Yöntem makalesi

Kobaylardaki Sigara Terminal Kan Örnekleme Teknikleri

DOI:

10.3791/51982

⸱

11 Ekim 2014

 ,  ,  , 
1Department of Veterinary Disease Biology, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bilinen bir modeli olsa da, kobay şu anda deneysel hayvan bilimleri bir niş temsil eder ve sınırlı veri çoğu prosedürlerin yürütülmesi mevcuttur. Burada bilinçli ya da anestezi kobay ya vivo kan örnekleme teknikleri terminal olmayan dört farklı yaklaşımlar sunuyoruz.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kobaylar insanlara çeşitli biyolojik benzerliklere sahip ve deneysel hayvan modelleri 1-3 doğrulanır. Belirli metodoloji de çok az üzerinde Ancak, kobay kullanımı halen araştırma ve açıklayıcı veri, nispeten dar bir alanı temsil eder. Kobayların anatomik özellikleri, fare ve sıçanlara kıyasla,. Dolayısıyla örnekleme teknikleri modülasyonu, örneğin, türe özgü farklılıklar için yerleştirmek için, diğer kemirgen modellerinde farklı olmaktadır yeterli ve yüksek kalitede örnekleri elde etmek için gereklidir. In vivo çalışmalar hem uzun hem de kısa süreli sık sık örnekleme kan tekrarlanan gerektiren olarak tekniğinin seçimi de hayvanlarda stres ve rahatsızlığı azaltmak için düşünülmelidir ama aynı zamanda örneklem büyüklüğü ve ulaşılabilirlik gereksinimleri ile sağkalım yanı sıra uyum sağlamak için. Venöz kan örnekleri kobay gibi sitelerin bir dizi elde edilebilir., Safen ve şah damarınıvenler, hem avantajları ve dezavantajları içeren her tekniği 4,5. Burada, biz bilinçli veya anestezi kobay biri için dört farklı kan örnekleme teknikleri sunuyoruz. Prosedürler olmayan tüm terminal prosedürler, laboratuar hayvanlarında 6 kan toplanması için kurallar aşmamak numune hacimleri ve örneklerin sayısını temin vardır. Tüm tarif edilen yöntemler iyice test ve araştırma tesisi bünyesinde çalışmalar in vivo kan örneklemesi tekrarlanmıştır için uygulanmıştır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kobay nedeniyle vitamin C, insan plasenta ile enzim ve lipoprotein profillerini yanı sıra ortak benzerlik metabolize benzer plazma lipoprotein bir besin kaynağı için bir gereklilik olarak, insanlarda biyolojik benzerlikler bir dizi değerli ve valide deneysel hayvan modelidir Prenatal gelişim 1-3,7,8. Bu kobay gibi non-alkolik yağlı karaciğer hastalığı, kardiyovasküler hastalıklar ve C vitamini eksikliğinin varsayılan etkileri değil, aynı zamanda örneğin bir etkisi olarak diyet ilişkili hastalıkların etkilerinin araştırılması için bir çekici ve uygun bir model yapar., Anne diyet müdahale gelişmekte üzerinde değinilir.

Tekrarlanan kan örnekleme çoğu zaman in vivo çalışmalar, hem uzun hem de kısa vadede gereklidir. Nedeniyle türe spesifik anatomik farklılıklara bağlı olarak örnekleme tekniği modülasyonunun diğer kemirgen modelleri ile karşılaştırıldığında, kobaylarda kan örneklerinin elde edilmesi için gerekli olan 4,5. Böylece örnekleme ve taşıma hem de farklı gereksinimleri ve seçenekleri vardır, bu damarların ve arterlerin içerisinde değişiklik içerir ve aynı zamanda kobay bir kuyruk yok. Safen veya tarsal ven örnekleme, hayvan minimal rahatsızlık ve stres neden olur ve 3,9 anestezi gerektirmez. Bu teknik, kan (100-400 ul), örneğin, az miktarda numune tekrar sağlar., Plazmadaki biyokimyasal belirteçlerini. Daha küçük bir numune boyutu (50-100 ul) yeterli değilse, bu oldukça kolay kulak damarından iğne ile elde edilebilir. Bu teknik aynı zamanda bilinçli hayvanlarda gerçekleştirilen ve kan glukoz ölçümü, örneğin 10,11 için yararlıdır edilebilir. Şahdamarından Örnekleme kan daha büyük miktarda (1-2 ml) toplanması için izin verir ama anestezi gerektirir.

