Taze Cerrahi Örneklerden İzolasyon ve İnsan Ventriküler kardiyomiyositlerin Fonksiyonel Karakterizasyonu

Özet

Kalp hastalıklarının hücre temelinde Mevcut bilgi çok hayvan modelleri üzerinde yapılan çalışmalara dayanmaktadır. Burada açıklamak ve insan ventrikülün küçük cerrahi örneklerinden tek bir canlı kardiyomiyositlerin elde etmek için yeni bir yöntem doğrulamak. İnsan ventriküler miyositler elektrofizyolojik çalışmalar ve uyuşturucu testi için kullanılabilir.

Özet

Hastalıklı kalplerinden Kardiyomiyositler hücre yapısındaki değişiklikler, eksitasyon kasılma kaplin ve membran iyon akımları içeren karmaşık yeniden işlemlere tabi tutulur. Bu değişiklikler, artmış aritmojenik riski ve kalp hastalarında sistolik ve diyastolik fonksiyon bozukluğu yol açan büzülme değişikliklerden sorumlu olması muhtemeldir. Bununla birlikte, kalp hastalıklarında miyosit fonksiyonu değişiklikler üzerinde en çok bilgi hayvan modellerinde geldi.

Burada tarif ve kardiyak cerrahi operasyon geçiren hastaların ventriküler miyokardın küçük cerrahi örneklerinden canlı miyositleri izole etmek için bir protokol doğrulamak. Protokol detaylı olarak tarif edilmektedir. Elektrofizyolojik ve hücre içi kalsiyum ölçümleri, bu yöntem ile elde edilen insan ventriküler kardiyomiyositlerde tek hücre ölçümler bir dizi uygulanabilirliğini göstermek için rapor edilmiştir.

Protokol he bildirdiYeniden farklı kalp hastalıklarının mevcudiyetinde insan kalbinin fonksiyonel değişiklikler hücresel ve moleküler temelinin gelecek çalışmalar için yararlı olabilir. Bundan başka, bu yöntem, hücresel seviyede yeni terapötik hedeflerini tanımlamak için ve doğrudan translasyonel değeri, insan kardiyomiyositler yeni bileşiklerin etkinliğini test etmek için de kullanılabilir.

Giriş

Miyokardın elektrofizyolojik özelliklerinin diseksiyonu tek kardiyak miyosit izolasyon tekniklerinin geliştirilmesi sonra belirgin ilerlemiştir. Kardiyak Uyarma Daralma Kavrama (EC-Kavrama) anlayışı son gelişmeler de sağlam doku tüm fizyolojik özelliklerini muhafaza uygulanabilir tek kardiyomiyositlerin izole yeteneği ile mümkün olmuştur. Yama kelepçe yöntemleri rutin kardiyak sarkolemmal iyon akımlarının fonksiyonu ve farmakolojik modülasyon çalışma istihdam edilmektedir. Ca ^{2 +} duyarlı boyalar ile hücre içi kalsiyum dinamikleri kayıtları da düzenli EC-Kuplajın fizyolojisi yanı sıra hücre içi Ca ^{2 +} patolojik değişiklikler ile ilgili önemli ver....

Protokol

Insan dokusu üzerinde deneysel protokoller Careggi Üniversitesi Hastanesinde (; 2009 yenilendi Mayıs 2006/0024713) etik komitesi tarafından onaylandı. Her hasta yazılı bilgilendirilmiş onam verdi.

1.. Çözümleri ve Ekipmanları Hazırlık

Çözümler, Tablo 1 'de tarif edilmiştir. Hücre izolasyon prosedürü basitleştirilmiş bir akış şeması Şekil 1' de bulunur.

Çözüm		CP	DB	KB	TB	PS	EB1	EB2
Reaktif (....

Sonuçlar

Olmayan başarısız olmayan hipertrofik cerrahi hastalarında ²¹ ile karşılaştırıldığında, yukarıda açıklanan yöntem, miyektomi operasyon yapıldı hipertrofik kardiyomiyopati (HKM) hastalarda interventriküler septum izole kardiyomiyositlerin fonksiyonel anormalliklerini karakterize etmek için kullanılmıştır. Bu bölümde yer alan sonuçlar, çalışma ²¹ elde edilir ve bu teknik kardiyak hastalık koşullarında miyokard hücresi işlevinin değişiklikler karakterize etmek için nasıl kullanılabileceğini bir örnek .......

