Bu video makalede, Drosophila melanogaster uçmak yetişkin meyve koku bağımlı gıda arama davranışı üzerine açlık veya tokluk etkisini ölçmek için otomatik bir deneyi açıklar.
Yöntem makalesi
Bu video makalede, Drosophila melanogaster uçmak yetişkin meyve koku bağımlı gıda arama davranışı üzerine açlık veya tokluk etkisini ölçmek için otomatik bir deneyi açıklar.
Çok hayvan için, açlık uygun gıda kaynakları için arama kolaylaştıran bir şekilde koku alma sistemindeki değişiklikleri teşvik etmektedir. Bu video makalede, Drosophila melanogaster uçmak yetişkin meyve koku bağımlı gıda arama davranışı üzerine açlık veya tokluk etkisini ölçmek için otomatik bir deneyi açıklar. Meyve sinekleri üzerinde görünmez kırmızı ışıkla aydınlatılmış bir ışık geçirmez kutu, özel veri toplama yazılımı ile bağlantılı bir kamera aynı anda altı sineklerin konumunu izler. Her sinek merkezinde bir yemek kokusu içeren bireysel arenalarda yürümek sınırlıdır. Test arenalar fonksiyonları koku birikmesini önlemek için bir gözenekli katta dinlenme. Koku kaynağı, farklı fizyolojik durumlarda altında koku hassasiyeti yansıtan bir metrik bulmak için Gecikme, yazılım analizi ile belirlenir. İşte, bu davranış paradigma çalışan kritik mekaniği tartışmak ve sinek loadi ilgili özel konuları kapsamaktadırng, koku kirliliği, tahlil sıcaklık, veri kalitesi ve istatistiksel analizi.
Yiyecek aramak ve gıda tüketimi 1: açlık Devletleri iştahlı davranışları iki tür teşvik. Bu basit davranışsal deney 2,3 yem ile bağlantılı kemotaktik davranışlarının çalışma için yararlıdır. Özellikle, bir gıda koku hedef bulma sinek pozisyon, yürüme hızı ve gecikme izler. Gıda bulgunun Gecikme iç iştahlı durumundaki değişikliklerin aşağı sineğin koku algılama sistemi duyarlılık değişiklikleri ölçmek için metrik olarak hizmet vermektedir. Bu deneyde, bir el sürümü daha önce GABA-B reseptör sinyal 3 uçan yetişkinde koku lokalizasyon davranışı için çok önemlidir göstermek için kullanılmıştır. Testin geçerli otomatik versiyon nöropeptid-F (SNPF) sinyal Drosophila koku haritayı yeniden şekillendirir ve etkileri davranışlarını 2 iştahlı nasıl kısa çalışmada etkili oldu.
Test karanlık, sıcaklık ve nem kontrollü odada yapılır. Dijitalşeffaf akrilik test plakaları yukarıda belirtilen video kameralar 660-nm LED aydınlatma ile aydınlatmalı sinekler izleyebilirsiniz. Kameradan gelen bilgiler bir sonraki test alanına konuşlanmış bir bilgisayar tarafından gerçek zamanlı olarak işlenir. Biz test döneminde sinek pozisyonların koordinatlarını kaydetmek ve kaydetmek için veri toplama yazılımı kullanın.
Bu paradigmada, konu merkezinde bir gıda koku içeren bir arenaya salınır, koku nesne sinek yiyecek arama davranışı neden arenada bir gıda koku degrade oluşturur. Benzer bir koku ara protokol tek bir Drosophila larvalarının 7 chemosensation çalışma doğru uygulanmıştır. Böyle dört-alan olfactometer 4,5 'ya da t-labirent 6 gibi diğer davranışsal deneyler koku kaçınma veya cazibe davranışlarını değerlendirmek iken, bu paradigma iyi koku hassasiyeti ve kemotaksis davranışlarını değerlendirmek için uygundur.
Birkaç anahtar avantajları bu assa eşliky. Veri toplama ve analiz çoğunlukla otomatik çünkü Birincisi, bu, büyük veri kümelerinin hızlı edinimine izin. İkincisi, bu testte izole ederek onların davranışlarını etkileyebilecek sosyal koku ipuçlarını ortadan kaldırarak, tek bir sinek davranışını ölçer. Üçüncü olarak, protokol ve basit deneysel tasarım basitliği tahlil verimli ve başkalarına öğretmek için kolaylaştırır.
Buna ek olarak, bu deney daha Drosophila melanogaster 8'e uygun geniş genetik araç ile birleştirerek gıda arama davranışı altında yatan sinir devreleri araştırmak için kullanılabilir. Sessizlik veya heyecan nöronlar örneğin GAL4-UAS sistemi hem de UAS-shibire TS1 UAS-tetanoz-toksini ve UAS-TRPA1 (B) gibi araçlar ile elde edilebileceğini transgenlerin ifadesi hedeflenmiş 9-12 transgenlerin.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
1.. Fly Toplama ve Açlık
2. Gıda Koku hazırlanması
3. Test Odası ve Davranış Odası Kurulumu
4. Test Plakalar içine yükleniyor sinek
Test plakaları için özellikleri ile şemaları Ek Dosyalar bölümünde bulunabilir. Test plakası berrak akrilik yapılmış ve 6 test alanları oluşur. Basit kaydırıcı de kendi odalarına sinek yükleme, geçici çevreleme ve 6 sinek eşzamanlı salınımına imkan tutarak odalarını içeriyorDeneyin bir başlangıç. Katkılar pipetle gerektiği yerde plaka her arena merkezinde kazınmış çapraz kıllar göstermektedir.
