Yöntem makalesi

Yaban Hayatından Helmint Toplama ve Tanımlama

16.4K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/51000

⸱

14 Aralık 2013

 , 
1Department of Forestry and Natural Resources, Purdue University, 2Helm West Laboratory

Bu makalede

Özet

Yabani hayvanlar genellikle çok çeşitli helmintler tarafından parazitlenir. Dört ana helmint türü "yuvarlak kurtlar" (nematodlar), "dikenli başlı solucanlar" (akantosefalanlar), "parazitler" (trematodlar) ve "tenyalar" (sestodlar). Burada helmintlerin omurgalı bir hayvandan nasıl toplandığını ve nasıl korunduğunu ve taksonomik olarak nasıl tanımlandığını açıklıyoruz.

Özet

Vahşi hayvanlar genellikle çok çeşitli helmintler tarafından parazitlenir. Dört ana helmint türü "yuvarlak kurtlar" (nematodlar), "dikenli başlı solucanlar" (acanthocephalans), "parazitler" (trematodlar) ve "tenyalar" (sestodlar). Helmintleri toplamak için en uygun yöntem, çoğu helmint hala hayatta olacağından, 4-6 saatten daha kısa bir süre önce ölmüş bir konakçıyı incelemektir. Kapsamlı bir otopsi yapılmalı ve tüm ana organlar incelenmelidir. Organlar akan su altında 106 μm'lik bir elek üzerinde yıkanır ve içerik stereo mikroskop altında incelenir. Tüm helmintler sayılır ve temsili bir sayı sabitlenir (% 70 etanol,% 10 tamponlu formalin veya alkol-formalin-asetik asit). Türlerin tanımlanması için, helmintler ya laktofenol (nematodlar ve küçük akantosefalanlar) içinde temizlenir ya da Harris'in hematoksilini veya Semichon'un karmini kullanılarak boyanır (trematodlar, sestodlar ve büyük akantosefalanlar). Helmintler, farklı yapıları inceleyerek türlere bağlanır (örneğin, nematodlardaki erkek spiküller veya sestodlardaki rostellum). Burada özetlenen protokoller herhangi bir omurgalı hayvana uygulanabilir. Farklı organları tanıma ve helmintleri diğer doku kalıntılarından veya bağırsak içeriklerinden ayırt edebilme konusunda biraz uzmanlık gerektirirler. Toplama, koruma ve boyama, minimum ekipman ve reaktif gerektiren basit tekniklerdir. Taksonomik tanımlama, özellikle türler için çok zaman alıcı olabilir ve örneklerin bir uzmana veya DNA analizine sunulmasını gerektirebilir.

Giriş

Omurgalılar, dört ana helmint (solucan) grubu tarafından parazitlenir. Gruplardan ikisi, trematodlar veya parazitler ve sestodlar veya tenyalar, Phylum Platyhelminthes'e girer. Diğer iki grup nematodlar veya yuvarlak kurtlar (Nematoda) ve akantosefalanlar veya dikenli kurtlardır (Acanthocephala). Bu parazitlerin birçoğu yabani kuşlarda ve memelilerde morbidite ve mortalite nedenleri olarak belgelenmiştir1,2.

Çoğu helmint, birden fazla ana bilgisayarı içeren karmaşık yaşam döngülerine sahiptir1,2 . Örneğin, trematodların bir veya iki ara konakçısı (genellikle omurgasızlar) ve son bir konağı vardır. Döngünün tamamlanması ve dolayısıyla yetişkin helmintlerin son konakçılarda (bu makalenin konusu olan) bulunması için tüm konakçıların mevcut olması gerekir. Bu nedenle, bazı helmint türlerinin yaygınlığında ve yoğunluğunda mevsimsel dalgalanmaların meydana gelebileceğini ve belirli bir konakçının aunasının tam helmintini yakalamak için uzun vadeli izlemenin arzu edildiğini akılda tutmak önemlidir.

