Method Article

Taze Cerrahi Örneklerden İzolasyon ve İnsan Ventriküler kardiyomiyositlerin Fonksiyonel Karakterizasyonu

DOI:

10.3791/51116

⸱

April 21st, 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department NeuroFarBa, Division of Pharmacology, University of Florence, 2Department of Clinical and Experimental Medicine, Division of Physiology, University of Florence

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kalp hastalıklarının hücre temelinde Mevcut bilgi çok hayvan modelleri üzerinde yapılan çalışmalara dayanmaktadır. Burada açıklamak ve insan ventrikülün küçük cerrahi örneklerinden tek bir canlı kardiyomiyositlerin elde etmek için yeni bir yöntem doğrulamak. İnsan ventriküler miyositler elektrofizyolojik çalışmalar ve uyuşturucu testi için kullanılabilir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hastalıklı kalplerinden Kardiyomiyositler hücre yapısındaki değişiklikler, eksitasyon kasılma kaplin ve membran iyon akımları içeren karmaşık yeniden işlemlere tabi tutulur. Bu değişiklikler, artmış aritmojenik riski ve kalp hastalarında sistolik ve diyastolik fonksiyon bozukluğu yol açan büzülme değişikliklerden sorumlu olması muhtemeldir. Bununla birlikte, kalp hastalıklarında miyosit fonksiyonu değişiklikler üzerinde en çok bilgi hayvan modellerinde geldi.

Burada tarif ve kardiyak cerrahi operasyon geçiren hastaların ventriküler miyokardın küçük cerrahi örneklerinden canlı miyositleri izole etmek için bir protokol doğrulamak. Protokol detaylı olarak tarif edilmektedir. Elektrofizyolojik ve hücre içi kalsiyum ölçümleri, bu yöntem ile elde edilen insan ventriküler kardiyomiyositlerde tek hücre ölçümler bir dizi uygulanabilirliğini göstermek için rapor edilmiştir.

Protokol he bildirdiYeniden farklı kalp hastalıklarının mevcudiyetinde insan kalbinin fonksiyonel değişiklikler hücresel ve moleküler temelinin gelecek çalışmalar için yararlı olabilir. Bundan başka, bu yöntem, hücresel seviyede yeni terapötik hedeflerini tanımlamak için ve doğrudan translasyonel değeri, insan kardiyomiyositler yeni bileşiklerin etkinliğini test etmek için de kullanılabilir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Miyokardın elektrofizyolojik özelliklerinin diseksiyonu tek kardiyak miyosit izolasyon tekniklerinin geliştirilmesi sonra belirgin ilerlemiştir. Kardiyak Uyarma Daralma Kavrama (EC-Kavrama) anlayışı son gelişmeler de sağlam doku tüm fizyolojik özelliklerini muhafaza uygulanabilir tek kardiyomiyositlerin izole yeteneği ile mümkün olmuştur. Yama kelepçe yöntemleri rutin kardiyak sarkolemmal iyon akımlarının fonksiyonu ve farmakolojik modülasyon çalışma istihdam edilmektedir. Ca 2 + duyarlı boyalar ile hücre içi kalsiyum dinamikleri kayıtları da düzenli EC-Kuplajın fizyolojisi yanı sıra hücre içi Ca 2 + patolojik değişiklikler ile ilgili önemli ver....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Insan dokusu üzerinde deneysel protokoller Careggi Üniversitesi Hastanesinde (; 2009 yenilendi Mayıs 2006/0024713) etik komitesi tarafından onaylandı. Her hasta yazılı bilgilendirilmiş onam verdi.

1.. Çözümleri ve Ekipmanları Hazırlık

Çözümler, Tablo 1 'de tarif edilmiştir. Hücre izolasyon prosedürü basitleştirilmiş bir akış şeması Şekil 1' de bulunur.