5. Test Plakası konumlandırılması
6. Deney sırasında Fly Konumunu kaydedin
7. Özel Yazılım kullanma Veri Analizi
"Fly İzleme-Altı Bölgeleri için Veri Analizi" Ek Dosyalar bölümünde bulunabilir. Veri toplama sırasında, toplama yazılım kayıtları tek tek sinek pozisyonu bir metin dosyasında her zaman noktası koordinatları. Test plakaları üzerinde konumlandırılmış tek bir dijital fotoğraf makinesi 0.5 Hz'lik bir kare hızında görüntü kazanır. "Fly İzleme-Altı Bölgeleri için Veri Analizi" a bu metin dosyasından bilgileri ayıklar analiz yazılım programı) ortalama hızınızı hesaplamak, b) başarıyla koku kaynağı bulunan ve bir sinek c) grafik pencereleri oluşturmak hangi zaman noktasını belirlemek görünümüne kullanıcıya izin: zamanla zaman ve ortalama bir sinek hızı üzerinde koku kaynağından konumu, sinek mesafe uçmak. Ayrıca Spre içine kolayca ihracat verileri biçimlendiriradsheet programı. Bu makro, yiyecek arama gecikme arena merkezine 5 mm yarıçap içinde en az 5 saniye harcamak uçar hangi zaman noktası olarak tanımlanır.
8. İhracat VerileriElektronik Tablo Programına Veri Analizi Yazılımı
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Veri analiz yazılımı ve düzeni, Şekil 1 'de görülebilir bir örneği, analiz, bir dizi kritere uygun olarak 10 dakika boyunca her bir deneme sineğin performansını değerlendirmek için kullanılır. Aşağıdaki kriterler her anında veri veri analizi için kullanılacak ve sakatlığı nedeniyle, hastalık, stres, ya da motivasyon eksikliği yiyecek arama görevi gerçekleştirmek için mümkün olan bu sinekler ortadan kaldırmak için tasarlanmış olup olmadığını belirlemek için kullanılır.
300'de...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu protokol, biz gıda arama davranışı deneyi için bir adım-adım prosedürü açıklar. Gıda kokuları ile ilgili ek olarak, aynı zamanda, diğer koku nesneleri bulmak için sineğin yeteneğinin incelenmesi için adapte edilebilir. Örneğin, erkek sinekler 3 arkadaşı yerelleştirme davranış çalışmanın doğru uygulanabilir çeşitli ek noktalar biz bu prosedüre ilişkin burada değineceğim bu protokol için vardır.:
İlk olarak, yetiştirme sıcaklık deneysel sinekler test önce yaşlı ne kadar olmalıdır...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarlar herhangi bir mali çıkarı beyan.
Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüsü (R01DK092640) ve Ulusal Bilim Vakfı (0920668) den JWW araştırma hibe tarafından desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Elma Sirkesi Spektrumu | ticari olarak temin edilebilen | ||
| Agaroz, Tip VII | Sigma-Aldrich | A0701 | düşük jelleşme sıcaklığı agaroz |
| Akrilik Test Plakası | özel | Plaka 6 arena içerir. Her arena 60 mm çapında ve 6 mm yüksekliğindedir. Belirli ölçümler için test plakası diyagramlarına bakın. | |
| LabVIEW V.8.5 | Ulusal Araçlar | 776670-09 | programlar için platform: PositioningTool.vi, FlyTracking - Altı Zones.vi NOT: "geçen time.vi", "file.vi kadar geçen süre" ve "iki nesne detect.vi", ana veri toplama programı "FlyTracking--Six zones.vi"un çalışması için mevcut olması gereken alt programlardır. |
| LabVIEW Vizyon 8.5 | |||
| LabVIEW Vizyon Edinme Yazılımı 8.5 | |||
| LabVIEW Vision Builder AI 3.5 | |||
| Igor Pro V.6 | Wavemetric, Inc. | Makro için Platform: Sinek İzleme için Veri Analizi - Altı Bölge | |
| Basler scA1390-17fm | Ulusal Enstrümanlar | 779980-01 | Dijital Fotoğraf Makinesi NOT: kamera sürücüsü Baslerweb.com |
| 8 mm lenste | Ulusal Aletler | 780024-01 | Basler Dijital Fotoğraf Makinesi için |
| Lens Buzlu Cam Difüzör Plakası | Edmund Optics | özel | Işığı dağıtır, 25 cm x 30 cm |
| US Std. No. 100 | Fischer Scientific | 04-881X | Elek, nominal açıklığı 150 & mu; m |
| Aydınlatma Seçeneği 1 | |||
| >LED arka ışık 660 nm (20 cm x 20 cm) | Spectra West | BL47192 | daha basit ama daha pahalı bir aydınlatma seçeneğidir. |
| LED Arka Işık Spektrumları için Güç Kaynağı | West | ||
| Aydınlatma Seçeneği 2 | |||
| 660 nm LED'ler | Süper parlak ledler | RL5R1330 | Dalga Boyu 660 nm (14,7 inç x 9,75 inç panel için yaklaşık 7 x 7 LED dizisi) |
| Doğrusal DC Güç Kaynağı | GW Instek | GPS-1830D | için güç kaynağı |
| LED'ler için 922354-ND | Breadboard | ||
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin iste