RESEARCH
Peer reviewed scientific video journal
Video encyclopedia of advanced research methods
Visualizing science through experiment videos
EDUCATION
Video textbooks for undergraduate courses
Visual demonstrations of key scientific experiments
BUSINESS
Video textbooks for business education
OTHERS
Interactive video based quizzes for formative assessments
Products
RESEARCH
JoVE Journal
Peer reviewed scientific video journal
JoVE Encyclopedia of Experiments
Video encyclopedia of advanced research methods
EDUCATION
JoVE Core
Video textbooks for undergraduates
JoVE Science Education
Visual demonstrations of key scientific experiments
JoVE Lab Manual
Videos of experiments for undergraduate lab courses
BUSINESS
JoVE Business
Video textbooks for business education
Solutions
Language
tr_TR
Menu
Menu
Menu
Menu
Research Article
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Erratum Notice
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Retraction Notice
The article Assisted Selection of Biomarkers by Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe) in Microbiome Data (10.3791/61715) has been retracted by the journal upon the authors' request due to a conflict regarding the data and methodology. View Retraction Notice
Yivli bir mikroakışkan kanaldan geçen iki bitişik sıvı, bir prepolimer çekirdeğinin etrafında bir kılıf oluşturmaya yönlendirilebilir; böylece hem şekil hem de kesit belirlenir. Tiyol tıklama kimyası gibi fotoinitiated polimerizasyon, çekirdek sıvısını önceden belirlenmiş boyut ve şekle sahip bir mikrofiber haline hızlı bir şekilde katılaştırmak için çok uygundur.
Düşük Reynolds sayısındaki mikroakışkan bir kanaldan geçen bir "kılıf" sıvısı başka bir "çekirdek" akışı etrafında yönlendirilebilir ve şekli ve çekirdek akışının çapını dikte etmek için kullanılabilir. Mikroakışkan bir kanalın üst ve alt kısmındaki oluklar kılıf sıvısını yönlendirmek ve çekirdek sıvısını şekillendirmek için tasarlanmıştır. Kılıf ve çekirdek sıvılarının viskozitesi ve hidrofilizitesi eşleştirilerek, interfasiyal etkiler en aza indirilir ve karmaşık sıvı şekilleri oluşturulabilir. Kılım ve çekirdek sıvılarının göreli akış hızlarının kontrol altına uzaklıkları, çekirdek sıvının kesit alanını belirler. Lifler 300 nm ila ~1 mm arasında değişen boyutlarda üretilmiştir ve fiber kesitler çift çapa liflerinde olduğu gibi yuvarlak, düz, kare veya karmaşık olabilir. Çekirdek sıvının şekillendirme bölgesinden aşağı doğru polimerizasyonu lifleri katıleştirir. Fotoinitiated tıklama kimyaları, ultraviyole ışıkla ışınlama ile çekirdek sıvısının hızlı polimerizasyonu için çok uygundur. Sıvı kristaller, poli (methylmethacrylate), tiyol-ene ve tiol-yne reçineleri, polietilen glikol ve hidrojel türevleri dahil olmak üzere çok çeşitli şekillere sahip lifler polimerler listesinden üretilmiştir. Şekillendirme işlemi sırasında minimum kesme ve hafif polimerizasyon koşulları, imalat sürecini hücrelerin ve diğer biyolojik bileşenlerin kapsüllenmesi için de çok uygun hale getirir.
Doku iskeleleri1,kompozit malzemeler2,optik iletişim3ve iletken hibrid malzemeler4 özel polimer lifleri kullanarak araştırma alanlarıdır. Lif üretimi için geleneksel yöntemler arasında eriyik ekstrüzyon, iplik, çizim, döküm ve elektrospinning sayar. Bu yöntemlerle üretilen polimer liflerinin çoğu, imalat sırasında polimer ve hava arasındaki yüzey geriliminden oluşan yuvarlak kesitler sergiler. Bununla birlikte, yönlendirilmemiş kesitlere sahip lifler kompozit malzemelerin mekanik özellikleriniartırabilir 5,6, yüzey alanı-hacim oranlarını artırabilir, ıslatma veya fitilleme7'yikontrol edebilir ve dalga kılavuzları8 veya polarizatörler9olarak kullanılabilir.