Helmintleri toplamak için en uygun yöntem, ötenazi yapılmış bir konağı incelemektir. Bu, helmintlerin hala canlıyken toplanmasına ve uygun şekilde gevşemesine ve sabitlenmesine izin verir. 24 saatten daha uzun süre önce ölmüş veya incelenmek üzere donmuş ve çözülmüş konakçılardan elde edilen materyaller genellikle daha düşüktür ve tanımlanması zordur. Donmuş veya formalize edilmiş konakçılardan gelen trematodlar ve sestodlar genellikle kötü bir şekilde kasılır ve trematodlardaki oral dikenler veya tenyaların skoleksindeki kancalar gibi tanımlama için çok önemli yapıları kaybetmiştir. Bununla birlikte, gerçek şu ki, bugünlerde omurgalı konakçılarından elde edilen çoğu materyal donmuş veya korunmuştur.

helmintler için DNA dizi bilgilerini içeren veri tabanları hızla büyüyor ve bu nedenle birçok tür için taksonomik tanımlama zaten mümkün. Bu nedenle, potansiyel DNA analizleri için helmintler mümkün olduğunca korunmalıdır. Bununla birlikte, örnekler formalin içinde sabitlenirse, iyi kalitede DNA mümkün değildir. Helmintleri toplamak ve öldürmek için burada özetlenen yöntemler, DNA ekstraksiyonu ve genetik analizler için uygun materyal verecektir.

Aşağıda, helmintlerin toplanması için omurgalıların (amfibiler, sürüngenler, kuşlar ve memeliler; balıklardan elde edilen monojen trematodlar dahil değildir) nasıl nekropsi yapılacağına dair ayrıntılı yöntemleri ve ardından taksonomik tanımlama için bunların nasıl korunacağı ve işleneceğine ilişkin prosedürleri açıklıyoruz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Aşağıdaki deneylerde kullanılan hayvanlar, yolda öldürülürken ölü bulundu.

1. Hayvan Nekropsisi ve Helminth Koleksiyonu için Ana Organların Taraması

  1. Hayvanı düz bir yüzeye yerleştirin ve kulaklar, ağız boşluğu ve gözler dahil olmak üzere tüm dış açıklıkları nematodların (yuvarlak) ve trematodların (düz ve segmentsiz) varlığı açısından bir büyüteçle inceleyin (bkz. Şekil 1).
  2. Kuşlarla çalışıyorsanız, diseksiyondan önce tüyleri nemlendirmek için musluk suyuyla yıkayın.
  3. Keskin bir bıçak veya bıçak kullanarak ve bir çift diseksiyon forseps yardımıyla, herhangi bir organı yırtmamaya dikkat ederek karın boşluğu üzerinde bir kesi yapın. Sert bir kabuğa sahip kaplumbağalar için, göğüs ve karın izleri arasındaki köprü alanındaki kemiği kesmek için el tipi bir testere kullanın.
  4. Göğüs boşluğunu yukarıdaki gibi açın; büyük hayvanlar için, kaburgaları kesmek için kemik kesiciler veya küçük bir el testeresi gerekebilir.
  5. Kuşlarla çalışıyorsanız, herhangi bir organı çıkarmadan önce hava keseciklerini yerinde inceleyin. Gerekirse bir büyüteç kullanın.
  6. Her iki boşluğu da filarial yuvarlak kurtlar ve büyük trematodlar için inceleyin.
  7. Gastrointestinal sistemi karın boşluğundan çıkarmadan önce, yemek borusunun başlangıcına yakın bir ip ve kalın bağırsağın (rektum) ucuna bir tane daha bağlayın.
  8. Aşağıdaki torasik organları stereo mikroskop (10-30X) altında incelenmek üzere Petri kaplarına (veya organlar çok büyükse cam tepsilere) ayırın: kalp ve ana kan damarları, trakea ve akciğerler.
  9. Karaciğeri, safra kesesini ve kanalını, pankreas, dalak, böbrekleri ve idrar kesesini çıkarın ve adım 1.8'de anlatıldığı gibi inceleyin.
  10. Tüm sindirim sistemini çıkarın ve her bölümü cam tabaklara/tepsilere yerleştirin.
  11. Organlar çıkarıldıktan sonra, vücut boşluğunu %0.9 tuzlu su ile doldurulmuş bir hortum veya fışkırtma şişesi ile 106 μm'lik bir elek içine yıkayın ve elek içeriğini stereo mikroskop altında filariyal solucanlar veya kan trematodlarının varlığı açısından inceleyin.
  12. Her sindirim sistemi bölümünü makasla açın, mukozayı kazıyın ve büyük parazitlerin (>1 cm) varlığını dikkatlice inceleyin. Gerekirse bir büyüteç kullanın. Akantosefalaların hortumu genellikle bağırsak duvarına derinden gömülür ve forseps ve/veya küçük bir makasla dokudan dikkatlice çıkarılması gerekebilir.
  13. Açılan her bölümü akan suyun altına yerleştirin ve tüm içeriği adım 1.11'de açıklandığı gibi 106 μm'lik bir elek içine yıkayın.
  14. Kalbi ve ana kan damarlarını (pulmoner ve aort), trakeayı, idrar ve safra keselerini açın ve içeriği aynı şekilde inceleyin.
  15. Akciğerler, karaciğer, böbrekler, dalak ve pankreas gibi katı organları keskin bir bıçak ve forseps kullanarak dilimleyin ve ayırın. Bunları akan su altında, adım 1.11'de açıklandığı gibi 106 μm'lik bir elek içine yıkayın.
  16. Bulunan parazit türlerini, her türün sayısını ve bulundukları organları kaydedin. Fiksasyon ve boyama yöntemleri aşağıda listelenmiştir.
  17. Kurşun kalemle yazılmış düz bir indeks kartının küçük bir parçasını yerleştirerek şişeleri / kavanozları etiketleyin (mürekkep ve çizgili indeks kartları alkol ve leke örneklerinde "çalışacaktır").

