Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Elektrofizyolojik Kayıt

16.3K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/51355

⸱

26 Şubat 2014

 ,  , 
1MCDB, Yale University

Bu makalede

Özet

Bu protokol Drosophila labellar tat nöronlar tarafından ateş aksiyon potansiyel yanıtları hücre dışı kayıt açıklar.

Özet

Böceklerin çevresel tat tepkisi güçlü elektrofizyolojik teknikler ile araştırılabilir. Burada anlatılan yöntem olup, araştırmacı böcek sinir sisteminin ortamında tat uyaranlara aldığı duyusal giriş yansıtan doğrudan ve kantitatif tat tepkilerini ölçmek için izin verir. Bu protokol, bu tekniği yerine getiren bütün önemli adımlar sıralanıyor. Bu tür gerekli ekipman ve kayıt için uygun bir ortam seçimi gibi bir elektrofizyoloji teçhizat, montaj kritik adımlar, çizilir. Biz de uygun başvuru ve kayıt elektrotları yaparak kayıt için nasıl hazırlanacağını tarif ve tat arttırıcı çözümleri. Ayrıntılı olarak proboscis hareketsiz kılmak için anında bir cam referans elektrotunun sokulması ile böcek hazırlanması için kullanılan bir yöntem tarif eder. Bir şeker ve acı bir bileşiğe karşılık olarak tat nöronların ateş elektrik darbeleri izlerini gösterir. Protokolün Yönleri t vardırechnically zorlu ve biz böyle sinyal veya sistemde aşırı gürültü olmaması ve olası çözümler olarak karşılaşılabilecek bazı ortak teknik zorluklar, geniş bir açıklama içerir. Tekniği gibi, geçici karmaşık uyaranlara teslim teslim uyaran hemen öncesinde ateş arka plan gözlemlemek, ya da uygun suda çözünmeyen tat bileşikleri kullanmak için yetersizlik olarak sınırlamaları vardır. Bu kısıtlamalara rağmen, (protokol başvurulan minör varyasyonlar dahil), bu teknik, bileşikler tat Drosophila nöron yanıtları kaydetmek için genel olarak kabul edilen prosedür bir standarttır.

Giriş

Tat duygusu bir böcek çözünen kimyasallar geniş bir yelpazede algılamasını sağlar ve bir besleyici maddenin kabulü önemli bir rol ya da bir zararlı veya toksik birinin reddi oynar. Tat da feromon 1-5 saptanması yoluyla, ortak seçiminde bir rol oynadığı düşünülmektedir. Bu önemli ve farklı fonksiyonları duyu sistemleri çevresel ipuçları uygun bir davranış çıkışlara çevirmek nasıl içine böcek tat alma sistemi soruşturmanın zorlayıcı bir hedef haline gelmiştir.

Drosophila melanogaster tat sisteminin temel birimi tat saç veya Sensillum olduğunu. Moleküller ucu 2,6 bir gözenek yoluyla Sensillum girin. Sensilla labellum, bacak, kanat marjı ve farenks 6 bulunur. Labellum üzerine, Sensilla sayısı ve konumu streotiplenmiştir. Uzun (L), ara madde (I) ve kısa (S: Üç morfolojik uzunluğuna göre Sensilla sınıfları vardır ) 7,8 Sensilla. Her iki Sensillum (I-tipi) veya dört (L-ve S-tipi) tat reseptör nöronları (GRNs) 9 ya içerir. Farklı GRNs tat uyaranlara farklı kategorilerde cevap: acı, şeker, tuz ve osmolaritesi 7,10 ve tat reseptörlerinin 8,11-13 farklı alt grupları ifade eder. Sadece I ve S-tipi Sensilla acı-duyarlı GRNs 8,10 içerir. Subesophageal ganglion (SOG) ve lezzet molekülleri ile bunların aktivasyon için GRNs Proje, davranış yanıtı 6 ile sonuçlanan, kod çözme için daha yüksek bir merkezi sinir sistemine iletilir. Nöronlar, nispeten az sayıda ve moleküler ve davranışsal analiz amenability Drosophila tat sistemi genel olarak tat sistemlerinin araştırılması için mükemmel bir model olun. Sistem genetik mutasyona veya GAL4-UAS sentezleme sistemi ile manipüle edilebildiği nispeten kolay olması, aynı zamanda, bir değerli bir araç 14,15 olarak hizmet vermektedir.