Başka bir akışı (çekirdek akışı) çevrelemek ve şekillendirmek için bir akış (kılıf akışı) kullanan mikroakışkan sistemler tarafından özel polimer liflerin üretimi, yüksek oranda tekrarlanabilir liflerin sürekli üretimi için hafif koşullar ve kapasite nedeniyle çekicidir. İlk deneyler, prepolimer ve kılıf sıvılarının bağıl akış hızlarına bağlı boyutlara sahip yuvarlak lifler üretti10-12. Mikroakışkan kanalın üst ve alt kısmındaki olukların, 13,14 çekirdek akışı için önceden belirlenmiş bir şekil üretmek için kılıfı saptırabileceğinin keşfi,10-12,15-17daha karmaşık lif şekilleri üretmek için teknolojiye yol açtı.
NRL araştırmacıları aşağıdaki kritik teknik özellikleri göstermiştir13-21:
Bir prepolimer akışını şekillendirmek için bir kılıfiz akışı ile hidrodinamik odaklama kullanarak polimer lifleri imal ederken, polimer malzemelerin seçimi pratik bir ilk adımdır. Uygun polimerler, karşılık gelen başlatıcı kimyalar ve kılım sıvıları aşağıdaki kılavuzlar içinde tanımlanmalıdır:
Malzemeler seçildikten sonra, istenen lif şeklini ve boyutunu oluşturmak için bir mikrokanel tasarlanmalıdır. Gerekli şekillendirme özelliklerini (şeritler, herringbones, köşeli çift ayraçlar) belirlemek için, akışkan akışkan akış modellerini tahmin etmek için hesaplamalı akışkanlar dinamiği yazılımı kullanılabilir. Şekillendirme özellikleri kılım sıvısını çekirdek sıvısının etrafına taşır. Genel olarak, şeritler kılım sıvısını kanalın üst ve alt kısmı boyunca bir taraftan diğerine taşırken, herringbonlar ve şeritler sıvıyı yanlardan kanalın üst ve/veya altına doğru uzaklaştırır ve daha sonra doğrudan yapının noktasının altındaki kanalın merkezine doğru geri döner. Kanalın üst ve alt kısmındaki tekrarlayan olukların sayısı kılım sıvısının yönlendirilme derecesini etkiler. Çekirdek ve kılım sıvısının akış hızlarının oranı da etkiye aracılık eder. COMSOL Multiphysics yazılımını kullanan simülasyonlar, kesit şeklini tahmin etmek için şekillendirme özelliklerinin ve akış hızı oranlarının etkileşimlerini değerlendirmede güvenilir olduğunu kanıtlamıştır. Bu simülasyonlar ayrıca, önerilen kanalın boyutu, viskozite ve akış hızları ile çekirdek ve kılıf arasındaki solutların yayılması hakkında yararlı bir içgörü sağlar.
Boyd ve ark.'da açıklanan "çift çapa" gibi karmaşık bir şekil isteniyorsa. 23, şekillendirme ve boyutlandırma işlevlerini ayırmak yararlıdır. Karmaşık bir şekil, bir dizi özellik ile oluşturulabilir ve daha sonra ikinci bir kılım akışının girişine yerleştirilen stratejik olarak yerleştirilmiş tek kanallı bir yapı, şeklini önemli ölçüde değiştirmeden polimerize edilebilir akışın kesit alanını azaltmak için kullanılabilir.
Karmaşık mikrokanel tasarımının başka bir örneği çok katmanlı lifler üretebilir. Bu tasarımda, sıralı şekillendirme özellikleri setleri ve ek kaplama sıvıları tanıtılmıştır. Bu eşmerkezli akışlar katı çekirdek kaplama liflerine veya içi boş borulara katılaştırılabilir. Bu cihazın bir örneği aşağıda sunulacaktır.
Mikroakışkan cihazın tasarımı seçildikten sonra, mikrokanel imalat süreci başlayabilir. Kullanılabilecek imalat aletleri arasında yumuşak litografi, CNC frezeleme, sıcak kabartma ve 3D baskı bulunur. Kullanılan aletlerden bağımsız olarak, mikroakışkan kanalın duvarına yanlışlıkla sokulan özelliklerin kılıf akışını da yönlendireceğini ve bu cihaz kullanılarak yapılan tüm liflerin kesit şeklinde yüksek oranda tekrarlanabilir sapmalara neden olabileceğini fark etmek önemlidir. Mikro kanal substrat malzemeleri de fiziksel olarak sağlam, kimyasal olarak hareketsiz ve UV hasarına dayanıklı olacak şekilde dikkatlice seçilmelidir. Örneğin, polidimetilsiloksan (PDMS) kolayca dökilebilir, conta benzeri contalar sağlar ve UV şeffaftır; PDMS, kanalın şeffaf üst kısmı için yararlıdır, ancak daha sertliğe ihtiyaç duyan kanalın kenarları ve alt kısmı için kullanışlı değildir.