2. Helmintlerin Korunması

  1. Daha sonraki genetik çalışmalar için korunması gereken helmintler için, bunları doğrudan% 80-90 etanol (gliserinsiz) içine yerleştirin. Etanol, tercihen reaktif derecesi olmak üzere% 95 etanolün seyreltilmesiyle yapılmalıdır (Tablo 1). Bu örneklerin formaline maruz kalmasına asla izin vermeyin, çünkü formalin DNA'yı kullanılamaz bir duruma düşürür.
  2. Canlı trematodları bir damla tuzlu su içinde bir cam mikroskop lamı üzerine yerleştirin, bir cam örtü fişi yerleştirin ve salini kaynatmadan lamı bir alevin üzerinden geçirin.
    1. Slaytı AFA (alkol-formalin-asetik asit, bkz. Tablo 1) içeren bir Petri kabına bırakın ve kapağın kaymasına izin verin.
    2. AFA'da bir ila birkaç gün sabitleyin, musluk suyuyla durulayın ve uzun süreli saklama için% 70 etanol ile doldurulmuş 5 ml'lik cam şişelere (veya parazitlerin boyutuna ve miktarına bağlı olarak daha büyük cam şişeye / kavanoza) aktarın.
  3. Ölü trematodları 48 saat boyunca AFA veya% 10 tamponlu formalin içinde sabitleyin ve daha sonra uzun süreli depolama için% 70 etanol ile doldurulmuş şişeye / kavanoza aktarın.
  4. Üzerlerine kaynamaya yakın su dökerek bir Petri kabındaki canlı sestodları gevşetin ve ardından uzun süreli saklama için %70 etanol ile doldurulmuş şişeye/kavanoza aktarın.
  5. Hortum tamamen boşalana kadar buzdolabında (~ 4 ° C) musluk suyunda bir ila birkaç saat boyunca bir Petri kabına koyarak canlı acanthocephalans'ı rahatlatın (bu 24 saate kadar sürebilir). Uzun süreli saklama için %70 etanol veya AFA ile doldurulmuş şişeye/kavanoza aktarın.
  6. Ölü sestodları ve akantosefalaları ölü trematodlarla aynı şekilde tedavi edin (yukarıya bakın).
  7. Canlı küçük (<5 mm veya kırılgan nematodlar (örn. trichostrongylids, capillarids) sıcak (kaynamaya yakın)% 70 etanolde öldürün ve solucanları korumak için% 5 gliserin ile% 70 etanol ile doldurulmuş şişe/kavanozda saklayın (Tablo 1) buharlaşma durumunda solucanları korumak için.
  8. Orta ila büyük (>5 mm) nematodları (örn. askaridler, spiruridler, oksiüridler, filaridler) soğuk buzlu asetik asit içeren bir Petri kabına koyarak ve 15 dakika sonra %70 etanol ve %5 gliserin ile doldurulmuş şişe/kavanoza aktararak öldürün (ve temizleyin). Asetik asit bu şekilde tekrar tekrar kullanılabilir.
  9. Ölü nematodları doğrudan %70 etanol ve %5 gliserin ile doldurulmuş şişe/kavanoza yerleştirin.