Bu Sensilla labellum yüzeyinden çıkıntı için "ontent>, bunlar elektrofizyoloji için mükemmel bir hedef yapmak. GRNs ait ateşleme hücre dışı kayıt kullanılarak izlenebilir. Tarihsel olarak, içine yerleştirilen bir cam elektrod kullanarak yan duvar kayıt yöntemi, Sensillum nöronal aktivitenin kaydetmek için, 26 kullanılmıştır. Bununla birlikte, bu yöntem gerçekleştirmek için teknik olarak zor ve uzun her preparattan kayıt yapmak zordur. bir elektrotla nöronların tepkisini ölçer ucu kayıt yöntemi, bu eş zamanlı olarak, bir tat yoğunluğu arttırıcı maddeyi sunar, bu yana seçim 9,16 göre bir yöntem haline gelmiştir. O Drosophila melanogaster 8,10,17,18 tadı sisteminin yanı sıra diğer böcek türleri 19-23 bir dizi araştırmak için kullanılmıştır. O sahiptir büyük ölçüde telafi tarafından uç-kayıt yönteminin önemli sakıncaları biri üstesinden tastePROBE amplifikatör gelişimi ile kolaylaştırıldıGRN aksiyon potansiyelleri aşırı amplifikasyonu ya da filtre 24 olarak kaydedilmiş izin veren referans elektrot ile böcek Sensillum arasında büyük bir potansiyel farkı. Bir diğer önemli gelişme kaydederken elektrolit 25 olarak trikolin sitrat kullanımı oldu. TCC ozmolaritenin duyarlı GRN yanıtlarını bastırır ve 25 analiz etmek çok daha kolay acı ve şeker tat yoğunluğu arttırıcı tarafından oluşturulan yanıtları yapma, tuz-duyarlı GRN teşvik etmez.

Burada Drosophila labellar Sensilla ucu kayıt anda Carlson laboratuvarda yapılır anlatacağız. Bu protokol, uygun bir elektrofizyoloji nasıl sinek hazırlamak için teçhizat, ve nasıl tat kayıtları gerçekleştirmek için nasıl kurulacağını anlatacağım. Bu kullanırken Biz de Drosophila Sensilla altkümelerinden yanı sıra bazı ortak sorunlar ve karşılaşılabilecek olası çözümleri kayıt sonucu elde edilen bazı temsilci veri mevcuttekniği.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Aşağıdaki protokol Yale Üniversitesi'nin tüm hayvan bakım kurallarına uygundur.

