Method Article

Patch Clamp Elektrofizyoloji ve Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak arteriyel düz kas KV7 Potasyum Kanal Fonksiyon Exploring

DOI:

10.3791/4263

⸱

September 14th, 2012

 ,  ,  , 
1Department of Molecular Pharmacology & Therapeutics, Loyola University Chicago

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yılanı / dilatör yanıtları (basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak) ölçümleri ile paralel izole arteriyel miyositler (yama elektrofizyolojik teknikler kelepçe kullanarak) KV7 (KCNQ) potasyum kanal aktivitenin ölçümleri vasküler düz kas fizyolojisi KV7 kanalları rolleri hakkında önemli bilgiler ortaya çıkarmak ve olabilir farmakoloji.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Direnç arterlerinin duvarları içinde düz kas hücrelerinin kasılması ya da gevşeme arter çapı belirler ve böylece damar yoluyla kan akışını kontrol eder ve sistemik kan basıncını katkıda bulunur. Daralma süreci öncelikle iyon taşıyıcıları ve çeşitli kanallar tarafından kontrol sırayla olduğunu sitozolik kalsiyum konsantrasyonu ([Ca 2 +] cyt) tarafından düzenlenir. İyon kanalları vazokonstriksiyon veya vazodilatasyon etkisi için vazoaktif hormonların aktive sinyal transdüksiyon yollarının sık ara vardır. Ve iyon kanalları genellikle ya kasten terapötik ajanlar veya bilmeyerek (istenmeyen kardiyovasküler yan etkilere neden örneğin) (örneğin kalsiyum kanal blokerleri vazodilatasyon ve düşük kan basıncı ikna etmek için kullanılır) hedeflenir.

KV7 (KCNQ) voltaj bağımlı potasyum kanalları son zamanlarda önemli fizyolojik ve terapötik targı suçlanmışdüz kas kasılması düzenlenmesi için ets. Fizyolojik sinyal transdüksiyon hem de terapötik ajanların eylemleri KV7 kanal spesifik rolü aydınlatmak için, hem de dokunulmamış arter bağlamında etkisini değerlendirmek olarak etkinliğinin hücresel düzeyde modüle edilmektedir nasıl çalışma gerekir.

Sıçan mezenter arterleri kullanışlı bir model sistem sağlar. Arterler kolayca diseke bağ dokusu temizlenir ve yama kelepçe elektrofizyoloji için izole arteriyel miyositler hazırlamak için kullanılan veya kanüle ve nispeten fizyolojik koşullar altında vazokonstriktör / vazodilatör yanıtları ölçümleri için basınç olabilir. Burada ölçümler her iki tür için kullanılan yöntemleri açıklamak ve deneysel tasarım vasküler tonusun düzenlenmesinde bu iyon kanallarının rolleri net bir şekilde anlaşılmasını sağlamak için entegre edilebilir nasıl bazı örnekler verir.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Küçük Bağırsak Mezenterik Vasküler Arcade Cerrahi eksizyonu

  1. Inhalasyonunun izofluran ile 300-400 g Sprague-Dawley sıçan (% 4) anestetize.
  2. Ince barsak mezenter göstermek için bir orta hat laparotomi gerçekleştirin. Maruz kalan barsak ve mezenter travma önlemek için büyük özen ile karın kesiden küçük ve kalın bağırsak Exteriorize. Yavaşça steril gazlı bez üzerine mezenter dışarı havalandırın.
  3. Cerrahi tüketim çekum (dikkatlice kenarları boyunca ve arter / ven superior mezenterik birincil dallarından kökeni kesilir kan damarları) içeren ince bağırsak ve kalın bağırsağın bir kısmı,.
  4. Buz soğuk kesme çözeltisi (Tablo 1)

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada açıklanan yöntemler ve deneysel yaklaşımlar oldukça sağlam ve titiz ile uygulandığında net ve tekrarlanabilir sonuçlar üretebilir. İyi elektrofizyolojik kayıtlar ve daralma / arterlerin dilatasyon sırasıyla hücreler ve arter segmentinin sağlığına bağlıdır. Hücre hazırlıklar hatta aynı protokolü kullanarak, günden güne değişebilir. İzolasyon Solutions en fazla 2 hafta için kullanılabilir, fakat hücre hazırlama kalitesi iki takip eden günlerde düşük ise yeni izolasyon çözüm hazırlanmalıdır. Bu enzim aktiviteleri en.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma KLB ve Amerikan Kalp Derneği (09PRE2260209) ve BKM Arthur J. Schmitt Vakfı'ndan doktora öncesi burslar için Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü (NIH R01-HL089564) bir hibe ile finanse edildi.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Isim Şirket Katalog Numarası Yorumlar
Sodyum klorür Sigma S5886 Kesme Çözüm: 145
Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 140
Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 10
Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 140
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 145
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 145
Potasyum klorür Sigma P5405 Kesme Çözüm: 4.7
Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 5.36
Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 135
Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 5.36
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 4.7
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 4.7
Potasyum EGTA Sigma E4378 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 0.05
HEPES Sigma H9136 Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 10
Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 10
Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 10
Disodyum hidrojen fosfat Sigma S5136 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 0.34
Potasyum hidrojen fosfat Sigma P5655 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 0.44
Magnezyum Klorür Sigma M2393 Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 1.2
Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 1
Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 1.2
Kalsiyum Klorür Sigma C7902 Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 2
Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 0.05
Sodyum fosfat Fisher Scientific BP331-1 Kesme Çözüm: 1.2
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 1.2
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 1.2
Magnezyum Sülfat Sigma M2643 Kesme Çözüm: 1.17
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 1.17
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 1.17
MOPS Fisher Scientific BP308 Kesme Çözüm: 3
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 3
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 3
Piruvik asit Sigma P4562 Kesme Çözüm: 2
Banyolu çözümbasıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi: 2
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 2
EDTA dihidrat Araştırma Organics 9572E Kesme Çözüm: 0.02
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 0.02
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 0.02
D-Glikoz Sigma G7021 Kesme Çözüm: 5
Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 10
Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 20
Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 10
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 5
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 5
Sığır serum albümini Sigma A3912 Kesme Çözüm: 1%
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 1%
pH Eriyik Diseksiyonn: 7.4
Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 7.3
Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 7.2
Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 7.2
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 7.4
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 7.4
Ozmolarite Kesme Çözüm: 300
Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 298
Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 298
Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 298
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 300
Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 300

* 11

Tablo 1. Deneyde kullanılan çözümler Bileşenleri.

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Passmore, G. M. KCNQ/M Currents in Sensory Neurons: Significance for Pain Therapy. J. Neurosci. 23, 7227-7236 (2003).
  2. Falloon, B. J. Comparison of small artery sensitivity and morphology in pressurized and wire-mounted preparati....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Arterial Smooth MuscleKv7 Potassium ChannelsPatch Clamp ElectrophysiologyPressure MyographyMesenteric ArteriesIon Channel FunctionVascular Tone RegulationCellular ElectrophysiologyArterial Diameter MeasurementPharmacological Modulation

Related Articles