Biz 2.0 mm spekulum ile bir otoskop kullanarak direkt laringoskopi yoluyla farelerde entübasyon için, basit, güvenilir ve nispeten ucuz bir yöntem geliştirdik. Bu teknik, atravmatik ve kronik deneylerde tekrarlanan ölçümler için de kullanılabilir. Biz üstün trakeostomi veya daha önce cerrahi dışı teknikler bildirdi bulabilirsiniz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
Fareler, vahşi tipli ve transjenik hem şu anda, biyomedikal araştırmalarda asıl memeli modeli vardır. Entübasyon ve mekanik ventilasyon derin anestezi veya akciğer fonksiyon ölçümleri altında ameliyat gerektiren bütün hayvan deneyleri için gereklidir. Trakeostomi mekanik havalandırma sağlamak için bu farelerde entübasyon için standart olmuştur. Orotrakeal entübasyon nedeniyle önemli teknik zorluk veya çok özel ve pahalı ekipman için bir gereklilik rapor edilmiştir ancak başarılı birçok çalışmada kullanılmıştır olmamıştır. Burada bir 2.0 mm spekulum ile donatılmış bir otoskop kullanarak ve bir endotrakeal tüp olarak 20 G intravenöz kateter kullanarak doğrudan laringoskopi bir teknik rapor. Biz entübe ve farelerde akciğer fonksiyonunun doğru değerlendirmeler yapmak için yaygın ve güvenilir bu tekniği kullandık. Bu teknik, deneyimli ellerde aslında hiçbir hayvan kaybı ile güvenli kanıtlamıştır. Ayrıca, bu teknik,Kronik bir model farelerin tekrarlanan çalışmalar için de kullanılabilir.
Giriş
Laboratuvar faresi biyoloji ve patobiyolojisinde başlıca memeli model olarak hemen hemen tüm türlerin yerini almıştır. Laboratuvar faresi açıkça ve yoğun insan hastalığının bir model olarak değer olduğu gösterilmiştir ve insan biyolojisi ve hastalık anlayışımızın gelişmeler paha biçilmez kanıtlamıştır küçük memeli türüdür. Kısa gebelik süresi ve önemli ölçüde daha düşük maliyetli bir biyomedikal araştırmalarda yaygın araç olarak boş ve transjenik farelerin geliştirme ve çalışma sağladı. Ancak, ortalama laboratuvar faresi (20-25 g) büyüklüğü dolayısıyla, bazı araştırmacılar, daha büyük memeli türler olan, fizyolojik ya da cerrahi araştırmalarda kendi çalışma sınırlı gelmiştir. Bu çalışmalarda fareler kullanarak bir engel derin anestezi altında fizyolojik ölçümler veya geniş cerrahi prosedürler sağlayacak entübasyon teknikleri ile karşılaşılan zorluk olduğunu. Trakeostomi 1, standart te olarak kullanılmaktadırçünkü gerekli bu tekniği ve mütevazı beceri yerine daha kolay yerine entübasyon NİK. Ancak, trakeostomi kronik veya kurtarma cerrahi çalışmalar için elverişli değildir; bu nedenle, akut deneyler ile sınırlıdır. Trakeostomi de iltihap veya hassas fizyolojik refleksleri önemli olduğu araştırma karıştırıcı bir değişken olabilir.
Bizim laboratuvar diğer araştırmacılar tarafından açıklanan tekniklerin çoğunu denedim ve çeşitli nedenlerle için onları yetersiz buldu. Trakeostomi çok travmatik ve kanama ve hava yolu iltihabı neden olur. Çok daha sorunlu bunun fizibil tekrar edilemez olmasıdır. Ekipman mütevazı bir yatırım gerektiren birçok nispeten non-invaziv teknikler yeterince güvenilir değildir. Diğer teknikler ekipman belirli bir uygulamada çalışacak olmadığını bilmeden haklı zordur pahalı ekipman gerektirir. Böylece, biz artık t gerekli bir nontravmatik tekniğini geliştirmek için çalıştıhan özel bir ekipman mütevazı bir yatırım, hızlı bir şekilde gerçekleştirilebilir olabilir ve güvenilir bir şekilde, kronik modellerinde tekrar olabilir ve hayvanların çok sayıda kullanılabilir. İşte biz böyle bir teknik rapor.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1.. Hayvan Preparasyon
- (Küçük fareler bir uzman tarafından entübe edilebilir) 8 hafta daha eski ve daha 20 g olan fareler edinin.