1.. Reaktifler ve Ekipmanları Hazırlık

  1. Kayıt ekipman kurulumu (Şekil 1A).
    1. Sıcaklık veya nem büyük farklılıklar ücretsiz ve aynı zamanda buzdolabı ve santrifüjler gibi elektriksel ve mekanik gürültü kaynaklarından izole olan teçhizat kurulumu için bir oda seçin.
      figure-protocol-1
      Şekil 1. Kayıt teçhizat kurulumu (A) genel bakış. Stereomikroskopta (a) mikromanipülatörler ile, (b). Referans elektrot tutucu (c) headstage (d) karşısında bir platform üzerine monte edilmiş bir anti-vibrasyon platform üzerine monte edilir. Sinek hazırlanması yönelik, nemlendirilmiş hava akımı sağlayan bir çıkış, plastik boru (e) t monte edilirplatformu diye. Headstage bir PC (h) ile bağlanan, dijital kazanım sistemi (DAS) (g), bağlanan bir amplifikatör (f), bağlanır. Elektrotlar ve çıkış borusu (B) Yapılandırma:. Referans soldaki elektrot, sağda kayıt elektrot ve sinek hazırlık yönelik hava akımı çıkış borusunun büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın.
    2. Anti-titreşim tablo veya platformun merkezine Dağı stereomikroskopta.
    3. Manyetik bantları kullanarak sırasıyla mikroskop sağında ve solunda, referans elektrot / böcek hazırlanması ve headstage / kayıt elektrot için mikromanipülatörler takın.
    4. Tüp açma sinek hazırlık yere doğru işaret edilmektedir şekilde odaklı mikroskop arka, (Şekil 1B bakınız) üçüncü micromanipulator Mount çıkış plastik tüp.
    5. At, esnek plastik boru kullanılarakkısmen su ile dolu bir vakum şişeye tako çıkış plastik boru. Sinek doğru çıkış plastik tüpü boyunca nemli bir hava akımının üretilmesi, şişe içinde su ile kabarcık havaya küçük bir akvaryum pompası bağlayın.
    6. Doğrudan hazırlanması aşağıda beyaz kart bir kağıt parçası aracılığıyla ışığı yansıtarak hazırlık aydınlatmak için çıkışlarını yönlendirme titreşim masadan Dağı fiber optik ışık kaynağı. Işık kaynağı masanın üzerinde dinlenmek değil emin olun. Not: Bir kağıt disk üzerindeki ışık kaynağı yansıtma faydası iki yönlüdür: görselleştirmek için Sensilla kolaylaştırarak, kontrastı artırır ve doğrudan ışıktan neden olacaktır hazırlık ısınmayı önler.
    7. Tedarikçi kılavuzuna göre, dijital kazanım sistemi (DAS) ve bir kişisel bilgisayara DAS içine tastePROBE amplifikatör takın. Ayak pedalı tetiği Tak ve çalışma altında düzenlemek. Not: Elektrikle izole duvar amplifikatör için priz ve DAS derece Desir vardıredebiliyoruz.
    8. Elektrikle timsah klipleri ve yalıtımlı elektrik teli ve elektrik bandı uzunlukları kullanarak tabloya metal parçaları bağlayarak mikroskobu, mikromanipülatörler ve ışık kaynağı zemin. Elektriksel zemin veya güç kaynağı fişi ile topraklanır DAS, bina bağlayarak metal bir platform zemin.
    9. Kişisel bilgisayarda tercih DAS için uygun toplama yazılımı yükleyin. Not: Dijital edinme sürücüleri PC'de işletim sistemi ile uyumlu olduğundan emin olun.
