Böyle Amerikan ıstakoz balıkçılık gibi sömürülen kabuklu balıkçılık için balıkçılık kaynaklı değişimler, potansiyel çiftleşme başarısında düşüşe neden üreme dinamiklerini etkileyebilir. Bu çalışmanın amacı, fizyolojik veya işlevsel olgun olabilir dişi ıstakoz çiftleşme başarısını tespit etmek için non-invaziv bir yöntem geliştirmek için oldu.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
Kuzeybatı Atlantik'te en verimli balıkçılık biri olmasına rağmen, çok Amerikan ıstakoz doğal üreme dinamikleri hakkında bilinmemektedir. Sömürülen kabuklu nüfus (yengeç ve ıstakoz) son çalışmalar olgun kadın nedeniyle sperm sınırlaması tam üreme potansiyeline ulaşmak mümkün durumlar vardır olduğunu göstermektedir. Amerikan ıstakoz balıkçılık farklı bölgelerinde bu olasılığı incelemek için, güvenilir ve ağrısız bir yöntem denizde kadın ıstakoz çok sayıda örnekleme için geliştirilmiştir. Bu yöntem, bir sperm fiş varlığını veya yokluğunu belirlemek için ve sperm varlığı açısından incelenebilir bir örnek geri alma dişinin seminal deponun içine bir küt uçlu bir iğne ekleme içerir. Kontrol çalışmalarında bir dizi bu tekniğin güvenilirliğini test etmek için dock ve laboratuarda yapılmıştır. Bu çabalar 294 kadın ıstakoz onaylamak için örnekleme getirdiğini varlığı ofa sperm fiş güvenilir bir kap içinde sperm göstergesidir ve dolayısıyla, çiftleşme oldu. Bu kağıt metodoloji ve örneklenen toplam kadın bir alt elde edilen sonuçları göstermektedir. George Bankası ve Cape Ann, MA örneklemeyi 230 kadın ıstakoz (boyut aralığı = Kabuk uzunluğu olarak 71-145 mm),% 90.3 sperm için pozitiftir. Bazı kadınlarda sperm yokluğu için potansiyel açıklamalar şunlardır: gelişmemişlik (fizyolojik olgunluk eksikliği), yumurtası döllemek için kullanılan sonra sperm fiş dökümünü ve çiftleşme aktivite eksikliği. Anketler kadın ıstakoz çiftleşme başarısını incelemek için bu teknik doğal popülasyonlarının üreme aktivitesini belgelemek için alanda kullanılabilecek güvenilir bir vekil olduğunu göstermektedir.
Giriş
Amerikan ıstakoz (Homarus americanus) Kuzey Atlantik (~ $ 390,000,000 üzerinde değerli 2011 yılında 56.000 mt) 1 en verimli balıkçılık biridir. Ancak, vahşi popülasyonlar bu türün üreme dinamikleri konusunda anlayış genel bir eksikliği vardır. Aktif üreme katılan bireylerin sayısı ve boyutları da dahil olmak üzere üreme çıkış daha doğru tahminler, üreten bir stok değerlendirme sürecini iyileştirmek olabilir. Dikenli ıstakoz 2, mavi yengeç 3, kral yengeç 4, taş yengeçler 5 ve kar yengeç: Örneğin, nedeniyle sperm sınırlaması tam üreme potansiyelini elde engellenir kadın dahil olmak üzere birçok ticari istismar deniz kabuklular için bir endişe olarak tespit edilmiştir 6. Genel amaç sperm sınırlama yanı sıra Amerikan ıstakoz balıkçılığın belirli bölgelerinde bir faktör olabilir eğer belirlemektir.