- Anestezi
- Periton boşluğu içine bir preanesthetic olarak ketamin ve ksilazin 20 mg / kg, her biri, farelere enjekte edilir. (Bu doz tamamen fare uyutmak için yeterli değildir, ancak mekanik ventilasyon entübasyon sonrası güvenli taşınmasını kolaylaştırır.) Ancak, dozlar ayarlama kurumsal veterinere danışılarak anestezik yanıta göre gerekli olabilir.)
- 90-120 saniye boyunca bir indüksiyon odası içinde% 3.5 izofluran / oksijen ile farelerde anestezi neden.
- Dikkatle, solunum hızı dikkate alınmalıdır. Değil en az 45 bpm giderek yavaş olmalıdır.
2. Entübasyon için hazırlık
- Indüksiyon odasından fareyi çıkarın ve sıkıca Scruff.
- Gent yastıklı ince forseps kullanınly ağız dil uzatmak.
- Iki parmak arasında dil tutma ve yumuşak bir kuvvet uygulanarak dil uzatma koruyun.
- Dikey hareket ile otoskop ve spekulum üzerinde fare yukarı çekin.
- Sıkıca Eksfoliyant ise otoskop oküleri bakmak ve dil ve berduş tarafından yavaşça fareyi yukarı çekin.
- Ses telleri için dikkatle bakmak. Onlar bu zaman kolayca görünür olmalıdır. Laryngis ADITUS (laringeal açılış yapısı) nispeten beyaz bakmak gerekir. Her nefes ile kablolarından hareket olmamalıdır. Kordonlar hareket etmiyor veya kötü görüntülendi varsa, biraz hayvan döndürün ve yavaşça boynunu hyperextend.
- Dominant elin ile, bir kalem gibi, kateterin ucuna uzanan PE10 boru 1 cm uzunluğunda, kateter 20 G, 1 tutun ve spekulumun tarafına takın. PE boru, bir stile veya buji olarak hizmet vermektedir.
- PE10 Tubi yönlendirinng ses tellerinin (stile) ve göbek kadar PE boru üzerinde 20 G kateter (endotrakeal tüp) ilerletmek alt kesici dişlerinin düzeydedir. Hızla bu stile kaldırmak.
- Yavaşça spekulum kapalı hayvan almak ve deney boyunca genel anestezi korumak için sürekli% 2 izofluran ile mekanik ventilatöre hayvan koyarak boru konumunu doğrulayın. Entübasyon onaylamak için PEEP tuzak geçiyor süresi dolan havayı (baloncuklar) gözünüzde canlandırın. Özofagus entübasyon birkaç baloncuklar neden olsa da, o kadar belirgin ya da endotrakeal entübasyon ile tutarlı olmayacaktır. Ayrıca, negatif deplasmanlar için bir hava yolu basıncı izleme (Şekil 1) gözlemlemek. Bunlar, borunun doğru yerleştirilmesi teyit etmektedir. Seçenek olarak ise, IV boru halinde su küçük bir miktar ve ET borusu bağlanabilir. Solunum 2 fare ve gelen hareket doğrulanıyor. Özofagus entübasyon, p durumundaressure izleme anlamlı olarak daha yüksek basınçlar ve hiçbir olumsuz deplasmanlar ortaya çıkaracaktır. Endtidal CO 2 yararlı olmasına karşın, teknik olarak bu küçük tidal hacimleri (~ 200 ul) ve bu çok pahalı olacaktır yapmak için ekipman verilen çok zor olacaktır. Tarif basit teknikleri tam yeterli ve çok daha ucuzdur. Izofluran anestezi mevcut değilse, tüm işlemler, genel anestezi xylazine, 10-20 mg / kg ketamin ile bağlantılı olarak 80-120 mg / kg kullanılarak yapılabilir.
