Memeli burun karmaşık iç yapıları ile çok fonksiyonlu bir organdır. Burun boşluğu gibi anatomik yerleri, morfolojisi ve fonksiyonlarında belirgin farklılık, koku solunum ve skuamöz epitel gibi çeşitli epitel ile kaplı olduğu. Erişkin farelerde, burun özellikle iç yapıları, ana koku epiteli (MEB) olarak posterior bu olanlara deneysel erişimi sınırlayarak, çeşitli kafatası kemikleri ile kaplıdır. Burada korunmuş anatomik organizasyonu ile neredeyse tüm ve sağlam burun dokuları elde etmek için etkili bir yöntem tarif. Bir mikroskop altında cerrahi aletler kullanarak, sırayla burun doku çevreleyen kafatası kemikleri çıkarın. Bu işlem hem paraformaldehid-sabit ve taze disseke, tenli fare başlarına yapılabilir. Tüm kemik sıyırma işlemi geleneksel kimyasal bazlı de için gerekli deneysel zaman çok daha kısadır 20-30 dk, alırkalsifikasyon. Ayrıca, burun doku hazırlık sağlam ince yatay ya da koronal veya sagittal kesitler elde etmek için önemlidir konka, arasında sıkışan hava kabarcıklarını çıkarmak için kolay bir yöntem mevcut. Bizim yöntem kullanılarak hazırlanabilir burun doku özellikle bölgeye özgü inceleme ve karşılaştırma ilgilendiren çalışmalarda, bütün montaj tüm epitel gözlenmesi, hem morfolojik, immünositokimyasal, RNA in situ hibridizasyon ve fizyolojik çalışmalar için kullanılabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Korunan Anatomik Örgütü ile bozulmamış Fare Burun Doku hazırlamak için etkili bir Manuel kemik sıyırma Yöntemi
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Giriş
Memeli burun boşluğu doku ve farklı fonksiyonlara hizmet organların çeşitli türlerini içerir. Burun boşluğuna, akciğerlere ve dışına hava yolculuğu sağlayan, üst solunum yolu, ve giriş kısmını oluşturur. Solunan hava o da temizlik ya da rahatsız edici ve toksik maddeler ve bulaşıcı mikroorganizmaların 2 kaldırmak için filtreleme olarak sıcaklık ve nem klima 1 uğrar burun boşluğu geçer. Her iki tedavi burun epiteli ve bezleri ve damarlar da dahil olmak üzere subepitelial dokular, tarafından yürütülen ve alt solunum yolları ve akciğer korumak için büyük öneme sahiptir. Solunum ve epitel savunma rolüne ek olarak, nazal doku da geçen hava kimyasal m....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Fare Burun Hazırlık
Bu çalışmada, yetişkin C57BL / 6 fareleri kullanılmıştır plan. Tüm hayvan bakımı ve işlemleri University of Maryland, Baltimore County Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1.1 paraformaldahyde sabit fareler burun Edinme
Şekil 1. Bir fare kafatası kemikleri bir:. Kafatasının dorsal görünüş B:. Kaldırıldı çene ile kafata....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu yöntemi kullanarak, biz güvenilir neredeyse tamamen sağlam burun dokusu elde edebilirsiniz. Şekil 2A bir paraformaldehid sabit kafasından yetişkin burun örnek bir görüntü gösterir. Bu örnek olarak, MEB, septal organı, Grüneberg ganglion ve VNO dahil olmak üzere dört alt-koku alma duyu organları, bozulmamış. Ayrıca, solunum epitel ve bu bezleri ve damarlar gibi subepitelial dokular, korunur. Biz başarıyla biz morfolojisi, dağılımı, sinir innervasyon ve çeşitli özel duyusal hücre popülasyonlarının
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada, aşağıdaki doku koruyucu iken sırayla çevreleyen kemik kaldırarak fare burnundan sağlam koku ve solunum doku izole etmek için bir adım-adım prosedürü gösterdi. Dikkatli kemik kaldırma bütün olarak bile en hassas dokuları korumak olduğunu göstermektedir. Biz de sinir bağlantısını korumak için birlikte beyin ve burun dokusu hem izole edildiği bu tekniğin olası değişiklikler, fikir paylaşmak. Bu yeni yöntem, in situ hibridizasyon ile immünohistokimyasal, RNA, daha fazla işleme ve fizyolojik deneyler için, b.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.
Teşekkürler
Bu çalışma Weihong Lin için araştırma destekleri (NIH / NIDCD 009.269, 012.831 ve ARRA idari ek NIH hibe) tarafından desteklenmiştir. Biz özellikle kamera çekimi ve işleme yaptığı teknik yardım için UMBC de Bay Tim Ford teşekkür ederim. Ayrıca videoya, kendi ekipman yardım için Olympus America Inc Dr Daphne Blumberg, UMBC de Bayan Chere Petty ve Bay Nicholas McCollum teşekkür etmek istiyorum.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Diseksiyon | |||
| Rongeur, 1.0 mm Çene genişliği | World Precision Instruments (WPI) | 501333 | |
| İnce forseps, Dumont 3 | WPI | 503235 | |
| İnce forseps, Dumont 55 | WPI | 14099 | |
| İnce forseps, Dumont AA | Güzel Bilim Araçları (FST) | 11210-20 | |
| Numune forsepsleri, Tırtıklı | VWR | 82027-440 | |
| Çalışma makası | WPI | 501753 | |
| İris makası, Düz | Miltex | V95-304 | |
| Diseksiyon mikroskobu | Olympus | SZ40< | |
| Doku gömme | |||
| Optimum kesme sıcaklığı (OCT) bileşiği | Sakura Finetek | 4583 | |
| Plastik gömme kalıbı | VWR | 15160-215 | |
| Aspiratör vakum pompası | Fisher Scientific | 09-960-2 | |
| [header] | |||
| Bölüm boyama | |||
| nötr kırmızı | ACROS Organik | CAS 553-24-2 | Çekirdek boyama |
Kaynaklar
- Naclerio, R. M., Pinto, J., Assanasen, P., Baroody, F. M. Observations on the ability of the nose to warm and humidify inspired air. Rhinology. 45, 102-111 (2007).
- Bjermer, L. The nose as an air conditioner for the lower airways. Allergy. 54, Suppl 57. 26-30 (1999).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