    10. Yazılım amplifikasyon (10-100x) yapılandırın, sinyal filtreleme, ve örnekleme hızı (en az 10 KHz) (tipik bir Bessel bant geçiren filtre 100 Hz-3, 000 Hz arasında ayarlanabilir). Not: tat nörondan sinyal genlikleri 0.5-2 mV aralığında genellikle, bu yüzden ekran ölçek onların görselleştirme kolaylaştırmak için ayarlanır. Not: 100 Hz filtresi dışarıdan gelen elektriksel gürültü çıkarmak için yardımcı olur, ancak sivri şeklini değiştirir ve gelişmiş başak sıralama mor yapabilirsinize zorlu. Alternatif olarak, 1 Hz filtre kullanılabilir.
    11. İsteğe bağlı olarak, bir Faraday kafesi bütün titreşim masa etrafında kurulabilir. Bununla birlikte, küçük bir alüminyum folyo levhalar genellikle dış çevre ya da araştırmacı tarafından üretilen herhangi bir gürültü azaltmak için yeterlidir.
  2. Cam Elektrot Hazırlanması
    figure-protocol-2
    Şekil 2. Referans ve kayıt elektrotlar. (A) ile, referans elektrot içine çekti cam kılcal damarların büyütme altında ve kırık (B) ucu olmadan Fotoğraf ve kayıt elektrot (C). Beyaz bar 2 mm'yi temsil eder. resmi büyütmek için buraya tıklayın.
    1. Başvuru çekinBir pipet çektirmenin aleti kullanarak bir cam kılcal elektrot. Not: pipet çektirmenin programının kesin ayarlar cihazdan cihaza değişir. Çok uzun bir kademeli konik ulaşmak için çalışın. Bununla birlikte, yeterli izin vermeyen, elektrotun konik uzunluğunun çapı ne çok ince olduğundan emin olmak, uç sinek hazırlanması (Şekil 2A ve 2B) daha önce kırılacak çünkü ucundaki gözenek boyutu önemli değildir tat nöronlara zarar veya tükürük bezleri delinebilir labellum immobilizasyonu, ne de çok büyük.
    2. Bir pipet çektirmenin enstrüman kullanarak teli olan bir borosilikat cam kılcal kayıt elektrot çekin. Referans elektrotunun daha sığ olan bir konik ve yaklaşık olarak 10-15 um (Şekil 2C) 28 arasında bir gözenek çapına elde deneyin.
  3. Tat yoğunluğu arttırıcı madde çözeltiler hazırlanması
    1. Mübaşir-Ephrussi Ringer Solu kullanıntion (B & D) referans elektrot elektrolit olarak. B ve E bir litre için, 7.5 g NaCl, 0.35 g KCI ve 0.279 g CaCl çözülür 2 ∙ ultra saf bir litre su içinde 2H 2 O. -20 ° C'de küçük alikotları saklayın
    2. Acı veya şeker GRN tepkileri ölçülecek ise, kayıt elektrot elektrolit ve tat arttırıcı çözümler için 25 çözücü olarak 30 mm trikolin sitrat solüsyonu (TCC) kullanın. Su hücrenin yanıtlar için, alternatif olarak, 1-3 mM potasyum klorür solüsyonu kullanılabilir.
    3. Tat yoğunluğu arttırıcı madde çözüm için, toz biçiminde tat yoğunluğu arttırıcı madde uygun miktarda tartmak ve bir başlangıç ​​stok konsantrasyonu için TCC ekleyin. Test için istenen konsantrasyonu elde etmek üzere, bu ilk stoğundan seri dilüsyonları için kullanın. Not: tat yoğunluğu arttırıcı madde, su içinde kolaylıkla çözülür yoksa, örneğin etanol gibi bir solvent, başlangıç ​​stok konsantrasyonu için kullanılabilir. Uygun bir kontrol TTK çözümü ve tat yoğunluğu arttırıcı olmadan çözücüBu durumda kullanılmalıdır.
    4. -20 ° C'de saklayın tümbölenleri uzun vadeli Tat yoğunluğu arttırıcı madde ve kimyasal özelliklerine bağlı olarak, en fazla bir hafta kullanım kayıt boyunca 4 ° C 'de, bir tat yoğunluğu arttırıcı madde çözeltisinin bir çalışma kısım saklayın.

