Hyperbranched poligliserol (HPG) ile kırmızı kan hücrelerinin hücre zarı modifikasyonu (eritrositler) sunulmuştur. Modifiye RBCs sulu iki faz bölümleme, osmotik frajilitesi ve kompleman aracılı lizis ile karakterize edildi. Yüzey proteinleri ve antijenlerin kamuflaj akım sitometri ve Mikro Yazma Sistemi (MTS) kan fenotipleme kartları kullanılarak değerlendirilmiştir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Antijenler Kompakt Hyperbranched Polyglycerols Of Aşılama Membran By Fonksiyonel Kırmızı Kan Hücreleri Korumalı
Bu makalede
Özet
Özet
Kırmızı kan hücresi (RBC) transfüzyonu gibi talasemi ve orak hücreli anemi 1-3 gibi akut ve kronik sağlık sorunları bir dizi tedavi için hayati önem taşımaktadır. RBC yüzey (~ 308 bilinen antijen 4), kronik kan transfüzyonu hastalarda eritrosit transfüzyonu, 4, 5, küçük antijen bayan maçı nedeniyle alloantibodies geliştirmek üzerinde çok sayıda antijen varlığı nedeniyle. Polietilen glikol (PEG) ve hyperbranched poligliserol (HPG) gibi hidrofilik polimerler eklenme oksijen, glukoz, ve iyon 3 gibi küçük moleküllerin geçit etkilemeden yüzey antijenleri ile antikorların etkileşimi engelleyen RBC zar üzerinde bir dışlama bir tabaka oluşturur. Şu anda herhangi bir yöntem çünkü RBC yüzey ve D antijenlerinin çok sayıda (göre protein ve karbonhidrat) varlığı tarafından sunulan zor bir meydan okuma parçası olarak evrensel verici kırmızı kan hücrelerinin üretimi için kullanılabilirBu tür yöntemlerin evelopment anlamlı transfüzyon güvenliği artırmak ve dramatik RBCs durumu ve kullanımı artıracaktır. Bu raporda, HPG ve karakterizasyonunu greftleme membran antijen korunan fonksiyonel RBCs geliştirmek için kullanılan deneyler sunulmuştur. HPGS son derece kompakt polimerler 6, 7, biyo-uyumlu, ve lipid membran 8, 9 ve maske RBC yüzey antijenleri 10, 11, çevreleyen hücre glycocalyx içinde bulunması beklenmektedir.
Protokol
A. Hyperbranched poligliserol Modifikasyonu (SS-HPG)
- Sıra bir tabanı yuvarlak bir şişe içerisinde 60 kDa (0,5 g, 0,0083 mol) HPG liyofilize edildi ve 90 C'de vakum altında gece boyunca kurutun ° C.
- Oda sıcaklığına soğutmak şişeye, ve susuz piridin (3 ml) içinde kuru HPG çözülür.
- Karboksil grupları ile HPG üzerinde yaklaşık olarak sekiz hidroksil gruplarının fonksiyonalize, HPG çözeltisine dimetilaminopiridin ve katalitik miktarda (piridin içinde 5 mg / ml çözeltisinin bir damla) ekleyin. Bu karışıma, 10 dakika boyunca akıllı 0.5 ml piridin içinde çözülür damla (0.0067 g, 0,0664 mmol) ve süksinik anhidrit ilave edin. Argon altında od....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Rh D antijen CD47 ve RBC yüzey proteini Kamuflaj floresan işaretli monoklonal antikorlar kullanılarak akış sitometresi ile ölçüldü, ve bir temsili sonucu, Şekil 1 'de verilmiştir. HPG-aşılı eritrositler durumunda (gri), sinyalin yoğunluğu yüzeyi proteinlerini maskeleme belirtmek hücre yüzeyine bağlanarak antikorlar bir azalma gösteren kontrol eritrositler (kırmızı ve yeşil) ile karşılaştırıldığında (sola doğru kayar tepe noktası) azalmıştır .
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Evrensel donör eritrositler kan transfüzyonu tedavisi için artan kan kullanılabilirliği ve güvenliği büyük bir potansiyele sahiptir. Eritrosit aynı zamanda uzun sirkülasyon ve doğal biyolojik uyumluluk, 14, 15 bağlı olarak umut verici bir ilaç verme araçları olarak kabul edilir. Bu yazıda sunulan deneyler modifiye RBCs HPG in vitro özellikleri değerlendirir. In vitro özelliklerine ve HPG modifiye RBCs vivo dolaşımda son 8, 11 bizim grupta incelenmiştir. NaCl ve sodyum fos.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Bu araştırma, Kanada Kan Hizmetleri (CBS) ve Sağlık Bilimleri (CIHR) Araştırma Ortaklığı Fonu Kanada Enstitüleri tarafından finanse edildi. Yazarların kendi araştırma tesislerinin kullanımı için Kan araştırma UBC Merkezi'nde LMB Makromolekül Hub ederim. Altyapı tesisi Yenilik Kanada temeli (CFI) ve Sağlık Araştırma Michael Smith Vakfı (MSFHR) tarafından desteklenmektedir. R. Chapanian (CIHR / CBS) doktora sonrası Transfüzyon Bilim burs ve MSFHR araştırma stajyer doktora sonrası dostluk bir alıcı bir alıcı olduğunu. JN Kizhakkedathu MSFHR Kariyer Araştırmacı Scholar Ödülü bir alıcı olduğunu.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Glisidol | Sigma Aldrich | (ON, Kanada) | |
| Trimetilolpropan | Fluka | (ON, Kanada) | |
| Potasyum metilat | Sigma Aldrich | (ON, Kanada) | |
| Susuz piridin | Sigma Aldrich | (ON, Kanada) | |
| 4-Dimetilaminopiridin | Sigma Aldrich | (ON, Kanada) | |
| Süksinik anhidrit | Sigma Aldrich | (ON, Kanada) | |
| Aseton | Fisher Scientific | (ON, Kanada) | |
| Susuz dimetil formamid | Sigma Aldrich | (ON, Kanada) | |
| N-hidroksisüksinimid | Sigma Aldrich | (ON, Kanada) | |
| N, N'-diizopropilkarbodiimid | Sigma Aldrich | (ON, Kanada) | |
| MTS kartları | Micro Typing System (MTS) kartlar (FL, ABD) | ||
| Dekstran 500 kDa | Pharmacia Fine Chemicals | (İsveç) | |
| PEG 8 kDa | Sigma Aldrich | (ON, Kanada) | |
| FITC monoklonal anti-Rh D (Rh) | Bölüm Biodiagnostics | (PA, ABD) | |
| PE monoklonal anti-CD47 | BD Biosciences | (NJ, ABD) | |
| Drabkin reaktifi | Sigma Aldrich | (ON, Kanada) | |
| Tablo. RBC membran ve onların analizi polimerlerin HPG aşılama için kullanılan kimyasallar ve reaktifler. |
Kaynaklar
- Bradley, A. J., Murad, K. L., Regan, K. L., Scott, M. D. Biophysical consequences of linker chemistry and polymer size on stealth erythrocytes: size does matter. Biochim. Biophys. Acta. 1561 (2), 147-158 (2002).
- Murad, K. T., Mahany, K. L., Brugnara, C., Kuypers, F. A., Eaton, J. W., Scott, M. D.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
