$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Cryoboxes Almak İçin Cryotolerant Cihaz Meclisi
- . Pense kullanarak, 3 taraflı güçlü bağı (Şekil 1A) yapmak için bir L şeklinde güçlü-kravat Şekil 1B gösterildiği Not bir tarafı düzeltmek: güçlü-kravat boyutları Dewar boyun çapına bağlı olarak seçilebilir .
- . Şekil 3 (AB) 'de gösterildiği gibi Cryoscoop temel teşkil Crown somun, pul ve vida kullanarak güçlü bir kravat-T kayışı (Şekil 2) Not böyle iki güçlü bağları Güvenli: İki güçlü bağları alınmasını sağlamak için kullanılır 5 ½ inç X 5 ½ inç cryoboxes.
- Bir oluklu levha (Şekil 4) kullanarak, oluklu levha bir ucunda yuvaları ile güçlü-kravat T kayışı yuvalara hizalayın ve Hillman somun ve cıvatalar (Şekil 5) yardımıyla birlikte iki sabitleyin. Not: Eğer oluklu levha ve güçlü bir bağ Kullanıcı birlikte değilBana önceden delinmiş delikleri ile, delik karbür matkap kullanılarak delinmiş sahip olmak zorunda kalacaktır.
- Şekil 6'da gösterildiği gibi, pense yardımı ile yarılmış plakanın diğer ucu bükülür. (Bu adım isteğe bağlıdır).
- Zaman sıvı azot içinde, Şekil 6'da gösterildiği gibi daha iyi cihazı kavramak için köpük ile sap kaydırılır. (Isteğe bağlı) Not: otoklav öncesinde köpük çıkarın.
2. Cryovials Almak İçin Cryotolerant Cihaz Meclisi
Cryotolerant DIY alma cihazı da cryovials alımı için adapte edilebilir. Bu sıvı azot (Şekil 7) şişeleri dışarı karıştırıyordu değiştirilmiş gösterildiği gibi bir paslanmaz çelik süzgeç ile düz taban yerine içerir.
- Sökün Crown fındık ve oluklu levha için güçlü-kravat T kayışı takılarak civatalar.
- Oluklu levha paslanmaz çelik süzgeç takmadan önce, hafifçe boyun eğmek., bu kolay cihaz ile manevra yapacak süzgeç bir dudak gelirse, dudak aşağı eğmek için pense kullanın: Bir kepçe (Şekil 8) Not benzemek için bir açıyla yönlendirmek tabanına pense yardımı ile boşaltın.
- Oluklu plaka üzerinde delikler ile birlikte süzgeç sap üzerinde delik hizalayın ve Hillman fındık ve Şekil 8'de gösterildiği gibi cıvata yardımıyla Not süzgeci sabitleyin:. Süzgeç ön delikli gelmezse, size ihtiyacınız olacak karbür matkap ile delinmiş deliklere sahip düzenlemek.
3. Dewar itibaren Cryoboxes ve Cryovials alınıyor
- Başlamak için, kriyojenik eldiven takın ve manevra için oda izin Dewar 1 veya 2 Dondurucu rafları çıkarın.
- Yavaşça güçlü-kravat T taban kayışı (Şekil 5) ile donatılmış dik Cryotolerant DIY alma cihazı ile Dewar alt kısmındaki kazıyorum ve kutu falle toplamak, hemen bir ılımanlaştırma nesne ile temas üzerine Sıvı azot kaynar azot gazı (Leidenfrost etkisi) yalıtım nesnesi zarflama. Dewar tankı Not altına n. Örneklerin alma önce cihaza soğutmak için, yavaş yavaş Dewar içine batırmak cihazı ve sıvı azot yukarıda adım geçmeden önce yeterince cihazı soğutulur.
- Tankın dışına dondurucu kutusunun oymak için Dewar duvarları boyunca dik cihazı çekin.
- Dewar altına alınan kutu tut.
- Cryovials almak için, hafifçe bir süzgeç (Şekil 9) ile donatılmış cryoscoop ile Dewar alt kazıyın.
- Cryobox alma benzer, dik cihaz çekin ve süzgeç toplanan şişeleri yakala.
4. Temsilcisi Sonuçlar
Gen çalışmaları büyük bir zorluk RNA kalitesini saklama koşullarına bağlı olduğunudondurulmuş doku örnekleri ve RNA 4 ayıklanır. Şekil 10 ikisi için toplam RNA bütünlüğü üzerine numune işleme etkisini gösterir. Aynı doku kaynağı (insan adipoz) toplam RNA farklı numune işleme tabi tutuldu. Önce deneme için, sağlam toplam RNA preperatı yaklaşık iki kat 18S rRNA bant (Şekil 10, hat 1) gibi yoğun olarak 28S rRNA bandı ile net 28S ve 18S rRNA bantları gösterir. 18S yoğunluk oranı 2:1 5 ayrılmaktadır: Bu, 2:1 oranında (28S: 18S) kısmen bozulmuş RNA yayma, ya da 28S olarak görünürken, RNA sağlam olduğunu bir göstergesidir. 3-4 Lanes önemli ölçüde bozulma ile RNA örnekleri gösteriyor. Bu RNA örnekleri böylece periyodik düşmüş şişeleri ve kutuları hatırlama (Şekil 10, Lane 3-4 gerekliliği nedeniyle boşaltılması ile uzun süreli depolama modelleme, Dewar (Yöntem A) kısa vadeli alımlar tarafından tekrar kısmi defreezing tabi tutuldu ). Bununla birlikte, örnekler Dewar servisli saklananDIY cihazı (Yöntem B) kullanılarak ve böylece herhangi bir kısmi defreezing, bozulmamış RNA (Şekil 10, Lane 2) içerir.