3. Helmintlerin Taksonomik Tanımlanması

  1. Hematoksilini alkolde çözerek ve amonyum alüminyum sülfatı suda ısı ile çözerek Harris'in hematoksilinini hazırlayın. Her iki çözeltiyi de karıştırın ve kaynatın.
    1. Sodyum iyodat ekleyin ve 2-3 dakika kaynatın. Filtre (541 filtre kağıdı) solüsyonunu oda sıcaklığına döndükten sonra.
  2. trematodları, sestodları ve akantosefalaları gece boyunca seyreltilmiş (1:10) Harris'in hematoksilen veya Semichon'un karmininde bırakarak aşırı boyayın (bkz. Tablo 1).
    1. Organlar görünene kadar %70 asit etanol kullanarak lekeyi çıkarın (birkaç saniye ile bir saatten fazla sürebilir ve yakından izlenmelidir).
    2. Numuneleri en az 30 dakika boyunca %70 bazik etanole aktararak leke gidermeyi durdurun. Daha sonra, bunları bir dizi dereceli etanolde (%80, %95, %100) kurutun ve ksilen veya metil salisilat içinde temizleyin.
    3. Bir damla Kanada balsamı ve bir kapak fişi ekledikten sonra numuneleri bir mikroskop lamına monte edin. Gece boyunca kurumaya bırakın.
  3. Küçük ila orta nematodları ve akantosefanları, bir kapak kaymalı bir mikroskop lamı üzerinde geçici laktofenol yuvalarında 15-30 dakika boyunca temizleyin.
    1. Büyük nematodlar (askaridler ve spiruridler) ve akantosefalalılar için 60 dakikaya kadar% 80 fenol kullanın. Daha küçük yapıların (erkek spiküller ve kancalar) değerlendirilmesi için ışık mikroskobu (40-400X) altında inceleyin.
  4. Özel yapıların incelenmesi için aşağıdaki yaklaşımları kullanın.
    1. Cestodlar için, skoleks'i kesin ve laktofenol içinde bir mikroskop lamı üzerine yerleştirin ve rostellal kancalarını ölçmek ve saymak için bir kapak fişi ile "kabak" yapın (bkz. Şekil 1B).
    2. Nematodlar için, ön ucu kesin ve yüzü birkaç damla laktofenol (lamel olmadan) veya kalıcı bir montaj için gliserin jölesi içinde (kapak kaymalı) bir mikroskop lamı üzerine monte edin ve ağız parçalarını ışık mikroskobu altında gözlemleyin (35-400X) (bkz. Şekil 1D).
    3. Büyük nematodların kuyruklarını kesin ve bir ışık mikroskobu altında erkeklerin ventral papilla ve spikül morfolojisini gözlemlemek için bir kapak kayması ile laktofenol içinde bir mikroskop lamına monte edin (bkz. Şekil 1D).
  5. Birincil literatür ve aşağıdakiler gibi standart taksonomik referansların bir kombinasyonunu kullanarak parazitleri türlere tanımlayın:
    1. Trematodlar: Yamaguti (1958, 1971)3,4 ve Gibson ve diğerleri. 5-7
      2. arası
    2. Acanthocephalans: Yamaguti8
    3. Cestodlar: Yamaguti9, Schmidt10 ve Khalil et al. 11
    4. Nematodlar: Yamaguti12 ve Anderson ve ark. 13