2.. Drosophila Hazırlık

figure-protocol-3
Şekil 3,. Kayıt için sinek hazırlanması. Sineği dorsal toraksa referans elektrotunun (A) ekleme konumu. Beyaz ok referans elektrodu gösterir. (B) referans elektrot Ara pozisyon: boyun ve kafa ile gelişmiş, hortum henüz genişletilmiş değil. (C, D) labellum iç elektrot ucu ve hortum ile son konumda bir referans elektrot uçuntamamen uzatılmış. resmi büyütmek için buraya tıklayın.

  1. Sıcaklık ve nem kontrollü koşullar altında yetiştirilen bakımlı sinek kültürleri, kayıt için yeni eclosed sinekleri toplayın, ve kaydetmeden önce taze kültür şişeleri 5-10 gün onları yaş.
  2. Sinek hazırlamadan önce 15-30 dakika boyunca buz üzerinde mikroskop plaka Chill.
  3. Nazikçe Dolgu Cam referans böyle bir spinal iğne ve 1 ml şırınga olarak 0.5 mm çapında uzun, ince bir plastik iğne kullanılarak B & E çözeltisi ile elektrot ve herhangi kabarcıkları dışarı dokunun. Forseps kullanarak kapalı ucu küçük bir miktar kırmak ve diseksiyon mikroskop altında gözlemleyerek, bir doku ile geriye kalan tüm kabarcıklar çekmek için kılcal eylemi kullanabilirsiniz.
  4. Slide B & hava kabarcıkları tanıtmak için özen, referans elektrot tutucu tel üzerine referans elektrodu E-doldurdu.
  5. Aspire inşa sinek aspiratörü kullanarak, bir P200 pipet içine sinekborudan, örgü, ve pipet ucu, 30-60 saniye boyunca buz kovası ve soğuk 29 yer.
  6. , Buz mikroskop plakasını sökün nemi silin, ve mikroskop altında pozisyon. Yavaşça mikroskop tabağa pipet uçup dokunun.
    Not: sinek yeterli kolayca manipüle hareketsiz olmalıdır.
  7. Forseps diğer çifti ile toraks kararlı tutarken düşük büyütme altında, yavaşça, forseps bir çift ön ayaklarını kaldırın. Dorsal yüzü yukarı bakacak, ventral tarafta sinek yerleştirin. Not: Her zaman mekanik hasarı en aza indirmek için hazırlık sürecinde her zaman forseps ile labellum dokunmamak için dikkatli olun.
  8. Forseps bir çift ile yerde sinek tutarken, posterior dorsal toraks ve orta hatta referans elektrodu takın. Giriş önerilen bir açı baş (Şekil 3A) yönünde yaklaşık olarak kırk beş derecedir.
  9. Referans elektrodu sabitlemeksinek yüksek büyütmede mikroskop altında görünür olduğu şekilde modelleme kil ile e yeri. Forseps iki çift kullanarak referans elektrot tutucuya doğru sinek kaydırarak, boyun ve kafa ile cam elektrot Manevra ve açı. Not: hızlı ama düzgün çalışır; sineği hala soğuk (Şekil 3B) den hareketsiz iken bu adımı tamamlamak için daha kolaydır.
  10. Ayrıca cam referans elektrot aşağı sinek kayarken elektrot ucu labellum içinde ve hortum tam (Şekil 3C ve 3D) genişletilmiş kadar Yavaşça, forseps bir çift burnumun uzatmak. Not: Bu sinek zarar verebilir ve / veya nöronlar tat ve kayıt kalitesini etkileyebilir gibi, hortum dokusunun herhangi bir bölümünü delinme veya referans elektrodu ile labellum kenarını gerilmek için değil dikkat edin.