Şekil 1.. A) 3 temel iki taraflı güçlü-kravat gösterilen boyutları oluşur. Her güçlü-kravat büyük bir önceden delinmiş delik (katı ok) ve her yüzünde birden fazla küçük delik (küçük ok) içerir. Bu somun ve civata ile bağlantı sağlamak için bir seçenek sağlar. Ayrıca küçük delikler numune alımı sırasında sıvı azot hızlı drenaj sağlar. B) güçlü-kravat her bir tarafı L şeklinde güçlü-kravat yapmak için pense yardımı ile doğruldu edilir.
Şekil 2. Güçlü-kravat T kayışı birlikte güçlü bağları korumak için kullanılır. Güçlü-kravat gibi, T-kayışı büyük bir önceden delinmiş delik (katı ok) ve iki küçük delik (smal varHer köşesinde l ok). Somun ve cıvata kullanılarak Askı - Bu T uzunluğu boyunca güçlü bağları güvence sağlar. Ayrıca, yarıklı plakasına T-kayışı sabitleme sağlar.
Şekil 3. A) Her bir güçlü-kravat) B. Taç cıvata somun, cıvata ve pullar kullanarak uzunluğu boyunca, T-kayışı bir köşesine bağlanır İki güçlü bağları 5 ½ inç X 5 ½ almak için birbirine bitişik güvenli cryoboxes inç. X 2 inç 2 gibi küçük cryoboxes için içeri, tek bir güçlü-kravat bir T-kemersiz oluklu levha doğrudan bağlanabilir.
Şekil 4. Düz plaka kolu olarak kullanılır Oluklu. Oluklu plakası uzunluğu Dewar derinliği bağlıdır. Bu durumda, yarıklı plakanın 4 ayak kullanılmıştır. Oluklu levha kalınlığı kritik sDewar dolu sıvı azot örnekler alınırken ince oluklu levhalar (<14 ölçü) cihazı dayanıksız hale ince.
Şekil 5. Güçlü bağları ve T kayışı oluşan düz taban sonra oluklu levha bir ucunda sabitlenir. T kayışı kalan köşesinde büyük delik düz plaka üzerinde yuva ile uyumlu ve hex cıvata ve somun ile bağlanır. Bu cihaz şu anda Dewar gelen cryoboxes almak için de kullanılabilir.
Şekil 6. Oluklu düz plaka bir ucu, pense ile bükülür ve özellikle de, bu durumda gösterilen derin Dewar, daha iyi kavrama sağlamak için köpük ile kaplıdır.
Şekil 7. Tel örgü ve paslanmaz çelik saplı SüzgeçDewar gelen cryovials almak için kullanılır. Kolu yuvası ile sağlanan değilse, karbür matkap ucu ile delik delmek için gerekli olacaktır.
Şekil 8. Cryovials alınmasını kolaylaştırmak için, süzgeç kepçe şeklindeki süzgeç almak için pense ile birlikte boyun bükülür. Süzgeç Bu durumda olduğu gibi dudağı sağlanmamışsa, bu pense bükmek için kullanılabilir. Bu süzgeç Dewar içinde yakalanmak değil sağlar.
Şekil 9. Süzgeç altıgen somun ve cıvata kullanılarak bir ucunda oluklu düz plaka üzerine sabitlenir.
10 Şekil. RNA örnek bütünlüğünü farklı numune alma şartlarına tabi. Keşfetmek için RNA kalite c işleme örnek tarafından nasıl etkilendiğinionditions, aynı kaynaktan RNA örnekleri arasında bir dizi handlings için iki yöntem tabi tutuldu. Yöntem A böylece DIY cihaz kullanarak örnek almasını tabi Dewar, hiçbir kısmi defreezing RNA depolama oluşuyordu. Yöntem B böylece periyodik düşmüş örnekleri almak için boşaltma ile uzun süreli depolama modelleme, Dewar kısa vadeli alımlar tarafından tekrar kısmi defreezing maruz Dewar RNA depolama oluşuyordu. Toplam RNA bütünlük sonra jel elektroforezi ile analiz edildi. Lane1: Örnek önce Dewar depolama; Lane 2: Yöntem A tarafından alınmalarını tabi Dewar örnek; Lane 3, 4: Yöntem B tarafından alınmalarını tabi Dewar örnek; M: 100 bp merdiveni.