4. ABD Ulusal Parazit Koleksiyonundaki Helmintlerin Deposu

  1. Temsili helmint örneklerini ABD Ulusal Parazit Koleksiyonu'nda (USNPC) saklayın. Bu, çoğu parazit dergisi için zorunludur. Gönderildikten sonra, her helmint türüne el yazmalarına dahil edilmek üzere bir katılım numarası atanır.
  2. Örnekleri gönderirken aşağıdaki bilgileri ekleyin: 1) Parazitin bilimsel adı; 2) ev sahibi bilgileri (coğrafi konumun tür, boylam/enlem koordinatları); 3) konakta bulunan organ; 4) Örnekleri kimin topladığı ve toplanma tarihi; 5) kullanılan fiksatif, leke veya temizleme/montaj ortamının türü; 6) başka bir yerde ek örnekler sunulmuşsa, diğer koleksiyonların yeri (müze ve katılım numaraları); ve 7) yayın ve dergi ile ilgili bilgiler. Bu veriler ayrıca numunelerle birlikte ve ayrı bir kapak altında gönderilmelidir.
  3. Numuneleri darbeye dayanıklı emici malzeme ile güçlü kaplarda paketleyin. Bant/Parafilm vidalı kapakları cam şişelere yerleştirin ve her şişeyi ayrı bir plastik torbaya koyun. Slaytları kağıda sarın ve aralarında şok emici malzeme bulunan bir slayt kutusuna yerleştirin.
  4. Numuneleri ve numuneler hakkında bilgi içeren ayrı bir mektubu şu adrese gönderin: ABD Ulusal Parazit Koleksiyonu, USDA, ARS, ANRI, Bldg. 1180, BARC-East, 10300 Baltimore Avenue, Beltsville, MD 20705-2350.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Yukarıda özetlenen yöntemler kullanılarak, 2007-2011 yılları arasında Montana, Missoula County'de maskeli fare Sorex cinereus'un helmintleri üzerine bir araştırma yürütülmüştür. Pitfall tuzaklarından toplam 56 fare toplanmış ve ölümden sonraki 2 saat içinde incelenmiştir. Genel enfeksiyon prevalansı %96 olarak bulunmuş; sadece 2 farede parazite rastlanmamıştır. Cestodların 9 türü ve nematodların 6 türü olmak üzere toplam on beş helmint türü tanımlanmıştır. Staphylocystoides cinsine ait bir cestod türü d...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Helmint parazitlerini, hatta cins olarak, zayıf materyale dayanarak tanımlamak son derece zordur. Özellikle sestodlar ve trematodlar, konağın ölümünden sonra oldukça hızlı bir şekilde ölme ve bozulma eğilimindedir. Sestodların taksonomisi büyük ölçüde, genellikle donmuş malzemede kaybolan yıldız kancalarının sayısına, boyutuna ve şekline bağlıdır. Aynısı, ekinostomlar ve heterofitidler gibi oral emici çevresinde dikenler bulunan ve sıklıkla kaybolan bazı trematodlar için de geçerlidir. Kalın kütikülleri nedeniyle nematod...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Açıklayacak hiçbir şeyimiz yok

Teşekkürler

Yazarlar, Purdue Üniversitesi'ndeki Indiana USDA APHIS Yaban Hayatı Hizmetleri Programı Hastalık Biyoloğu Dr. Joe N. Caudell'e, bu videonun üretimi için helmintlerin toplanmasında kullanılan örnekleri sağladığı için teşekkür eder. Jennifer Serafin tüm kimyasal çözeltileri hazırladı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Sabitleme< / güçlü >
Alkol-Formalin-Asetik Asit (AFA)Fisher ScientificA407-1 (etanol) < br / > F75F-1GAL (formaldehit) < br / > BP2401500 (buzlu asetik asit)Etanol% 85 (85 ml) + formaldehit% 37 (10 ml) + buzlu asetik asit (5 ml)
Öldürme ve uzun süreli koruma için etanolFisher ScientificA407-1Etanol %100 (70 ml) + damıtılmış su (30 ml)
Sabitleme ve DNA çalışmaları için etanolFisher ScientificAC61511-0010Etanol sırasıyla %80-90 (80-90 ml) + damıtılmış su (20-10 ml)
Formalin TamponluFisher ScientificSF100-4Formalin %10 (10 ml) + damıtılmış su (90 ml)
Gliserin-alkolFisher ScientificA407-1 (etanol)
AC15365-1000
(gliserin)		Etanol %70 (95 ml) + gliserin (5 ml)
Temizleme, boyama ve montaj
Boyama sırasında dehidrasyon için etanolFisher ScientificA407-1Etanol %80, %95, %100 (80 ml, 95 ml, 100 ml) + damıtılmış su (20 ml, 5 ml, 0 ml)
LaktofenolFisher ScientificR400-27-Fenol
Fisher ScientificA931I-1 (fenol)
A407-1 (etanol)		Fenol %100 (80 ml) + etanol %100 (20 ml)
Harris' HematoksilenFisher ScientificS25347 (hematoksilen)
A407-1 (etanol)
A567-500 (amonyum alüminyum sülfat) S25553 (sodyum iyodat)		Hematoksilen (5 g) + etanol %100 (50 ml) + amonyum alüminyum sülfat (100 g) + sodyum iyodat (0.37 g) + damıtılmış su (1.000 ml)   
Semichon' asetik karminFisher ScientificBP2401500 (buzlu asetik asit)
S25236 (karmin)
A407-1 (etanol)		Buzlu asetik asit (100 ml) + karmin (1.5 g) + damıtılmış su (100 ml). Kaynar su banyosunda 15 dakika ısıtın ve soğutun. Stok çözeltisi yapmak için filtreleyin. Boyama için 1:2 oranında %70 alkol ile karıştırın.
XyleneFisher ScientificX4-4Yalnızca kimyasal çeker ocak altında kullanın.
Metil salisilatFisher ScientificS25437-Etanol
bazikFisher ScientificA407-1 (etanol)
S25159A (konsantre amonyum hidroksit)		Etanol %70 (100 ml) + amonyum hidroksit (0,1 ml)
Etanol asidiFisher ScientificA407-1 (etanol)
SA9233-100 (hidroklorik asit)		Etanol %70 (99,5 ml) +  hidroklorik asit (0,5 ml)
Kanada balsamıFisher ScientificB10-100-