3. Labellar Sensilla itibaren kayıt

figure-protocol-4
Yüksek büyütme altında sağda temas için hizalanmış kayıt elektrot ile soldan sinek hazırlanması Şekil 4. Sinek kaydı. (A) labellum. (B) kayıt elektrot ve yüksek büyütme altında temas labellum üzerinde tek Sensillum. resmi büyütmek için buraya tıklayın.

  1. Önce her zaman kayıt işlemi sırasında herhangi bir ekipman dokunmadan titreşim tablo veya platform metal yüzeye dokunarak kendinizi topraklayın! Not: O devrelerine zarar verebilir gibi Headstage statik yükü teslim etmek son derece önemlidir.
  2. Micromanipulator Güvenli referans elektrot tutucu recordin hava masaya monte edilmişg kulesi. Yüksek büyütmede (tipik olarak en az 140x) altında mikroskop görüş alanında labellum konumu bir lob, ve nemlendirilmiş hava akımı doğrultusunda.
  3. Nemlendirilmiş hava akımı, bilgisayar, DAS, ve amplifikatör açın. Açık kazanım yazılım.
  4. Durulayın ve istenilen tat yoğunluğu arttırıcı cam kayıt elektrodu doldurun.
    1. Tüpün en az on kat ile az miktarda su çekmek için bir şırınga ve plastik boru 28 kullanılarak saf su ile cam kayıt elektrodu durulayın.
    2. Tat yoğunluğu arttırıcı ile en az beş defa kayıt elektrodu durulayın. Yaklaşık üçte biri tat yoğunluğu arttırıcı ile yarıya kadar dolu kayıt elektrodu doldurun ve tüp kaldırmak. Hava kabarcıkları varsa, serbest ya da sadece elektrot dolum dokunun.
    3. Hava kabarcıkları tanıtmak için değil çok hızlı ve sorunsuz headstage gümüş tel üzerine elektrot kaydırın.
  5. Tat yoğunluğu arttırıcı madde dolu kayıt elektrot ile tek Sensillum uyarır.
    1. Micromanipu kullanınilgi Sensillum ile uyumlu kayıt elektrodu getirmek lator.
    2. Amplifikatör satın alma moduna tetiklemek için ayak pedalına basın.
    3. Bu Sensillum ve kayıt başlar ucu ile temas edinceye kadar dikkatlice micromanipulator ince kontrol düğmesi ile kayıt elektrodu ilerlemek.
    4. 1-2 sn sonra elektrodu sökün.
    5. Eğer arzu edilirse, diğer Sensilla ile adım 3.5 tekrarlayın. Not: aynı Sensillum sunumlar arasında en az 1 dakika bekleyin. Zaman uzun bir süre için tek bir tat yoğunluğu arttırıcı ile kayıt varsa, tat yoğunluğu arttırıcı çözüm kuruyabilir ve ucu çözümü daha fazla konsantre olabilir. Bu hafifçe kılcal eylem tarafından sıvı küçük bir miktar kaldırmak için pürüzsüz kağıt, cam elektrot ucu temas çözülebilir.
  6. , Başka bir tat yoğunluğu arttırıcı yanıtlarını kaydetmek durulayın ve yeni tat yoğunluğu arttırıcı ile yük kayıt elektrot ve adım 3.4 tekrarlayın. Not: iyice tat yoğunluğu arttırıcı arasındaki elektrot durulama absÇapraz bulaşmayı önlemek için olutely önemlidir.
  7. Tarih, genotip ve tat yoğunluğu arttırıcı olarak bilgiyi belirleme ile periyodik veri dosyaları kaydedin. Not: Bu veri analizi için oturum kayıt sırasında tat yoğunluğu arttırıcı ve her sunum Sensillum kimliğinin yazılı kaydını tutmak için önemlidir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 5A, bir şeker, sakaroz bir L Sensillum tepkisini gösterir. Aynı Sensillum acı bir bileşiğine cevap vermez, berberin. Şekil 5B, bir acı duyarlı nöron ihtiva eden bir I tipi Sensillum, berberin yanıt olarak büyük genlik sivri ve sakaroz tepki olarak daha küçük bir amplitüd sivri görüntüler gösterir. I TCC esasen hiçbir karşılık vermez (Şekil 5) göstermek Sensilla ise L, çözücü kontrol, TCC için minimal arka plan yanıt görüntülemek Sensilla. Labellar GRNs tuz ve su t...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Labellar Sensilla bağlı morfolojik organizasyonu ve anatomik farklılıklara kayıt kolaylığı değişir. Bazen bir Sensillum, herhangi bir tat yoğunluğu arttırıcı olumlu bir yanıt ortaya çıkarmak için bilinen bir tane bile yanıt vermiyor. Bu durumda sıklığı, Sensillum türüne bağlı olarak değişir. L Sensilla en tutarlı duyarlı ve nedeniyle uzunluğa erişmek için nispeten kolaydır. Genel olarak, S Sensilla sürekli duyarlı olan, ancak kısa boyu ve labellum pozisyon iyi temas zorlu hale. I preparatın açısına bağlı olarak, daha ko...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Teşekkürler