nt "> (gözle görülür sağlam, son zamanlarda sıkılır yumurta) ovigerous kadın ıstakoz ile alakasız bir etiketleme çalışması yapılırken İstakozlarda potansiyel bir sperm sınırlama sorununun ilk belirtileri gözlendi. ~ bu hayvanların% 15 düşmüş olduğu belirtilen balıkçıların raporları Recapture onların yumurta kavramaları sadece 1-2 ay sonra. çalışma hipotezi bazı ıstakoz döllenmiş olmasaydı yumurta taşıma ve, sonuç olarak, 'düştü' 7., bir sonraki çalışmasının ön veriler gerçeği doğruladı olduğunu olduğunu ıstakoz olacak başarıyla evlendirilen değil ve bu döllenmemiş yumurta, sadece ~ 1 ay 8 uygulansa bile yumurta a'ya. Dolayısıyla, doğal popülasyonlarının döllenmemiş yumurta taşıyan dişilerin gözlem verilen, biz sperm sınırlama katkıda olabilir için kapsamını belirlemek için çalıştı cinsel olgun ıstakozlarına üreme bir submaksimal düzeyde. Bu hedefe ulaşmak için, teknik spermatositlerde algılamak için geliştirilmiştirPhore çiftleşme sırasında erkek tarafından yatırılır.Bu kağıt ve video kadın ıstakoz çiftleşme başarısını tespit etmek için geliştirilen bir invaziv olmayan, basit bir yöntem. Teknik denizde, ya araştırma ya da ticari balıkçı teknelerinde hızlı ve güvenilir şekilde kullanılabilir. Bu numune alma yöntemin ayrıntıları yanı sıra bazı temsili bulgular tekniğinin uygulanmasını göstermek için sunulmuştur.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Kısım A: Alan Örnekleme Tekniği
1.. Kadın Ölçümler
- Her dişi ıstakoz, karapas uzunluğu (CL) ve kaliperler bir çift kullanarak en yakın 1.0 mm, ikinci karın segmentinin genişliğini ölçmek.
NOT: (dişiler yumurta taşıyan) karın genişliği cinsel olgunluk göstergesidir çünkü ikinci karın segmenti ölçülür. Buna ek olarak, (adım 1.2), daha sonra üreme aşaması ile, bu veriler için gerekli dökücü sahne tespit edilmesi avantajlı olabilir. - Karın pleopods birinde (İstakozlarda standart bir metodolojik protokol) kapalı bir küçük distal bölümünü Klip ve daha sonra bir diseksiyon mikroskobu 9 görüntüleme için temiz deniz suyunda pleopod saklayın.
NOT: Bu adım aynı zamanda dişiler yumurtalarını 10 a'ya hazırlanıyor bir göstergesidir pleopods, çimento bezlerinin varlığını ortaya çıkarabilir.
2. İğne Insertion
- (18, G Tablo 1 e bakınız), şırınga iğnesi kaydedin ~ 45 ° (Şekil 1) ° 'de, kuyruk doğru açılı seminal deponun içine 1 cm.
Not: önce seminal deponun altındaki sperm en yüksek konsantrasyonu (Şekil 1) ulaşmak için sperm tamponundan itilir gibi dokunulmamış sperm fişli ıstakoz, iğne, sokma esnasında bir direnç karşılayabilir.
NOT: fiş varlığı, kendi içinde, ıstakozlar evlendirilen olduğunu güvenilir bir göstergedir. Bazı hayvanlarda hiçbir spermatofor mevcut olabilir, çünkü çok az direnç olabilir, spermatofor henüz bir fiş içine sertleştirilmiş edilmemiştir, ya da daha önce yumurta bir veya daha fazla kavramaları dölleme için kullanılmış olabilir küçüktür.
Şekil 1. İğne ekleme ve ıstakoz seminal kabın görüntüle. Sperm örneği ayıklamak için ıstakoz seminal yuvasına künt uçlu iğne takma. İğnenin açısı ve derinliği de tutarlı bir numune elde etmek için kritiktir. Sağ: disseke ve dikey olarak bölünmüş olan bir seminal deponun göster. Spermatozoa deponun dibinde (derin noktası) seviyesinde yer alan ise sperm fiş, kabın en üst ya da en dış kısmını kaplar. Bu bir derinlikten numune kabını delinerek kan kirlenmiş numunesi neden olabilir dikkat etmek önemlidir. resmi büyütmek için buraya tıklayın .
3. Sperm Tak Penetran
- Başlangıçtaki yerleştirme sonrası, (vücut eksenine dik olarak) yaklaşık dikey iğne açısını yükselmek ve çok yavaş çalışmaya başlaraşağı kabın içine.