Burada, biz bilinçli veya anestezi kobay biri için dört farklı kan örnekleme teknikleri sunuyoruz. Procedures olmayan tüm terminal prosedürler, laboratuar hayvanlarında 6 kan toplanması için kurallar aşmamak numune hacimleri ve örneklerin sayısını temin vardır. Bu stres minimumda tutulması gerektiğini hayvan refahı yanı sıra iyi bilim çıkarınadır. Sonuç olarak, sadece iyi eğitimli ve yetkin kişisel hayvan işlemleri yapmalıdır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gösterilen işlemleri Gıda, Tarım ve Balıkçılık Bakanlığı bünyesinde Danimarka Hayvan Deneyleri Müfettişliği tarafından onaylanan protokollere göre gerçekleştirilmiştir.

Yanal safen veya Tarsal Ven 1. Kan Alınması

  1. Anestezi olmadan bu prosedürü ve bir araştırmacı, kobay ele biri olan ve bir örneği toplama yardım gerçekleştirin.
  2. Damarlar görünür olana kadar bir elektrikli tıraş makinesi ile arka bacak tarsal bölge tıraş. Alan ponksiyon ile müdahale kürk önlemek için yeterince büyük olduğundan emin olun.
  3. Bir ılık su banyosu içinde arka bacak yerleştirin ve yavaşça venler daha genişlemiş ve belirgin hale bacak ovmak.
  4. Temiz bir havlu ile silin ve bacak gazlı bez veya% 70 alkol ile nemlendirilmiş bir pamuklu çubukla delinme siteyi dezenfekte.
  5. Kobay dizginlemek ve hemen diz eklem t yukarıda nazik bir basınç uygularken aşağı arka bacak uzatmakO durağanlığı sağlar.
  6. 21 G iğne veya neşter kullanarak ven delinme. Kan örneğin toplayın., Bir koleksiyon veya kılcal tüp kullanarak. Yavaşça kan akışını yardım bacak manipüle.
  7. Numune alındıktan sonra, durağanlık bırakın. Kanama durana kadar ponksiyon hafif basınç ile gazlı bez veya pamuk parçası uygulayın.
  8. Hemostaz sağlamak için 5-10 dakika için kendi kafesine ve monitöre hayvan dönün.

Kulak damarından 2. Kan Alınması

  1. Bir arkadaşımızın yardımı ile tek başına ya da tercihen anestezi olmadan bu işlemi gerçekleştirin.
  2. Tül veya% 70 alkol ile nemlendirilmiş bir pamuklu çubuk kullanarak kulağın dorsal yüzeyini dezenfekte edin.
  3. Durağanlığı sağlamak için kulak tabanına hafif bir basınç uygulayın.
  4. 21 G iğne veya neşter kullanarak ven delinme ve kan toplamak.
  5. , Staz bırakın örnek elde edildikten sonra, ge ile gazlı bez veya pamuk parçası uygulayınKanama kadar ponksiyon ntle basınç durdu.
  6. Hemostaz sağlamak için 5-10 dakika için kendi kafesine ve monitöre hayvan dönün.