Kaynaklar

  1. Atkinson, C. T., Thomas, N. J. Parasitic Diseases of Wild Birds. Hunter, D. B. , John Wiley & Sons, Blackwell Press. Hoboken, New Jersey, USA. (2009).
  2. Parasitic Diseases of Wild Mammals. Samuel, W. M., Pybus, M. J., Kocan, A. A. , Second Edition, Iowa State University Press. Ames, Iowa, USA. (2001).
  3. Yamaguti, S. Parts 1 and 2. The Digenetic Trematodes of Vertebrates. Systema Helminthum. I, Interscience Publishers Inc. New York, New York, USA. (1958).
  4. Yamaguti, S. Synopsis of Digenetic Trematodes of Vertebrates. I and II, Keigaku Publishing Company. Tokyo, Japan. (1971).
  5. Gibson, D. I., Jones, A., Bray, R. A. Keys to the Trematoda. 1, CAB International Publishing and The Natural History Museum. Wallingford, Oxfordshire, UK. (2002).
  6. Jones, A., Bray, R. A., Gibson, D. I. Keys to the Trematoda. 2, CAB International Publishing and The Natural History Museum. Wallingford, Oxfordshire, UK. (2005).
  7. Bray, R. A., Gibson, D. I., Jones, A. Keys to the Trematoda. 3, CAB International Publishing and The Natural History Museum. Wallingford, Oxfordshire, UK. (2008).
  8. Yamaguti, S. Acanthocephala of Vertebrates. Systema Helminthum. V, Interscience Publishers Inc. New York, New York, USA. (1963).
  9. Yamaguti, S. The Cestodes of Vertebrates. Systema Helminthum. II, Interscience Publishers Inc. New York, New York, USA. (1959).
  10. D, G. Keys to the Cestode Parasites of Vertebrates. CRC Handbook of Tapeworm Identification. , CRC Press Inc. Boca Raton, Florida, USA. (1986).
  11. Khalil, L. F., Jones, A., Bray, R. A. Keys to the Cestode Parasites of Vertebrates. , CAB International Publishing and The Natural History Museum. Wallingford, Oxfordshire, UK. (1994).
  12. Yamaguti, S. The Nematodes of Vertebrates. Parts 1 and 2. Systema Helminthum. III, Interscience Publishers Inc. New York, New York, USA. (1961).
  13. Anderson, R. C., Chabaud, A. G., Willmott, S. Keys to the Nematode Parasites of Vertebrates: Archival Volume (Nos). 1-10. , CAB International Publishing and The Natural History Museum. Wallingford, Oxfordshire, UK. (2009).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Yaban Hayat ParazitolojisiNekropsi Prosed rOrgan ncelemesiElek FiltrasyonuStereo MikroskopiParazit KorumaT r Tan mlamaeffafla t rma TeknikleriBoyama Y ntemleri

İlgili makaleler