JoVE'nin bu Eylül sayısında, Berlin Özgür Üniversitesi Tıp Fakültesi'nden araştırmacılar, inme hastalarının görme alanı kusurlarını nasıl telafi ettiklerini inceleyen yeni bir yöntemi ortaya koyuyorlar. Bunu gerçekleştirmek için yazarlarımız; frenleri, direksiyonu ve sinyal lambaları olan eksiksiz bir sürüş simülatörü kullanıyorlar. Sürüş simülasyon yazılımı ve gelişmiş göz izleme teknolojisini kullanan araştırmacılar, inme hastalarının farklı karmaşıklık derecelerindeki sanal sürüş parkurlarında ilerlerken sergiledikleri bakış davranışlarını karşılaştırabiliyorlar. Posterior serebral arter enfarktüsü hastalarda benzer görsel eksikliklere yol açabilse de, bazı hastalar telafi edici göz hareketleri geliştirerek sürüş parkurlarında ilerleyebilirken, diğerleri yaban domuzu gibi tehlikeli engellere çarpıyorlar. Hastalar tarafından uygulanan telafi edici bakış davranışlarının analizi yoluyla yazarlarımız, sürüş simülasyonunun, görme alanlarındaki kör noktaları aşmaya çalışan inme hastalarını rehabilite etmek için bir araç olarak kullanılmasında büyük bir potansiyel görüyorlar.
Southern California Üniversitesi ile iş birliği yapan Oregon Sağlık ve Bilim Üniversitesi Oftalmoloji Bölümü'ndeki araştırmacılar, Doppler optik koherens tomografi (OCT) kullanarak retinadaki toplam kan akışını ölçmek için bir yöntem sunmaktadır. Retina, görsel görüntüleri yakalayan ve bunları optik sinir aracılığıyla beyne iletilen elektriksel sinyallere dönüştüren milyonlarca nöron içerir. Kan damarları, optik sinirin retinaya bağlandığı optik diskten retinaya girer. Bu damarlar oksijen ve besin sağlar, ayrıca atıkları uzaklaştırır. Bazı retinal hastalıklarda (diyabetik retinopati gibi) veya (optik siniri etkileyen) glokomda, retinal vaskülarite anormal olabilir. Bu hastalıklar geri dönüşümsüz görme kaybının önde gelen nedenleri olduğundan, retinal kan akışı ölçümleri klinik uygulamalarda ve araştırmalarda çok yararlı olabilir. Lazer Doppler ve ultrason renkli Doppler gibi geleneksel optik görüntüleme yöntemlerinin aksine, lazer Doppler OCT, retinal kan akışının mutlak ölçümlerini sağlayabilir; bunlar, damarlar içinde akarken eritrositlerden geri saçılan Doppler kaymalı ışığa dayanmaktadır. Yazarlarımız, retinanın ve optik diskin Doppler OCT ile nasıl taranacağını göstermektedir; taramalar daha sonra yazarlar tarafından geliştirilen DOCTORC yazılımı ile derecelendirilir ve analiz edilir. Bu yöntem, derecelendiriciler ve yöntemler arasında iyi bir tekrarlanabilirlik göstermektedir. Ayrıca, glokomlu gözlerde retinal kan akışı ölçümleri, görme kaybı ile yüksek korelasyon göstermektedir. Bu nedenle Doppler OCT, oftalmoloji araştırmalarında ve klinik uygulamalarda kullanılabilecek güçlü bir araçtır.
Sivrisinek mevsimiyle eş zamanlı olarak, Virginia Tech Entomoloji Bölümü'ndeki araştırmacılar, sivrisinek genomlarının kromozom haritalaması için basit ve güvenilir bir teknik sunmaktadır. Binlerce tür içeren 40'tan fazla sivrisinek cinsi arasından araştırmacılar, özellikle şu cinslerle ilgilenmektedir: Anopheles, Aedes, ve Culex çünkü insanlarda zararlı hastalıklara yol açan türleri barındırmaktadırlar. Anopheles gambiae genomunun yaklaşık %90'ı Anopheles gambia genomu kromozomal bölgelere haritalanmıştır; ancak, şunlar için uygun kromozom yayılımları hazırlamak son derece zordur: Aedes cins veya Culex hücre hatları ve standart teknikler kullanarak cins üzerinde. Bu sorunu aşmak için yazarlarımız, yüksek kaliteli kromozom yayılımları sağlayan imajinal disklere sahip 4. instarda sivrisinek larvalarını kullanmaktadır. Araştırmacılar, imajinal disklerin nasıl diseke edileceğini ve floresan için uygun kromozom preparatlarının nasıl hazırlanacağını göstermektedir. in situ hibritleşme (FISH). Böylece, Aedes, Culex ve Anopheles cinsindeki sivrisinekler için genom haritalaması mümkün hale gelmektedir. Aedes, Culex ve Anopheles cinsleri. Bu teknik, entomologların yalnızca sivrisinekler için değil, aynı zamanda diğer böcekler için de kesin kromozomal haritalar oluşturmasının önünü açmıştır.
Quebec'teki Laval Üniversitesi Araştırma Merkezi'nde araştırmacılar, fare ön beynindeki nöronal migrasyonu izlemek için bir yöntem sunmaktadır. Memeli beyninde nörojenezin önemli bölgelerinden biri subventriküler zon olup, yeni doğan nöronlar bu bölgeden rostral migrasyon akımı aracılığıyla olfaktör bulba doğru göç ederler. Hücreler, yeşil floresan protein kodlayan stereotaksik olarak enjekte edilmiş bir retrovirüs ile işaretlenir; ardından, akut kesit hazırlama, timelapse görüntüleme ve görüntü analizinin bir kombinasyonunu kullanan yazarlarımız, işaretli nöroblastların migrasyon hızını hesaplayabilmektedir. Hücre yörüngelerinin kan damarları boyunca dikkatli bir şekilde izlenmesi sayesinde bu yöntem, hücre migrasyonunu etkileyen farklı moleküler sinyallerin ve hücresel mekanizmaların aydınlatılmasına yardımcı olabilir.
Bu kısa özet, bu Eylül ayında JoVE'de yayınlanacak olan dikkat çekici video-makalelerden sadece birkaçını öne çıkarmaktadır. Ayrıca, fotokonvertibl floresan proteinlerle zebrafishlerde hücre kaderinin takibi, hücre sertliğini test etmek için mikropipet kullanımı ve DNA hasarına yanıt veren proteinlerin davranışlarının görüntülenmesine yönelik yöntemlere de yer veriyoruz.