Boyun Ven 3. Kan Alınması

  1. Bir ek araştırmacının yardımıyla kullanarak bu işlemi yürütmek; bir kobay işleme ve bir numune alınması.
  2. Bu prosedürün süresi boyunca uygun bir anestezi ile kobay Anesteziyoloji. Tiletamine bir karışımı (0.93 mg / kg), zolazepam (0.93 mg / kg), ksilazin (1.49 mg / kg) ve butorfanol (0.06 mg / kg) kullanılabilir.
  3. Sırtında anestezi kobay yerleştirin ve yavaşça kaudal ön ayaklarını geri çekin.
  4. Tıraş ve dezenfekte (örneğin,.,% 70 alkol), boynun ventral parçası.
  5. Coat pıhtılaşma riskini azaltmak amacıyla heparin veya EDTA örnekleme öncesinde biriyle şırınga.
  6. Iğne 1 ml şırınga ap monte (23 G veya) klavikulayı palpe ve 25 G eklemekk 1 cm omuz eklemi hizasında lateral. Hafif bir alçak basınç uygulanarak bir hafif bir yükseliş ve medial açıda şırınga tutun. Juguler ven oldukça yüzeysel bulunmaktadır olarak altta yatan yapılara zarar kaçının. Venin artan durağanlığı sağlamak için hafifçe geriye doğru kobay boyun eğin.
  7. Kan örneği elde edilir, ön bacaklar bırakın ve iğne çekilmeden önce stasisi iyileştirmeye. Ponksiyon hafif bir basınç uygulamak için gazlı bez veya pamuk kuru bir parça kullanın.
  8. Bir kurtarma kafesine hayvan dönün ve anestezi hemostaz ve iyileşme sağlamak için izlemek.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bilinçli ya da anestezi kobay ya olmayan terminal in vivo kan örnekleme tekniklerine dört farklı yaklaşımlar sunulmuştur. Şekil 1 kobay ve olası delinme sitelerinde yanal Safen ve tarsal ven seyrini göstermektedir. Gine domuzu kulağın arka yüzeyinde görülebilir Kulak damarları sadece çok az bir miktarı, gerekli olduğunda Bu damarlar kan örneği almak için kullanılabilir, Şekil 2'de gösterilmiştir. Juguler kan numunesi almak için kobay konumu Şekil 3'te göstermel...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fareler ve sıçanlar ile karşılaştırıldığında, kobay doğası gereği korku ve sakince yaklaştı ve stresi azaltmak için doğru ele alınması gerekir. Görünümünde bir hayvan refahı açısından, dikkatle hareket doğal bir önceliktir; Bununla birlikte, bu da,. toplanan veriler örneğin anksiyete ile ilişkili etkilerin riskini azaltmak kortikosteroid artmış kan glikoz düzeyleri ve 12 olacaktır. Aynı şekilde, günlük kullanım normal prosedürler için hayvanları alıştırarak ve daha da stresi azaltmak için hizmet edeb...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok. Tüm prosedürler Avrupa Sözleşmesi ETS 123 Kurulu Kararı gereğince Danimarka'nın Hayvan Deneyleri Yasası, tarafından kabul edildi.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz Annie B. Kristensen, Elisabeth V. Andersen, Belinda B. Bringtoft ve Deneysel Tıp, Frederiksberg Kampüsü, Sağlık ve Tıp Bilimleri Fakültesi, Kopenhag, Danimarka Üniversitesi Bölümü'nde hayvan bakıcıları maharetli yardım kabul. Jacob Lønholdt prosedürleri filme yaptığı mükemmel teknik yardım için teşekkür etti. Bu çalışma, in vivo Farmakoloji ve Kopenhag Üniversitesi LIFEPHARM Merkezi tarafından kısmen desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Elektrikli tıraş makinesiWella (Contura), Danimarka273207Alternatif ürün kullanılabilir. Çoklu tedarikçiler
Şırıngalar B.Braun-Omnifix-F, Almanya9161406VAlternatif ürün kullanılabilir. Birden fazla tedarikçi
İğnelerBD Microlance, İspanya301156Alternatif ürün kullanılabilir. Birden fazla tedarikçi
Microvette toplama tüpü Sarstedt, D-51588Nü mbrecht, Almanya201,288,100Alternatif ürün kullanılabilir. Birden fazla tedarikçi
Accu-Check analizörüRoche A/S Diagnostics, DanimarkaAlternatif ürün kullanılabilir. Birden fazla tedarikçi
Heparin 5000 IE/mlLEO Pharma, DanimarkaAlternatif ürün kullanılabilir. Birden fazla tedarikçi
AnesteziZoletil 50, Chemvet, DanimarkaAlternatif ürün kullanılabilir. Birden fazla tedarikçi
AnesteziNarcoxyl vet 20 mg / ml, Intervet, DanimarkaAlternatif ürün kullanılabilir. Birden fazla tedarikçi
AnesteziTorbugesic vet 10 mg/ml, Scanvet, DanimarkaAlternatif ürün kullanılabilir. Birden fazla tedarikçi
Nötr göz merhemiAlternatif ürün kullanılabilir. Birden fazla tedarikçi
Gazlı bez veya pamuklu çubuk Alternatif ürün kullanılabilir. Birden fazla tedarikçi
Dezenfektan (%70 alkol)Alternatif ürün kullanılabilir. Birden fazla tedarikçi