Sonuç olarak, sıvı dinamiği simülasyonları tarafından tahmin edilen akış hızlarında uygun şekilde seçilmiş çekirdek ve kılıma sıvılarını tanıtarak, şekillendirme özellikleri uygun akışkan profilini oluşturacak ve aşağı akış UV kürleme lambası tasarlanan polimer liflerini katılaştıracaktır. Polimerize elyafların kanaldan sürekli ekstrüzyonu, sadece sıvı rezervuarlarının hacmi ile sınırlı uzunluklarda tekrarlanabilir lifler sağlayabilir.
Bu protokol, fotoinitiated thiol-yne tıklama kimyası kullanılarak içi boş bir lifin imalatını açıklar. Mikrokanet, kanalın altındaki ve üstündeki şekillendirme özellikleri olarak köşeli çift ayraç oluklarına veya "çizgilere" sahiptir (Şekil 1). Üç sıvı tanıtılır ve eşmerkezli akışlara yönlendirilir; içten dış sıvı akışlarına kadar, bunlar çekirdek, kaplama ve kılım sıvısı olarak adlandırılır. Sadece kaplama akışı içi boş lifi oluşturmak için polimerize edilir. Seçilen malzemeler şunlardır:
Mikrokanel cihazı, CNC frezeleme ve PDMS dökümü ile üretilen alüminyum ve plastik parçalardan monte edilmiştir. Mikro kanaldaki akış üç şırınga pompası tarafından kontrol edildi.
1. Mikrokanel Tasarımı ve Simülasyon
Mikrokanal içinde hem akışkan hızını hem de konveksiyon/difüzyonu hesaplarken, gelen her sıvıya uygun viskozitenin atanması kritik öneme sahiptir.
Hesaplama sonuçlarından, istenen fiber şekline elde etmek için gerekli sayıda ve şekillendirme özelliklerinin türü tahmin edilebilir. Akışkan akış hızı girişleri, liflerin üretilmesi için gerekli akış hızlarıyla da ilişkili olacaktır. Bu tahminlerle polimer liflerin ekstrüzyonu için bir mikrokanal cihaz imal edilebilir.
2. Kılıt Akış Aparatı Bileşenlerinin İmalatı
Kılıf akış cihazının bileşenlerini oluşturmak için doğrudan mikromilling, sıcak kabartma ve/veya polimer dökümünün bir kombinasyonu kullanılabilir. Kaynaklara bağlı olarak, stratejiyi buna göre seçin. Sunulan örnek, Bilgisayar Sayısal Kodu (CNC) kullanan doğrudan bir frezeleme işlemidir. Şekil 2: 1'de gösterilen beş katman vardır (yukarıdan aşağıya). Giriş aynası (alüminyum), 2. Sabitleme plakası (alüminyum), 3. Mikrokanal üst tabaka (döngüsel olefin koalimör, COC veya PDMS), 4. Mikrokanal alt tabaka (COC veya polieter eter ketonu, PEEK), 5. Sabitleme plakası (alüminyum). (Doğrudan frezeleme için örnek dosyalar Destek Bilgileri'nde *.stl biçiminde mevcuttur)
3. Kılıt Akış Aparatı Montajı
4. Çözüm Hazırlama
Daha önce de belirtildiği gibi, benzer protokoller ve kılıf akış sistemleri kullanılarak mikrofiber oluşturmak için birçok malzeme kullanılabilir, ancak burada tiyol-yne kimyası kullanılır. Depolamada zamanla oluşabilecek viskozite artışını önlemek için fiber ekstrüzyon işlemine başlamadan hemen önce prepolimer çözeltisini hazırlayın.