3. Alternatif Tekniği: Doğrudan Larengoskopi Otoskop Tekniği ile Temelde Akciğer içine Çalışma Maddelerin Doğrudan Uygulamasının için, Diğer Amaçlı kolaylıkla Kullanılır.
- Indüksiyon odası içinde 90-120 saniye boyunca% 3.5, bu işlem için tek başına izofluran ile anestezi hayvanlarda neden.
- Sıkıca kafatası tabanında hayvan Scruff ve yavaşça dil uzatmakince forseps ile.
- Hayvan daha da yukarı çekti olamaz kadar yavaşça dilini tutan, dik spekulum üzerine (değiştirilmemiş) hayvan çekin.
- Ses telleri tek başına bu teknikle en sık görüntülenmiştir, fakat hayvan ve tam görünüme getirmek için hiper-genişletilmiş boyun döndürmek olabilir.
- Glottis instillate içeren bir jel yükleme pipet ilerlemek ve sıvıyı aşılamak. Spekulum hipofarenks ile bir mühür yapar çünkü fare kabloları aracılığıyla gitmez herhangi bir kalıntı sıvı aspire edecek. Bu kolayca rhonchorous tarafından doğrulanmadı nefes zaman sıvı akciğerlerde tam olarak dağıtılmış kadar fare şimdi yapar geliyor.
- Alternatif olarak, sıvı arkasında bir hava bolus ile akışkan 50 ul ihtiva eden bir 0.5 ml şırıngaya PE10 boru bağlayın. 0.5 cm için ses tellerinin dikkatle PE boru ilerlemek ve yavaş yavaş solunum içine boşaltın. Bununla birlikte, alt solunum yolu için zaman zaman travma meydana gelir uNumunenin daha teslim olmadan bu tekniği şarkı.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Yukarıdaki tekniği ile entübasyon, güvenilir ve hızlı. Endotrakeal tüpün uygun yerleştirme en kolay ve batık ekspiratuar uzuv süresi dolan gaz kabarcıklarının oluşması gözlemleyerek tarafından doğrulanmadı ventilatör devresi (genellikle bir PEEP tuzak) ve (Şekil 1) izleme, bir hava yolu basıncı üzerindeki olumsuz sapmaların. Hava yolu basıncı izleme üzerinde olumsuz deplasmanlar en güvenilir. Diğer ekspiratuar vantilatör devresi 2'ye bağlı intravenöz boru küçük bir akışkan damlasının hare...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu yazıda travmatik olmayan ve aynı hayvanda tekrar tekrar kullanılabilir fareler entübe için basit, güvenilir bir tekniği açıklar. Bu teknik bir mütevazı toplamı için satın alınabilir basit laboratuar ya da tıbbi ekipman ile gerçekleştirilebilir. Ilk Hastings ve arkadaşları tarafından rapor edilen 4 doğrudan laringoskopide tekniği, çeşitli amaçlar için de kullanılabilir, ama esas olarak doğru bir alt solunum sistemine test maddesi sunmak için. Biz nedeniyle tekrarlanan ölçümler için kolaylığı, hız, basitlik,...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.
