Xenopus laevis embriyoların hastanın ağız boyutunu ve şeklini ölçmek için bir yöntem geliştirilmiştir. Bu protokol, geleneksel boyutu ölçümleri, hastanın ağız geliştirme ve kusur daha sofistike analizlerine olanak sağlamak için geometrik morfometrik ile birleştirilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Orofasial fenotipleri Niceleme Xenopus
Bu makalede
Özet
Özet
Xenopus kraniyofasiyal gelişimi ve kusurları yöneten mekanizmaların diseksiyon için önemli bir araç haline gelmiştir. Orofasyal gelişimini ölçmek için bir yöntem olup, genetik veya moleküler gen ekspresyonunu ve protein işlevini değiştirmek mümkün olan maddeler ile kaldırılması üzerine orofasial fenotipleri daha titiz analizi için izin verir. Embriyonik başkanlarının iki boyutlu görüntülerini kullanarak, geleneksel boyutların-gibi orofasyal genişlik, yükseklik ve alan-ölçülür. Buna ek olarak, embriyonik ağız açıklığı bir yuvarlaklık ölçü ağız şeklini tarif etmek için kullanılır. Bu iki boyutlu görüntü Geometrik Morfometri da oral bölgede şeklindeki değişiklikler arasında daha sofistike bir görünüm temin etmek üzere gerçekleştirilir. Merkezi orofasial bölgedeki belirli noktalara atanan ve koordinatlar oluşturulur. Bir ilke bileşen analizi, daha sonra tedavi ayrımcılık ilkesi bileşenleri dönüm koordinatları azaltmak için kullanılırgrupları. Bu sonuçlar benzer orofasiyal şekilleri ile bireylerin birlikte küme hangi bir dağılım grafiği olarak gösterilir. Ayrıca istatistiksel olarak iki tedavi grubu arasındaki yerlerinden pozisyonlarını karşılaştıran bir diskriminant fonksiyon analizi yapmak için yararlıdır. Bu analiz, dönüm pozisyonda değişiklikler vektörler olarak görülen bir transformasyon ızgara üzerinde gösterilir. Bir ızgara, bir eğirme düzeni önemli bir merkezi nokta pozisyonları değişti yeri göstermek için görüntülenen ve böylece bu vektörlerin bindirilir. Ayırt edici fonksiyon analizinde, şekil değiştiren bir istatistiksel ölçüme dayanmaktadır ve bu nedenle, bir p-değeri ile değerlendirilebilir. Bu analizi sadece bir Stereoskop ve ücretsiz bir yazılım gerektirmeden, basit ve erişilebilir ve böylece değerli bir araştırma ve öğretim bir kaynak olacaktır.
Giriş
Insan doğum defektleri en sık ve yıkıcı türleri arasında böyle orofasial yarıkların 1 olarak ağız ve yüz etkileyen olanlardır. Malforme orofasiyal yapıları ile çocukların yaşamları boyunca birden fazla ameliyat geçiren ve yüz disfigurements, konuşma, işitme ve yeme sorunları ile mücadele. Bu nedenle, Kranyo- ve orofasyal gelişiminde yeni araştırmalar kolaylaştırmak insanlarda doğum kusurları bu tür önlenmesi ve tedavisi için çok önemlidir. Xenopus laevis kraniofasyal gelişimi yöneten mekanizmalar diseksiyon için yeni bir araç olarak ortaya çıkmıştır (bazı örnekler 2,3,4 dahil -11). Bu nedenle, bu türün baş geliştirme ve yüzü ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Xenopus laevis kullanılarak gerçekleştirilen tüm deneyler, IACUC (protokol # AD20261) tarafından onaylanmıştır.
1. Hazırlanması Reaktifler ve Gerekli Malzemeler
- Reaktifler:
- 10x MBS (Modifiye Barth Salin) solüsyon 22 1 L olun. Damıtılmış su, 1 L NaCl (880 mM), KCI (10 mM), MgSO 4 (10 mM), HEPES (50 mM, pH 7.8) ve NaHCO3 (25 mM) eklenir. NaOH ile 7.8'e pH ayarlayın.