5. Mikrofiber Üretimi (Video Odağı)
İçi boş lifler oluşturmak için şekillendirme olukları ve üç çözelti girişi kullanılarak basit bir 2 aşamalı tasarım kullanılmıştır (Şekil 1). COMSOL simülasyonları, istenen kesit boyutunu elde etmek için uygun akış hızı oranlarını belirlemek için kullanılmıştır (Şekil 1, ESI Video). Frezeleme ve kalıplama kombinasyonu, lifleri imal etmek için kılı kılıba akış tertibatı için bileşenler üretti (Şekil 2). Komple montaj kılıfta akış cihazı, fiber optik bağlantılı UV lazer, üç şırıng pompası, bir toplama banyosu (beher) ve bir fiber toplama makarası(Şekil 3)içeriyordu.
Kaplama malzemesinin polimerizasyonu UV ışık kaynağı tarafından başlatıldı ve içi boş lifler mikrokanaldan toplama banyosuna ekstrüde edildi. Lif oluştu ve UV ışığı kapatılana kadar sürekli toplandı. Lif üretimi dakikalarca devam etti ve bir metre uzunluğunda tek bir lif üretti. Bu koşullar altında yapılan liflerin çapı yaklaşık 200 μm'dir. Fiberlerin yapısı optik ve elektron mikroskopisi kullanılarak görselleştirildi. Lifler içi boş bir çekirdeğe sahip oval bir şekle sahipti. Kılcal etki, lifin iç kısmına sıvı ve kabarcıklar sokmak için kullanıldı ve içi boş yapının lifin uzunluğu üzerinde sürekli olduğunu doğruladı (Şekil 4A).

Şekil 1. Kılıfet akış cihazı tasarımı ve COMSOL verileri. Düz oluklu iki bölümlü imalat cihazı, içi boş bir lif üretmek için seçildi (x ekseni 45 ° etrafında döndürüldü). Soldaki COMSOL simülasyonları, çekirdek:kaplama:kılıma akış hızı oranlarının (her simülasyonun altındaki sayılar) içi boş liflerin son boyutunu nasıl etkilediğini gösterir. Mikrokanel kesiti 1 mm x 0,75 mm'dir ve şeritler 0,38 mm genişliğinde ve 250 μm derinliğindedir. Şeritler kanala göre ∠45° seviyesindedir.

Şekil 2. Kılıfi akış tertibatının patlatılmış görünümü. Yukarıdan aşağıya, (A) giriş mandreni, (B) sabitleme plakası, (C) mikrokanel kapağı, (D) mikrokanel tabanı, (E) sabitleme plakası. Bileşenler sırasıyla alüminyum, alüminyum, COC (veya PDMS), COC (veya PEEK) ve alüminyumdan üretilmiştir. Düzenli aralıklı delikler montaj vidalarını barındırır.

Şekil 3. Düzen fotoğrafı ve şematik genel bakış. Kurulum, su banyosu içeren beher üzerine dikey olarak sabitlenmiş kılım akış tertibatı, fotopolimerizasyon için fiber optik lazer, üç şırıngam pompası ve polimer lifleri toplamak için mil içerir. Inset, UV aydınlatmalı imalat tertibatlarını gösterir. (A) Kılıf ve çekirdek girişleri, (B) mikroakışkan kanal, (C) UV ışığı, (D) toplama rezervuarı, (E) polimerize lif toplanmaktadır.

Şekil 4. Hidrodinamik odaklama kullanılarak yapılan liflerin optik ve taramalı elektron mikrografi görüntüleri. Lifler hidrodinamik odaklama kullanılarak aşağıdaki şekillerde imal edilmiştir: (A) İçi boş tüpler, (B) Dikdörtgen şeritler, (C) İnce elastik kurdeleler, (D) Üçgenler, (E) Barbunyalar, (F) İnci dizisi, (G) Gömülü karbon nanofiberli yuvarlak lif ve (H) Çift bağlantılı şekilli. Lifler akrilatlar, metakrilatlar ve tiyol-enes dahil olmak üzere çeşitli malzemelerden yapılmıştır.
ESI Video. COMSOL Multiphysics'te üretilen dilim çizimi, mikrokanallerin bir yarısını çekirdek, kaplama ve kılıf sıvılarının cihaza girdiğini ve iki aşamalı akış değiştiren çapraz şeritli oluklardan geçiş yaptığını tasvir eder. Simüle edilen çekirdek, kaplama ve kılım akış hızları sırasıyla 1, 28 ve 256 μl/dk'dır. Video gerçek zamanlı olarak ~6 sn'yi temsil eder, açıklayıcı amaçlar için 6 kat yavaşladı.