Teşekkürler
Veteran İşleri Bölümü'nden bir Liyakat Grant ve Sağlık Ulusal Enstitüleri enstitünün bir T32-HL098062 hibe bu çalışmaları destekledi. Biz minnetle Randolph H. Hasting, MD, Ph.D. tavsiyesi teşekkür etmek istiyoruz ve tavsiye ve VA San Diego Sağlık Sistemi Veteriner Tıp Birimi desteği.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Çalışma Otoskop | Kafası Welch Allyn | 21700 | $188.98 |
| Otoskop Kolu | Welch Allyn | 71000 | $112.20 |
| Yeniden Kullanılabilir Spekulum | Welch Allyn | 22002 | $3.98 |
| İnce Forseps | Miltex | 18-779 | $107.18 |
| Otoskop | |||
| tutmak için küçük kelepçe standıIsofluran Vaporizer (vakumlu atık gaz işleme ile çoklu devre) | Summit Medical | $3,000 | |
| Flexivent (Hayvan Vantilatörü) | SCIREQ | $35,000 | |
| İntravenöz kateter (20 G, 1 inç) | BD | 381233 | $9.62 |
| Polietilen boru (PE10) (ID'de 0.011, OD'de 0.024) 100 ft | Intramedic, Clay-Adams | 427401 | $115.70 |
| Ketamin 100 mg / ml (10 ml şişe) | Butler | 23061 | $10.00 |
| Xylazine (100 ml şişe) | Vedco | 24105 | $20.00 |
| Isofluran (250 ml şişe) | $15.00 | ||
| Vekuronyum bromür 10 mg/10 ml | Pfizer | NDC 0069-0094-01 | $15.00 |
Kaynaklar
- Rockman, H. A., et al. Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy. Proc. natl. Acad. Sci. U.S.A. 88, 8277-8281 (1991).
- Watanabe, A., Hashimoto, Y., Ochiai, E., Sato, A., Kamei, K. A simple method for confirming correct endotracheal intubation in mice. Lab. Anim. 43, 399-401 (2009).
- Orebaugh, S. L. Succinylcholine: adverse effects and alternatives in emergency medicine. Am. J. Emerg. Med. 17, 715-721 (1999).
- Hastings, R. H., Summers-Torres, D. Direct Laryngoscopy in Mice. Contemp. Lab. Anim. Sci. 38, 33-35 (1999).
- Berul, C. I., Aronovitz, M. J., Wang, P. J., Mendelsohn, M. E. In vivo cardiac electrophysiology studies in the mouse. Circulation. 94, 2641-2648 (1996).
- Ewart, S. L., Gavett, S. H., Margolick, J., Wills-Karp, M. Cyclosporin A attenuates genetic airway hyperresponsiveness in mice but not through inhibition of CD4+ or CD8+ T cells. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 14, 627-634 (1996).
- Ewart, S. L., Mitzner, W., DiSilvestre, D. A., Meyers, D. A., Levitt, R. C. Airway hyperresponsiveness to acetylcholine: segregation analysis and evidence for linkage to murine chromosome 6. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 14, 487-495 (1996).
- Spoelstra, E. N., et al. A novel and simple method for endotracheal intubation of mice. Lab. 41, 128-135 (2007).
- Boll, H., et al. High-speed single-breath-hold micro-computed tomography of thoracic and abdominal structures in mice using a simplified method for intubation. J. Comput. Assist. Tomogr. 34, 783-790 (2010).
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. J. Appl. Physiol. 87, 2362-2365 (1999).
- Vergari, A., Polito, A., Musumeci, M., Palazzesi, S., Marano, G. Video-assisted orotracheal intubation in mice. Lab. Anim. 37, 204-206 (2003).
- Vergari, A., et al. A new method of orotracheal intubation in mice. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci. 8, 103-106 (2004).
- Hamacher, J., et al. Microscopic wire guide-based orotracheal mouse intubation: description, evaluation and comparison with transillumination. Lab. Anim. 42, 222-230 (2008).
- Rivera, B., Miller, S., Brown, E., Price, R. A novel method for endotracheal intubation of mice and rats used in imaging studies. Cont. Top. Lab. Anim. Sci. 44, 52-55 (2005).
- MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. An improved simple method of mouse lung intubation. J. Appl. Physiol. 106, 984-987 (2009).
- De Vleeschauwer, S. pI., et al. Repeated invasive lung function measurements in intubated mice: an approach for longitudinal lung research. Lab. Anim. 45, 81-89 (2011).
- Zhao, X., et al. A technique for retrograde intubation in mice. Lab. Anim. 35, 39-42 (2006).
- Singer, T., et al. Left-sided mouse intubation: description and evaluation. Exp. Lung Res. 36, 25-30 (2010).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