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. DeOgburn, R., et al. Effects of increased dietary cholesterol with carbohydrate restriction on hepatic lipid metabolism in Guinea pigs. Comp.Med. 62 (2), 109-115 (2012).
  2. Fernandez, M., Volek, J. S. Guinea pigs a suitable animal model to study lipoprotein metabolism, atherosclerosis and inflammation. Nutr Metab (Lond). 3 (17), (2006).
  3. Frikke-Schmidt, H., Tveden-Nyborg, P., Birck, M. M., Lykkesfeldt, J. High dietary fat and cholesterol exacerbates chronic vitamin C deficiency in guinea pigs. Br J Nutr. 105 (1), 54-61 (2011).
  4. Hem, A., Smith, A. J., Solberg, P. Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink. Lab Anim. 32 (4), 364-368 (1998).
  5. Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
  6. Guillen, J. FELASA guidelines and recommendations. J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (3), 311-321 (2012).
  7. Ye, P., Cheah, I. K., Halliwell, B. High fat diets and pathology in the guinea pig Atherosclerosis or liver damage. Biochim Biophys Acta. 1832 (2), 355-364 (2013).
  8. Tveden-Nyborg, P., et al. Maternal vitamin C deficiency during pregnancy persistently impairs hippocampal neurogenesis in offspring of guinea pigs. PLoS One. 7 (10), 12-18391 (2012).
  9. Schjoldager, J. G., Tveden-Nyborg, P., Lykkesfeldt, J. Prolonged maternal vitamin C deficiency overrides preferential fetal ascorbate transport but does not influence perinatal survival in guinea pigs. Br J Nutr. 110 (9), 1573-1579 (2013).
  10. Greulich, S., et al. Secretory products of guinea pig epicardial fat induce insulin resistance and impair primary adult rat cardiomyocyte function. J Cell Mol Med. 15 (11), 2399-2410 (2011).
  11. Swifka, J., Weiss, J., Addicks, K., Eckel, J., Rosen, P. Epicardial fat from guinea pig a model to study the paracrine network of interactions between epicardial fat and myocardium. Cardiovasc Drugs Ther. 22 (2), 107-114 (2008).
  12. Pilny, A. A. Clinical hematology of rodent species. Vet.Clin North Am Exot Anim Pract. 11 (3), 523-vii (2008).
  13. Franco, N. H., Olsson, I. A. Scientists and the 3Rs: attitudes to animal use in biomedical research and the effect of mandatory training in laboratory animal science. Lab Anim. 48 (1), 50-60 (2014).
  14. Van, L. J., et al. eAssessing the application of the 3Rs a survey among animal welfare officers in The Netherlands. Lab Anim. 47 (3), 210-219 (2013).
  15. Sloan, R. C., et al. High doses of ketamine-xylazine anesthesia reduce cardiac ischemia-reperfusion injury in guinea pigs. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (3), 349-354 (2011).
  16. Jacobson, C. A. A novel anaesthetic regimen for surgical procedures in guinea pigs. Lab Anim. 35 (3), 271-276 (2001).
  17. Saha, J. K., Xia, J., Grondin, J. M., Engle, S. K., Jakubowski, J. A. Acute hyperglycemia induced by ketamine xylazine anesthesia in rats mechanisms and implications for preclinical models. Exp Biol Med(Maywood). 230 (10), 777-784 (2005).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Gine Domuzu Kan rneklemesiTerminal Olmayan rneklemeSafen Ven rneklemesiJuguler Ven rneklemesiTarsal Ven rneklemesiKulak Veni rneklemesiAnestezili Hayvandan rneklemeBilin li Hayvandan rneklemeKan Toplama K lavuzlarTekrarlayan n Vivo rnekleme

İlgili makaleler