Referanslarda listelenen patentler Deniz Kuvvetleri Bakanlığı'ndan(http://www.nrl.navy.mil/doing-business/tech-transfer/)lisans alınabilir.
Yivli bir mikroakışkan kanaldan geçen iki bitişik sıvı, bir prepolimer çekirdeğinin etrafında bir kılıf oluşturmaya yönlendirilebilir; böylece hem şekil hem de kesit belirlenir. Tiyol tıklama kimyası gibi fotoinitiated polimerizasyon, çekirdek sıvısını önceden belirlenmiş boyut ve şekle sahip bir mikrofiber haline hızlı bir şekilde katılaştırmak için çok uygundur.
Darryl A. Boyd ve Michael A. Daniele, Ulusal Araştırma Konseyi Doktora Sonrası Bursiyerleridir. Çalışma ONR/NRL Çalışma Birimleri 4286 ve 9899 tarafından desteklendi. Görüşler yazarların görüşleridir ve ABD Donanması veya Savunma Bakanlığı'nın görüşünü veya politikasını temsil etmez.
| Pentaeritritol tetrakis 3-merkaptopropionat | Sigma-Aldrich | 381462 | Referanslara bakın |
| 1.7-Oktadiyne | Sigma-Aldrich | 161292 | Referanslara bakın |
| 2,2-Dimetoksi-2-fenilasetofenon | Sigma-Aldrich | 196118 | Referanslara bakın |
| Polietilen glikol 400 | Sigma-Aldrich | 202398 | Polietilen glikol 200 veya 600, dekstroz veya gliserol ikame edilebilir |
| Sylgard 184 | Sigma-Aldrich | 761036 | QSIL 216, OptiTec 7020 veya GS RTV 615 ikame edilebilir |
| MiniMill | Haas | MINIMILL | 2.5 eksenli (veya daha yüksek) değirmeni yorumlayan herhangi bir NC kodu ikame edilebilir |
| Şırınga pompaları (3) | Harvard Aparatı | 702212 | İstenilen hacimsel akış hızlarını sağlamak üzere programlanabilen şırınga pompaları değiştirilebilir |
| Tygon boru (3 m) | Fisher Scientific | 14-169-13A | NA |
| PEEK boru | Upchurch Scientific | 1435 | NA |
| HPLC bağlantı parçaları | Upchurch Scientific | 1457 | NA |
| BlueWave 200 Stand ve ışık kılavuzlu UV lambası | Dymax | 38905; 38477; 39700 | 300-450 nm, >200 mW/cm2 sağlayan herhangi bir kılavuzlu UV kaynağı |
| 500 ml beher | ile ikame edilebilirFisher Scientific | FB-100-600 | Yaklaşıkolarak aynı boyut ve şekle sahip herhangi bir kap ikame edilebilir |
| Halka standı | Fisher Scientific | S47807 | Şırınga pompalarının seviyesinin üzerine kelepçeli bir kılıf akış aparatı monte edebilen herhangi bir halka standı ikame edilebilir |
| Halka standı kelepçe tutucusu (2) | Fisher Scientific | S02625 | Kelepçeleri tutabilen herhangi bir halka sehpa kelepçesi tutucusu değiştirilebilir |
| Halka standı kelepçeleri (2) | Fisher Scientific | 02-216-352 | Kelepçeli kılıf akış aparatını ve ışık kılavuzlarını tutabilen herhangi bir halka sehpa kelepçesi |
| 1, 5 ve 60 ml ile değiştirilebilir Şırıngalar | Fisher Scientific | 14-823-16H; 14-823-16D; 14-820-11 | Bilinen iç çapa ve yeterli hacme sahip herhangi bir şırınga ikame edilebilir |
| Poli (metilmetakrilat) (3,2 mm) | McMaster-Carr | 8560K239 | Polikarbonat ve siklik olefin kopolimeri ikame edilebilir |
| Polieter eter keton (3,2 mm) | McMaster-Carr | 8504K25 | Solvente dayanıklı işlenebilir malzemeler ikame edilebilir |
| Alüminyum (3.2, 9.5 mm) | McMaster-Carr | 1651T41; 9246K23 | Gerektiği gibi diğer malzemeleri değiştirin |