Bu çalışma (RD) bir NRSA predoctoral hibe 1F31DC012985 tarafından ve JC NIH hibe tarafından desteklenen

Biz yardım derleme rakamlar için el yazması, Dr Ryan Joseph yararlı yorumlar için Dr Linnea Weiss teşekkür etmek istiyorum, ve yardımcı teknik danışmanlık için Dr Frederic Marion-Anket olacaktır. Biz de dört yorumcular yararlı yorumlar kabul etmek istiyorum.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Stereo Zoom MikroskopOlympusSZX12 DFPLFL1.6x PF göz mercekleri: WHN10x-H/22uzun çalışma mesafesi ile ~150X büyütme yeteneğine sahip, masa montaj standı
Titreşim Önleyici MasaKinetik SistemleriBenchMate2210
MikromanipülatörlerNarishigeNMN-21
Manyetik standlarENCOModel #625-0930
Referans Elektrot TutucuHarvard AparatıESP/W-F10NUzun aralık için 5 ml serolojik pipet üzerine monte edilebilir
Gümüş TelDünyası Hassas AletlerAGW1510 0,3-0,5 mm çaplı
İmbik Standıjenerik
Çıkış Plastik Borujenerik, 1 cm çapında
Esnek Plastik BoruNalgene8000-0060VI derece 1/4 iç çap 
500 ml Konik Şişejenerik, yan kollu
Akvaryum PompasıSu BahçeleriHava Pompası 2000
Fiber Optik Işık KaynağıDolan-Jenner IndustriesFiber-Lite 2100
Beyaz Kart/KağıtWhatman1001-110
Dijital Edinim SistemiSyntechIDAC-4Alternatif: Ulusal Aletler NI-6251  
HeadstageSyntechDTP-1Tasteprobe Tasteprobe
AmplifikatörSyntechDTP-1Tasteprobe
Timsah KlipsleriGrainger1XWN7Herhangi bir marka iyidir
İzoleli Elektrik TeliJenerik
Altın Konnektör PimleriDünya Hassas Aletler5482
Kişisel BilgisayarDellVostroDijital alım sistemi ve yazılım ile uyumluluğu kontrol edin
Edinme YazılımıSyntechAutospike Autospike, IDAC-4 ile çalışır; alternatif olarak, NI-6251
Alüminyum Folyo ve / veya Faraday KafesiElektromanyetik gürültü kalkanı
Borosilikat Cam KılcalDamarlar Dünya Hassas Aletler1B100F-4
Pipet ÇektirmeSutter Enstrüman ŞirketiModeli P-87 Alevli/Kahverengi Mikropipet Çektirme Boncuk
ve Ephrussi Zil ÇözeltisiProtokol bölümündeki tarife bakın
Trikolin sitrat, %65 SigmaT0252-100G
StereomikroskopOlympusVMZ 1x-4x10-40X büyütme yeteneğine sahip
Buz KovasıJenerik
p200 Pipet UçlarıJenerik
Spinal İğneTerumoSN*2590
1 ml ŞırıngaBeckton-Dickenson301025
Sinek AspiratörüP1000 pipet uçları, esnek plastik boru ve ağdan monte edilmiştir
Modelleme KilJenerik
ForsepsGüzel Bilim Araçları Dumont11252-00tarafından#5SF (süper ince uçlar)
10 ml ŞırıngaBeckton-Dickinson301029
Plastik BoruTygonR-3603
, , , , , ile LabView kullanın