- Uç kuyruk doğru hafifçe işaret edilmektedir, böylece belirli bir açıda eğimli iğne tutun. Sonunda matris içine nüfuz kadar bu durumda, iğne ucu, tıpanın üst sıkıştırma edilir.
- Direnç kez daha hissedilir kadar yavaş yavaş aşağıya doğru itmek için iğne devam - bu kabın alt ve numune alınır burada.
4. Sperm Kaldırma
- Haznenin dibinden bir örnek (çoğunlukla katı fiş madde, sıvı, sperm ve diğer sıvı) çıkarın ve 2.0 ml işaretlenmiş bir plastik tüpe örnek yatırmak.
- Soğuk deniz suyu ~ 0.1-0.5 ml yuvasını yıkayın.
- Aynı tüp içerisinde sıvı ve yeri, yaklaşık 0.3 ml çıkarın.
- Buz üzerinde mağaza sperm numuneleri laboratuvarda incelenir kadar.
Bölüm B: Lab Sperm Örneklerinin İncelenmesi
Not: Bireysel l seminal kapların kaldırılır Örnekler obsters sperm hücreleri mevcut veya yok olmadığını belirlemek için muayene edilmelidir. - Her plastik tüp, bir kapak kayma ile bir cam slayt üzerinde bir yerde, ve bir bileşik mikroskop ile 100X at görünümünde ~ sıvının 50 ul çıkarın.
- Gibi örnekler Puan: kıt sayıda, ya da hiç sperm (bu çalışmada gerçek sperm sayıları, Şekil 2 ölçmek vermedi).
Şekil 2. Istakoz sperm örneği görüntüler. 40X büyütmede bir bileşik mikroskop ile bakıldığında, bir dişinin seminal priz alınan ıstakoz sperm örneklerinin Görüntüler. Soldaki resim, diğer (sağ), seyrek bir örneği (ölçek bar = 10 mikron) göstermektedir ise çok sayıda sperm bulunan bir örnek gösterir.. Jpg "target =" _blank "> büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Burada bildirilen veriler nearshore ve offshore yerlerde hem kökenli kadın ıstakoz bir alt kümesi için vardı. Nearshore grup Cape Ann, Massachusetts yakın kıyı sularında yakalanan ve inceleme için laboratuvara soğutucularda taşınan 44 ıstakoz oluşuyordu. 186 deniz ıstakoz toplam George Bank yakalanan ve New Hampshire'da bir ticari tutma tesiste örneklenmiştir.
Sperm numuneleri yukarıda tarif edilen yöntemlere göre tüm hayvanların elde edilmiş ve hemen sperm varlığı ya da yokluğu iç...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu video ve kağıt anahat ve dişi ıstakoz başarıyla evlendirilen varsa belirlemek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Bu yaklaşım kullanıcıların çeşitli denizde ıstakoz büyük ölçekli örnekleme için kullanılabilir olması yeterince basittir. Bu yöntem çiftleşme sırasında erkek ikinci dişi ıstakoz geçirilen seminal hazne içinde bir spermatofor varlığını tespit dayanmaktadır. Bu spermatophores kısmen da hazne içinde yatırılır kısa bir süre sonra, bir sperm fiş halinde sertleşmesi, bu yüzden, bir sperm tıpanın varlığı da çift...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar çıkar çatışması beyan ederim.