Çözüm CP DB KB TB PS EB1 EB2
Reaktif (....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Olmayan başarısız olmayan hipertrofik cerrahi hastalarında 21 ile karşılaştırıldığında, yukarıda açıklanan yöntem, miyektomi operasyon yapıldı hipertrofik kardiyomiyopati (HKM) hastalarda interventriküler septum izole kardiyomiyositlerin fonksiyonel anormalliklerini karakterize etmek için kullanılmıştır. Bu bölümde yer alan sonuçlar, çalışma 21 elde edilir ve bu teknik kardiyak hastalık koşullarında miyokard hücresi işlevinin değişiklikler karakterize etmek için nasıl kullanılabileceğini bir örnek .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu tarif edilen ve insan ventriküler miyokardın cerrahi örneklerden uygun miyositleri izole etmek için bir yöntem onaylamıştır. Başarılı bir şekilde hastalıklı ventriküler miyokardın ikinci bir uygun miyosit ayrılması geliştirilmiş ve ince ayarlı edildi izin vermek için atrial cerrahi örnekler, bu teknikle izole edilmiş hücrelere kullanılmıştır, daha önce tarif edilen protokollere başlayarak. Erken raporlar seçici, fizyolojik uyaran 8,24 ile değiştirilmiş elektrofizyolojik özellikleri ve yanıtları ile sonuçla.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, AB (STREP Proje 241577 "BÜYÜK KALP," 7. Avrupa Çerçeve Programı, CP), Menarini Uluslararası Operasyonlar Lüksemburg (AM), Telethon GGP07133 (CP) ve Gilead Sciences (AM) tarafından desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Potasyum fosfat monobazik (KH2PO4)Sigma-AldrichP9791
Magnezyum sülfat heptahidrat(MgSO4*7H2O)Sigma-AldrichM1880
HEPESSigma-AldrichH3375
AdenozinSigma-AldrichA9251
D-(+)-GlukozSigma-AldrichG8270
MannitolSigma-AldrichM4125
TaurinSigma-AldrichT0625
Potasyum hidroksit (KOH)Sigma-AldrichP5958
Sodyum klorür (NaCl)Sigma-AldrichS7653
Potasyum klorür (KCl)Sigma-AldrichP9333
Sodyum fosfat dibazik (Na2HPO4)Sigma-AldrichS7907
Sodyum bikarbonat (NaHCO3)Sigma-AldrichS6297
Potasyum bikarbonat (KHCO3)Sigma-Aldrich237205
Sodyum piruvatSigma-AldrichP2256
2,3-Bütandion monoksimSigma-AldrichB0753
Sodyum hidroksit(NaOH)Sigma-AldrichS8045
L-Glutamik asit monopotasyum tuzu monohidratSigma-Aldrich49601
Pirüvik asitSigma-Aldrich107360
3-Hidroksibütirik asitSigma-Aldrich166898
Adenozin 5′-trifosfat dipotasyum tuzu dihidrat (K2-ATP)Sigma-AldrichA8937
KreatinSigma-AldrichC0780
Süksinik AsitSigma-AldrichS3674
Etilen glikol-bis(2-aminoetileter)-N,N,N′,N′-tetraasetik asit (EGTA)Sigma-AldrichE0396
Sığır serumuSigma-AldrichA0281
Magnezyum klorür (MgCl2)Sigma-AldrichM8266
Clostridium histolyticum'dan kollajenaz, Tip VSigma-AldrichC9263
Proteinaz, Bakteriyel, Tip XXIVSigma-AldrichP8038
Kalsiyum klorür çözeltisi, H2OSigma-Aldrich21115
Kalsiyum klorür 0.1 M çözeltisiSigma-Aldrich53704
Potasyum metansülfonatSigma-Aldrich83000
FluoForte ReaktifiEnzo Yaşam BilimleriENZ-52015
Güç yükü konsantresi, 100XYaşam TeknolojileriP10020
Perfüzyon Hızlı Adım SistemiWarner InstrumentsVC-77SP
Amfoterisin B çözündürülmüşSigma-AldrichA9528
Multiclamp 700B yama-kelepçe amplifikatörüMoleküler Cihazlar
Digidata 1440AMoleküler Cihazlar
pClamp10.0 Moleküler Cihazlar
Sindirim CihazıÖZELÖZELCihaz, laboratuvarımızda plastik tüpler, dökme Sylgard ve bir motor kullanılarak özel olarak üretilmiştir; Şekil 1C-1D ve Şekil 7'de ayrıntılı olarak açıklanmıştır. İstenirse daha fazla ayrıntı sağlayabiliriz.
Sindirim cihazının fırçaları için silikon elastomerDow CorningSYLGARD® 184
Sindirim cihazı için değişken hızlı dönen motorCrouzet178-4765
Fırça dökümkalıbı N.A.N.A.Kalıp, standart PTFE 2,5 cm çapındaki çubuklardan özel olarak üretilmiştir.

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dow, J. W., Harding, N. G., Powell, T. Isolated cardiac myocytes. I. Preparation of adult myocytes and their homology with the intact tissue. Cardiovascular Research. 15, 483-514 (1981).
  2. Dow, J. W., Harding, N. G., Powell, T. Iso....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Human Ventricular CardiomyocytesCardiomyocyte IsolationVentricular MyocardiumEnzymatic DigestionPatch Clamp RecordingAction Potential MeasurementCalcium Transient AnalysisCardioplegic SolutionStromal Vascular FractionCell Suspension

Related Articles