Kaynaklar

  1. Glendinning, J. I., Jerud, A., Reinherz, A. T. The hungry caterpillar: an analysis of how carbohydrates stimulate feeding in Manduca sexta. The Journal of experimental biology. 210, 3054-3067 (2007).
  2. Yarmolinsky, D. A., Zuker, C. S., Ryba, N. J. Common sense about taste: from mammals to insects. Cell. 139, 234-244 (2009).
  3. Thistle, R., Cameron, P., Ghorayshi, A., Dennison, L., Scott, K. Contact chemoreceptors mediate male-male repulsion and male-female attraction during Drosophila courtship. Cell. 149, 1140-1151 (2012).
  4. Toda, H., Zhao, X., Dickson, B. J. The Drosophila female aphrodisiac pheromone activates ppk23(+) sensory neurons to elicit male courtship behavior. Cell reports. 1, 599-607 (2012).
  5. Lu, B., LaMora, A., Sun, Y., Welsh, M. J., Ben-Shahar, Y. ppk23-Dependent chemosensory functions contribute to courtship behavior in Drosophila melanogaster. PLoS Genet. 8, e1002587(2012).
  6. Stocker, R. F. The organization of the chemosensory system in Drosophila melanogaster: a review. Cell and tissue research. 275, 3-26 (1994).
  7. Hiroi, M., Marion-Poll, F., Tanimura, T. Differentiated response to sugars among labellar chemosensilla in Drosophila. Zoological Science. 19, 1009-1018 (2002).
  8. Weiss, L. A., Dahanukar, A., Kwon, J. Y., Banerjee, D., Carlson, J. R. The Molecular and Cellular Basis of Bitter Taste in Drosophila. Neuron. 69, 258-272 (2011).
  9. Falk, R., Bleiser-Avivi, N., Atidia, J. Labellar taste organs of Drosophila melanogaster. Journal of Morphology. 150, 327-341 (1976).
  10. Hiroi, M., Meunier, N., Marion-Poll, F., Tanimura, T. Two antagonistic gustatory receptor neurons responding to sweet-salty and bitter taste in Drosophila. Journal of neurobiology. 61, 333-342 (2004).
  11. Clyne, P. J., Warr, C. G., Carlson, J. R. Candidate taste receptors in Drosophila. Science (New York, N.Y.). 287, 1830-1834 (2000).
  12. Cameron, P., Hiroi, M., Ngai, J., Scott, K. The molecular basis for water taste in Drosophila. Nature. 465, 91-95 (2010).
  13. Croset, V., et al. Ancient protostome origin of chemosensory ionotropic glutamate receptors and the evolution of insect taste and olfaction. PLoS Genet. 6, e1001064(2010).
  14. Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development (Cambridge, England). 118, 401-415 (1993).
  15. Parks, A. L., et al. Systematic generation of high-resolution deletion coverage of the Drosophila melanogaster genome. Nature genetics. 36, 288-292 (2004).
  16. Hodgson, E. S., Lettvin, J. Y., Roeder, K. D. Physiology of a primary chemoreceptor unit. Science (New York, N.Y.). 122, 417-418 (1955).
  17. Dahanukar, A., Lei, Y. T., Kwon, J. Y., Carlson, J. R. Two Gr genes underlie sugar reception in Drosophila. Neuron. 56, 503-516 (2007).
  18. Lee, Y., Kim, S. H., Montell, C. Avoiding DEET through insect gustatory receptors. Neuron. 67, 555-561 (2010).
  19. Descoins, C., Marion-Poll, F. Electrophysiological responses of gustatory sensilla of Mamestra brassicae (Lepidoptera, Noctuidae) larvae to three ecdysteroids: ecdysone, 20-hydroxyecdysone and ponasterone. A. J Insect Physiol. 45, 871-876 (1999).
  20. Glendinning, J. I., Davis, A., Ramaswamy, S. Contribution of different taste cells and signaling pathways to the discrimination of "bitter" taste stimuli by an insect. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 22, 7281-7287 (2002).
  21. Sanford, J. L., Shields, V. D., Dickens, J. C. Gustatory receptor neuron responds to DEET and other insect repellents in the yellow-fever mosquito, Aedes aegypti. Die Naturwissenschaften. 100, 269-273 (2013).
  22. Merivee, E., Must, A., Milius, M., Luik, A. Electrophysiological identification of the sugar cell in antennal taste sensilla of the predatory ground beetle Pterostichus aethiops. J Insect Physiol. 53, 377-384 (2007).
  23. Popescu, A., et al. Function and central projections of gustatory receptor neurons on the antenna of the noctuid moth Spodoptera littoralis. Journal of comparative physiology. A, Neuroethology. 199, 403-416 (2013).
  24. Marion-Poll, F., Der Pers, J. V. an Un-filtered recordings from insect taste sensilla. Entomologia Experimentalis et Applicata. 80, 113-115 (1996).
  25. Wieczorek, H., Wolff, G. The labellar sugar receptor of Drosophila. J. Comp. Physiol. A. Neuroethol Sens. Neural Behav. Physiol. 164, 825-834 (1989).
  26. Morita, H. Initiation of spike potentials in contact chemosensory hairs of insects. III. D.C. stimulation and generator potential of labellar chemoreceptor of calliphora. Journal of cellular and comparative physiology. 54, 189-204 (1959).
  27. Lacaille, F., et al. An inhibitory sex pheromone tastes bitter for Drosophila males. PLoS One. 2, e661(2007).
  28. Benton, R., Dahanukar, A. Electrophysiological recording from Drosophila taste sensilla. Cold Spring Harbor protocols. 2011, 839-850 (2011).
  29. Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. Single sensillum recordings in the insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae. J. Vis. Exp. , e1725(2010).
  30. Axon Instruments. The Axon Guide for Electrophysiology & Biophysics Laboratory Techniques. , (1993).
  31. Fujishiro, N., Kijima, H., Morita, H. Impulse frequency and action potential amplitude in labellar chemosensory neurones of Drosophila melanogaster. Journal of insect physiology. 30, 317-325 (1984).
  32. Marion-Poll, F., Tobin, T. R. Software filter for detecting spikes superimposed on a fluctuating baseline. Journal of neuroscience. 37, 1-6 (1991).
  33. Meunier, N., Marion-Poll, F., Lansky, P., Rospars, J. P. Estimation of the individual firing frequencies of two neurons recorded with a single electrode. Chem Senses. 28, 671-679 (2003).
  34. Marion-Poll Lab Website. , Available from: http://taste.versailles.inra.fr/fred (2013).
  35. Meunier, N., Marion-Poll, F., Rospars, J. P., Tanimura, T. Peripheral coding of bitter taste in Drosophila. Journal of neurobiology. 56, 139-152 (2003).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Drosophila Tat SensillalarıUç Kayıt YöntemiLabellar Tat KaydıGustatuar Yanıt ÖlçümüElektrofizyoloji Düzenek KurulumuCam Referans ElektrotTat Uyaran Çözeltisi HazırlamaNemlendirilmiş Hava Akımı SistemiNöronal Yanıt Analizi
Elektrofizyolojik Kayıt
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.