Farelerde Host immün yanıtı değerlendirmek için Orofarengeal intratrakeal PAMP İdaresi ve Bronchoalveolar Lavage Kullanımı

Özet

Patojen enfeksiyonuna karşı konak bağışıklık tepkisi sıkı bir şekilde düzenlenmiş bir süreçtir. Farelerde bir lipopolisakarit akciğer maruz modeli kullanarak, bu hastalığın patojenezi ile ilgili kompleks mekanizmalar yüksek çözünürlüklü değerlendirme yapmak mümkündür.

Özet

Patojenlere karşı konak bağışıklık tepkisi karmaşık biyolojik süreçtir. In vivo çalışmaların çoğunluğu klasik konak-patojen ilişkileri farelerde seçin bakteri veya patojen ilişkili moleküler desenleri (PAMPs) intraperitoneal yararlanmak karakterize edilmesi için kullanılır. Bu teknikler, bulaşıcı hastalık patobiyolojisi ilişkili verileri vermiştir büyük olsa da, periton içine enjeksiyon modelleri her zaman akciğerde konukçu-patojen etkileşim çalışmalar için uygun değildir. Farelerde akut akciğer enflamasyonu kullanarak, bu doğuştan gelen bağışıklık tepkisi lipopolisakkarid (LPS) kullanılarak ana bir yüksek çözünürlüklü analizi yapmak mümkündür. Burada, biz, cerrahi olmayan orofaringeal İntratrakeal yönetimini kullanarak LPS yönetmek hastalığı patogenezi ile ilişkili klinik parametrelerini izlemek ve konak immün yanıtı değerlendirmek için, BAL sıvısında kullanmak için yöntemler açıklanmaktadır. Açıklanan tekniklerPAMPs ve patojenlerin çok çeşitli konakçı doğuştan gelen bağışıklık tepkisinin incelenmesi için yaygın olarak uygulanabilir. Aynı şekilde, minör modifikasyonlarla, bu teknikler, aynı zamanda, alerjik nefes yolu iltihap değerlendiren çalışmalar ve farmakolojik uygulamalarda uygulanabilir.

Giriş

Patojenik bakteri türleri ile ilişkili pulmoner enfeksiyonlar küresel morbidite ve mortalite ortak bir nedenidir. Bu patojenlere karşı bağışıklık tepkisini tahrik mekanizmaları belirlenmesi bu enfeksiyonların etkisini hafifletecektir yeni önleme stratejilerinin ve terapötik ajanların geliştirilmesini teşvik edecektir. Burada açıklanan protokol genel amacı, canlı bakteriler için bir vekil olarak bir patojen ilişkili moleküler deseni (PAMP) kullanarak patojen enfeksiyona konak doğuştan gelen bağışıklık yanıtı değerlendirmek için esnek bir yöntem ile kullanıcıya sunmaktır. Bakteri konakçı doğuştan gelen bağışıklık tepkisini değerlendirmek önceki çalışmaların büyük çoğun....

Protokol

Tüm çalışmalar Virginia Tech için Kurumsal Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) onayı altında ve Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Sağlık Rehberi, National Institutes göre yapılmıştır.

1.. Orofarengeal Yönetimi'ni kullanarak LPS intratrakeal (it) Aşılama

1. Her hayvan benzersiz bir kulak yumruk, kulak etiketi veya diğer kurumsal olarak onaylanmış bir yöntem kullanılarak tespit emin olun.
2. Bazal vücut ağırlığı ve her bir hayvan için vücut ısısını kaydedin.
3. LPS çalışma stok hazırlamak. Her fare, 1X fosfat tamponlu salin (PBS) içinde 1 mg / kg LPS, 50 ul bir doz alacaktır. Mock 1 x PBS ile tedavi edi....