- Damıtılmış su içinde 900 ml 10x MBS çözeltisi 100 ml seyreltilmesiyle 1x MBS 1 L olun. 1 M CaCI2 çözeltisi 0.7 ml ilave edilir.
- Damıtılmış su içinde 900 ml 1 x MBS çözeltisi 100 ml s....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Burada, orofasyal boyut ve şekilde olan bir miktarsal analizi, tedavi edilmeyen kontroller için retinoik asit reseptörü inhibitörü (RAR inhibitörü) ile işlemden geçirildi embriyolar karşılaştırma gösterilmiştir. Embriyolar, 30 (26-35 HPF) için aşamasında 24 bu kimyasal inhibitörünün 1 uM konsantrasyon ile muamele yıkanmış ve aşama 42 (82 HPF) sabitlenmiştir. Daha sonra işlenmiş ve protokolde tarif edildiği gibi analiz edildi. Sonuçlar, orijinal veri, ancak önceki yayınlarda 2,3 gözlemleri ile tutarlıdır. Kont.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Xenopus laevis gelişimsel altında yatan mekanizmaları orofasial gelişimini diseksiyon için yararlı bir araç haline gelmiştir; Ancak, kurbağa bu bölgenin büyüklüğü ve şekli değişiklikleri açıklayan hiçbir protokoller vardır şu anda. Burada anlatılan yöntemi Xenopus'ta ve diğer omurgalıların orofasial fenotip daha titiz ölçümü için izin vererek orofasial kalkınma alanında önemli bir katkı sağlayacaktır.
Uygun şekilde bu protokolü yürütme ilk ve en önemli yönü, hem kesin v.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Teşekkürler
VCU A. Dickinson start-up paraları bu çalışmaları destekledi.
Yazarlar şematik Çizdikten onun sanatsal yetenek için Dan Nacu kabul etmek istiyoruz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Diseksiyon mikroskobu | Zeiss, | AxioCamICC1 kamera ile donatılmıştır | |
| Dumont #5 Inox forseps | Güzel Bilim Araçları | 11251-10 | |
| Steril, tek kullanımlık neşter | Sklar | 06-2015 | |
| 24 kuyulu plaka | Fisher Scientific | 087721 | |
| Standardı Tek kullanımlık transfer pipetleri | Fisher Scientific | 13-711-7M | |
| 150 mm x 15 mm Petri kapları | Falcon | 351058 | |
| İnkübatörler | Ectotherm | 15 °C'ye ayarlanmış; C veya 20 & derece; C | |
| Modelleme Kili | , Premo veya siyah veya beyaz diğer toksik olmayan modelleme kili | ||
| Düz alay iğnesi | Thermo Scientific | 19010 | |
| Kılcal Boru (iğneler için), | FHC | 30-30-1 | Borozil 1.0 mm OD x 0.5 mm ID/Fiber, her biri 100 mm |
| İğne Çektirme, Model: P-97 | Sutter Instrument Co. | İğne Çektirme: P-97 Alevli / Bown mikropipet çektirme Filament: FB300B | Filamentler için 3,0 mm genişliğinde Sutter 3,00 mm kare kutu filamentler kullanın. |
| Pipettemen | Gilson | F144802, F123600, F123602 | |
| BMS-453 | Tocris | 3409 | |
| DMSO | Amerikan Biyoanalitik | AB00435-01000 | |
| Sistein | Sigma-Aldrich | 52-90-4 | |
| Paraformaldehit tozu | Sigma-Aldrich | 158127 | |
| Petri kapları | Falcom | 353003, 351058 | 100 mm çap ve 150 mm çap |
| % 100 Etanol | VWR | 89125-170 |
Kaynaklar
- Mossey, P. A., Little, J., Munger, R. G., Dixon, M. J., Shaw, W. C. Cleft lip and palate. Lancet. 374, 1773-1785 (2009).
- Kennedy, A. E., Dickinson, A. J. Median facial clefts in Xenopus laevis: roles of retinoic acid signaling and homeobox genes. Dev Biol. 365, 229-240 (2012). <....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
