücut Hipertermi (WBH) 39.5 tutulur inkübatöre konur önceden ısıtılmış kafeslerde ° C. hayvanlar koyarak teslim edilir Protokol standardizasyon sırasında, bir sıcaklık algılayıcı cerrahi fareler implante edildi ve vücut ısısı farklı deneysel koşullar içinde izlenmiştir. Bu ısıtılmış çevre hayvanlar üzerine yerleştirilmesi, bunların sıcaklık yavaş yavaş 37 arttığı görülmektedir ° C ila 42 ° C ile 100 dakika (Şekil 1) bir süre boyunca. Thiç vücut sıcaklığını dış ortam sıcaklığı daha yüksek ateş gibi sıcaklık "başak" sonuçlanan e merak uyandırıcı.

Vücut sıcaklığı 40 ° C aştığı zaman hayvan stres ve burun çevresinde ıslatma gibi dehidratasyon gösterecektir. 40 ötesinde vücut sıcaklığı artırın ° C, ıslatma ve tersinmez stres hatta ısı stresi nedeniyle hayvanların ölümüne yol açacaktır. Yani hipertermi sırasında sıcaklık yükselmelerini önleyen önemlidir.

Yüksek sıcaklık başak Bu fenomen, hipertermi maruz kalma sırasında hayvan fiziksel hiperaktivite ile ilişkilidir. Benzer sıcaklık ani de diğer gruplar tarafından gözlendi ve çevre ¹⁰ yüksek sıcaklıklara sahip tanıtılıyor üzerine hayvanın fiziksel hiperaktivite ile ilişkili bulunmuştur.

Bizim protokol, farelerin hipertermi maruziyeti sırasında hareketsiz kalıyor. GibiŞekil 2 de gösterildiği gibi, hayvan immobilizasyonu sıcaklık sivri önler.

Bu protokol göstermek için 8-12 haftalık BALB / Cj fareler kullanılmıştır. Protokol belli bir tip / farelerin zorlanma ile sınırlı değildir.

3. Denemeye Hazırlanma

3.1 İnkübatör

Bunlar iyi bir sıcaklık kontrol olduğu gibi bu deney, normal bir _CO2 kuluçka makinesi içinde gerçekleştirilebilir. CO ₂ gaz beslemesini kesin ve CO ₂ inkübatör su tutma tepsisini çıkarın. Kuluçka Bazı modellerde bu CO ₂ cihazı kapatmak mümkündür. Bir fare kafes rahatlıkla içine yerleştirilmiş olabilir böylece kuluçka rafları. 39.5 ° C'de kuluçka sıcaklığı ayarlayın

3.2 Kafesleri

Tipik olarak, hipertermi, deney bir seferde 4 fareler üzerinde gerçekleştirilmiştir. İki kafesleri gereklidir; ilgiliE inkübatör içine yerleştirilir ve diğer oda sıcaklığında dışına yerleştirilir. Yatak yamalar kafes içinde olmayan tekdüze sıcaklığı sonuçlanan zaman ıslanması gibi kafes yatakları, kaçınılmalıdır. Dışında kafes gıda pelet ve su şişesi olmalıdır.

3.3 Fare immobilizasyon tüpler

Hipertermi farelerin ilk 4 döngüleri sırasında delikli borular immobilize edilir. Bu sabitleme tüpler gövdesi ve bu tür tüplerin dört gerekli olacaktır fazla delme 3 mm delik ile 50 ml 'santrifüj' borudan yapılabilir. 50ml tüp elverişli 8 haftadan daha eski olan BALB / Cj fareler hareketsiz olabilir. Uygun boyutlarda Tüpler farelerin bazı alışılmadık farklı suşu için ya çok genç ya da 50 haftadan daha eski olan fareler için gerekli olabilir.

Sıra immobilizasyon tüpleri ve inkübatör içinde bir kafes 39.5 ° C'de muhafaza Böylece en az 2 saat bekledikten sonra, kafes ve immobilization tüpler kuluçka sıcaklığına ulaşmak.

4. Hipertermi ilk çevrimi

Fare hipertermi pozlama sırasında dehidratasyon karşılaşabilirsiniz. Bu nedenle deney başlamadan önce, her fare için 0.5 ml serum fizyolojik intraperitoneal olarak yönetmek. 1 ml şırınga ile 26 G iğne kullanın.

Çabuk yere, her immobilizasyon tüpler bir hayvan kuvözde kafes çıkarmak ve inkübatör kafese geri yerleştirin. Zaman kaydedin. Bu kuvöz aynı yerde her zaman kafes tutmak esastır.

90 dakika sonra, kuluçka makinesi dan kafes çıkar. Immobilizasyon tüplerinden hayvanlar serbest bırakın ve yiyecek ve su kolay erişim ile normal ısıda kafese koyun. Inkübatöre geri boş immobilizasyon tüpleri yerleştirin.

15 dakika sonra, hipertermi ikinci çevrimi 0 sunarak başladı.Her fare için 5 ml serum fizyolojik intraperitoneal olarak verildi.

Daha sonra 50 ml delikli immobilizasyon tüpler içinde immobilize ve inkübatör içine yerleştirilir.

5. Müteakip Hipertermi Çevrimleri

İlk 4 kür için, hipertermi pozlama sırasında ve ilk iki döngüleri için fare hareketsiz esastır, salin enjeksiyonu hipertermi dönemi başlamadan önce verilir.

Geri kalanı tarafından takip hipertermi bu döngüleri tamamlandıktan sonra, fareler ACCLIMATIZE almak ve hipertermi pozlama sırasında hiperaktif olmazlar. Fareler kolayca dinlenme zaman yiyecek ve su çekmek ise salin intraperitoneal gerekli olmayabilir.

6. Tüm Cycles Tamamlanan sonra, Son Adım Hayvanlar inceleyin etmektir

Hipertermi döngüleri sırasında herhangi bir ölüm olmamalıdır. Her hayvan ilk olarak çok dikkatle takip edilmesi gereken bir sahiptirbirkaç döngüleri. Hızla burun etrafında herhangi bir ıslatma arayın. Bu belirti dehidratasyon bir imzadır. Bu semptomlar ile Fareler hemen oda sıcaklığında 0.5 ml serum fizyolojik ip ve kalan verilmelidir. Immobilize farelerin çoğu herhangi bir ek bakım gerektirmez ve başarıyla stres hipertermi taşıyacak.

Gerekli döngüleri tamamlandıktan sonra, hayvanlar zayıf ve susuz görünebilir ama onlar hızla birkaç saat içinde iyileşir.

Şekil 1. Kafes 39.5 ° C'de bir inkübatöre yerleştirildi Sıçanların vücut çekirdek sıcaklığı değişimi 90 dakika sonra kafes inkübatörden çıkarılmıştır ve 25 ° C'de yerleştirilmiştir Kırmızı çevreler yüksek sıcaklık sivri göstermektedir.

Şekil 2. Merkez vücut sıcaklıkları Değişimihipertermi döngüleri sırasında hareketsiz Mice yeniden. Hayvan hareketsizleştirici sonra, yüksek sıcaklıklarda sivri kafes 39.5 ° C'de yerleştirildiği zaman gözlemek değildi

Biz ifşa etmek başka bir şey var.