Sonuçlar

Gram-negatif bakterilerin hücre duvarları ortamında çok bol LPS, oluşmaktadır. Hassas insan popülasyonlarında LPS solunumu solunum yolu reaktivitesi arttırır ve güçlü bir bağışıklık response11 tetikleme yeteneğine sahiptir. LPS aynı zamanda sağlam bir doğuştan gelen bağışıklık tepkisi ortaya çıkarmak için, fare modellerinde kullanılan bir PAMP olduğunu. Burada açıklanan protokol olarak, fareler, E izole LPS'nin bir o dozunu almıştır coli: orofarengeal bu yönetim kullanarak (serotip 0111 B4). LPS ma.......

Tartışma

Aşağıdaki gibi başarılı bir şekilde, farenin akciğerlerinde bulunan konakçı bağışıklık tepkisini değerlendirmek için en kritik adım: 1) değerlendirilen modeli için uygun fare suşu ve cinsiyet seçin; 2) akciğerlere PAMP teslim optimize edilmesi; 3) doğru toplamak ve Balf işlemek; ve 4) düzgün düzeltmek ve histopatolojik değerlendirmeler için akciğerlerin hazırlamak.

Fare soyunun seçimi konakçı bağışıklık tepkisini değerlendirmek için önemli bir faktördür. C57BL / 6 fareleri, tipik olarak en P.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
C57Bl/6J	Jackson Laboratuvarı	Stok 000664
Kompakt Ölçekli	Ohaus Scale Corporation	71142845
Küçük Hayvan Rektal Termometresi	Braintree Scientific	TH 5
Kemirgenler için Rektal Probu	Braintree Scientific RET	3
Kulak Zımbası	Braintree Scientific	EP-S 901
E. coli 0111:B4	InvivoGen	LPS-EB
1x Fosfat Tamponlu Tuzlu Hayat Teknolojileri		10010-023
İzofluran	Baxter	40032609
İntratrachael Uygulaması ve Akciğer Şişirme Standı	ICAP İmalatı	N/A
Kemirgen Entübasyon Standı	Braintree Scientific	RIS 100
Makas (künt/keskin)	Fisher Scientific	13-806-2
forseps (düz)	Fisher Scientific	22-327-379
forseps (45º, kavisli)	Fisher Scientific	10-275
Makas (künt/künt)	Fisher Scientific	08-940
Pipet (200 & mikro; l Kapasite)	Gilson	F123601
Etanol	Sigma	459844
1 ml Şırınga	BD Medical	301025
10 ml Şırınga	BD Medical	301604
27 G x 0.5 in İğne	BD Medical	305109
Soğutmalı Mikrosantrifüj	Fisher Scientific	13-100-676
Luer adaptörlü 1.2 mm Trakeal Kanüller	Harvard Aparatı	732836
Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisi Yaşam	Teknolojileri	14025-076
4-0 İpek Örgülü Cerrahi Sütür	Ethicon	A183
Luer - Tüp Konnektör Kitleri	Harvard Aparatı	721406
Luer Musluk Kiti	Harvard Aparatı	721664
Tygon formülü E-3603 Laboratuvar Boru Sigma		R-3603
Formalin Çözeltisi, nötr tamponlu,% 10	Sigma	HT501128-4L
Fare IL-1 ve beta; OptEIA ELISA Kiti	BD Biosciences	559603
Fare IL-6 OptEIA ELISA Kiti	BD Biosciences	550950
Fare TNF-&alfa; OptEIA ELISA Kiti	BD Biosciences	560478
Hemositometre	Hausser Scientific	3520
Hemositometre Kapak Camları	Thermo Scientific	22-021-801
Tripan Mavi	Thermo Scientific	SV3008401
Sitoloji Huni Klipsleri	Fisher Scientific	10-357
Sitoloji Hunileri	Fisher Scientific	10-354
Filtre Kartları	Fisher Scientific	22-030-410
Mikroskop Slaytları	Fisher Scientific	12-544-1
Kapak Camları	Fisher Scientific	12-540A
Cytospin Sitosantrifüj	Termo Bilimsel	A78300003
Diff Hızlı Boyama Kiti	Fisher Scientific
Montaj Ortamı	Fisher Scientific	SP15-500

47733150