Teşekkürler
Onların işbirliği çok takdir - Yazarlar olan tekneler biz örnekleme için izin verildi, tüm New England ticari lobstermen teşekkür etmek istiyorum. Buna ek olarak, biz Little Bay Lobster Şirketi (Newington, NH) ve bize kendi tesislerinde örnekleme yapmak izin Champlains Seafood (Point Judith, RI) teşekkür ederim. Aşağıdaki UNH öğrenciler bu çalışma boyunca değerli yardım sağladı: Haley Beyaz, Françoise Morrison, Sarah HAVENER, Audra CHAPUT ve Mayıs grose. Bu proje whw (proje # R/CFR-11) ve JSG bir UNH Deniz Programı Hibe NH SeaGrant hibe tarafından desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Kaliperler | Mitutoyo Digimatic | 500-196-20 | http://www.globalindustrial.com |
| 3 ml Luer-Lok şırınga | Beckton-Dickinson | 309585 | |
| www.bd.com Monoject alüminyum göbek künt iğneler, 18 G x 1 | Webster Veteriner | 8881202348 | www.mywebstervet.com |
| 2.0 ml Plastik saklama tüpleri | Eppendorf | wu-06333-72 | http://www.coleparmer.com |
| Buzlu | |||
| Bileşik ışık mikroskobu | Olympus | BH System | http://www.olympusamerica.com |
| Kapak kızaklı | 75 mm x 25 mm, ~1 mm kalınlık | ||
| Tek kullanımlık uçlu |
Kaynaklar
- FAO and Agriculture Organization of the United Nations). Fisheries and Aquaculture Department. , Available from: http://www.fao.org (2012).
- MacDiarmid, A., Butler, M. J. Sperm economy and limitation in spiny lobsters. Behav. Ecol. Sociobiol. 46, 14-24 (1999).
- Kendall, M. S., Wolcott, D. L., Wolcott, T. G., Hines, A. H. Influence of male size and mating history on sperm content of ejaculates of the blue crab Callinectes sapidus. 230, 235-240 (2002).
- Sato, T., Ashidate, M., Goshima, S. Effects of male mating frequency and male size on ejaculate size and reproductive success of female spiny king crab, Parolithodes brevipes. Mar. Ecol. Prog. Ser. 296, 251-262 (2005).
- Sato, T., Goshima, S. Impacts of male-only fishing and sperm limitation in manipulated populations of an unfished crab, Hapalogaster. 313, 193-204 (2006).
- Rondeau, A., Sainte-Marie, B. Variable mate-guarding time and sperm allocation by male snow crabs (Chionoecetes opilio) in response to sexual competition, and their impact on the mating success of females. Biol. Bull. 201, 204-217 (2001).
- Waddy, S. L., Aiken, D. E. Mating and insemination in the Ameri can lobster,Homarus americanus. Crustacean sexual behavior. Bauer, R. T., Martin, J. W. , Columbia University Press. NY. 126-144 (1990).
- Johnson, K. J., Goldstein, J. S., Watson, W. H. Two methods for determining the fertility status in early-stage American lobster, Homarus americanus, eggs. J. Crust. Biol. 31, 693-700 (2011).
- Aiken, D. E. Proecdysis, setal development, and molt prediction in the American lobster (Homarus). 30, 1337-1344 (1973).
- Aiken, D. E., Waddy, S. L. Cement gland development, ovary maturation, and reproductive cycles in the American lobster Homarus americanus. J. Crust. Biol. 2, 315-327 (1982).
- Pugh, T. L., Goldstein, J. S., Lavalli, K. L., Clancy, M., Watson, W. H. At-sea determination of female American lobsters (Homarus americanus) mating activity: Patterns vs. expectations. Fish. Res. 147, 327-337 (2013).
- Bauer, R. T. Phylogenetic trends in sperm transfer and storage complexity in decapod crustaceans. J. Crust. Biol. 6, 313-325 (1986).
- Talbot, P., Helluy, S. Reproduction and embryonic development. Biology of the Lobster: Homarus americanus. Factor, J. R. , Academic Press. NY. 177-216 (1995).
- Cooper, R. A., Uzmann, J. R. Ecology of juvenile and adult Homarus. The biology and management of lobsters. Cobb, J. S. 2, Academic Press. NY. 97-142 (1980).
- Estrella, B. T., McKiernan, D. J. Catch-per-unit-effort and biological parameters from the Massachusetts coastal lobster (Homarus americanus) resource: description and trends. NOAA Tech. Rep. NMFS. 81, (1989).
- Waddy, S. L., Aiken, D. E. Multiple fertilization and consecutive spawning in large American lobster, Homarus americanus. Can. J. Fish. Aquat. Sci. 43, 2291-2294 (1986).
- Atlantic States Marine Fisheries Commission (ASMFC). American lobster stock assessment report for peer review. ASMFC Stock Assessment. , Washington, D.C. (2009).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