Tartışma

Bu tarif edilen ve insan ventriküler miyokardın cerrahi örneklerden uygun miyositleri izole etmek için bir yöntem onaylamıştır. Başarılı bir şekilde hastalıklı ventriküler miyokardın ikinci bir uygun miyosit ayrılması geliştirilmiş ve ince ayarlı edildi izin vermek için atrial cerrahi örnekler, bu teknikle izole edilmiş hücrelere kullanılmıştır, daha önce tarif edilen protokollere başlayarak. Erken raporlar seçici, fizyolojik uyaran ^8,24 ile değiştirilmiş elektrofizyolojik özellikleri ve yanıtları ile sonuçla.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Potasyum fosfat monobazik (KH2PO4)	Sigma-Aldrich	P9791
Magnezyum sülfat heptahidrat(MgSO4*7H2O)	Sigma-Aldrich	M1880
HEPES	Sigma-Aldrich	H3375
Adenozin	Sigma-Aldrich	A9251
D-(+)-Glukoz	Sigma-Aldrich	G8270
Mannitol	Sigma-Aldrich	M4125
Taurin	Sigma-Aldrich	T0625
Potasyum hidroksit (KOH)	Sigma-Aldrich	P5958
Sodyum klorür (NaCl)	Sigma-Aldrich	S7653
Potasyum klorür (KCl)	Sigma-Aldrich	P9333
Sodyum fosfat dibazik (Na2HPO4)	Sigma-Aldrich	S7907
Sodyum bikarbonat (NaHCO3)	Sigma-Aldrich	S6297
Potasyum bikarbonat (KHCO3)	Sigma-Aldrich	237205
Sodyum piruvat	Sigma-Aldrich	P2256
2,3-Bütandion monoksim	Sigma-Aldrich	B0753
Sodyum hidroksit(NaOH)	Sigma-Aldrich	S8045
L-Glutamik asit monopotasyum tuzu monohidrat	Sigma-Aldrich	49601
Pirüvik asit	Sigma-Aldrich	107360
3-Hidroksibütirik asit	Sigma-Aldrich	166898
Adenozin 5′-trifosfat dipotasyum tuzu dihidrat (K2-ATP)	Sigma-Aldrich	A8937
Kreatin	Sigma-Aldrich	C0780
Süksinik Asit	Sigma-Aldrich	S3674
Etilen glikol-bis(2-aminoetileter)-N,N,N′,N′-tetraasetik asit (EGTA)	Sigma-Aldrich	E0396
Sığır serumu	Sigma-Aldrich	A0281
Magnezyum klorür (MgCl2)	Sigma-Aldrich	M8266
Clostridium histolyticum'dan kollajenaz, Tip V	Sigma-Aldrich	C9263
Proteinaz, Bakteriyel, Tip XXIV	Sigma-Aldrich	P8038
Kalsiyum klorür çözeltisi, H2O	Sigma-Aldrich	21115
Kalsiyum klorür 0.1 M çözeltisi	Sigma-Aldrich	53704
Potasyum metansülfonat	Sigma-Aldrich	83000
FluoForte Reaktifi	Enzo Yaşam Bilimleri	ENZ-52015
Güç yükü konsantresi, 100X	Yaşam Teknolojileri	P10020
Perfüzyon Hızlı Adım Sistemi	Warner Instruments	VC-77SP
Amfoterisin B çözündürülmüş	Sigma-Aldrich	A9528
Multiclamp 700B yama-kelepçe amplifikatörü	Moleküler Cihazlar
Digidata 1440A	Moleküler Cihazlar
pClamp10.0	Moleküler Cihazlar
Sindirim Cihazı	ÖZEL	ÖZEL	Cihaz, laboratuvarımızda plastik tüpler, dökme Sylgard ve bir motor kullanılarak özel olarak üretilmiştir; Şekil 1C-1D ve Şekil 7'de ayrıntılı olarak açıklanmıştır. İstenirse daha fazla ayrıntı sağlayabiliriz.
Sindirim cihazının fırçaları için silikon elastomer	Dow Corning	SYLGARD® 184
Sindirim cihazı için değişken hızlı dönen motor	Crouzet	178-4765
Fırça döküm	kalıbı N.A.	N.A.	Kalıp, standart PTFE 2,5 cm çapındaki çubuklardan özel olarak üretilmiştir.