Kemirgen timektomi, immünolojik araştırmalarda değerli bir tekniktir. Burada, perioperatif morbidite ve mortaliteyi en aza indirmek için non-invaziv entübasyon ve pozitif basınçlı ventilasyon ile birlikte mini sternotomi kullanılarak yapılan bir yetişkin sıçanlarda tam timektomi protokolü anlatılmıştır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Non-invaziv Endotrakeal Entübasyon Erişkin Sıçanlarda Komple Timektomi
Bu makalede
Özet
Özet
Yenidoğan kemirgenlerde Timektomi immünolojik çalışmalar için bir köklü ve güvenilir bir yöntemdir. Ancak, yetişkin sıçanlarda, plevra bozulma gelen kanama ve pnömotoraks komplikasyonları önemli bir mortalite oranı neden olabilir. Bu protokol, mini-sternotomi ve endotrakeal entübasyon kullanan sıçan Timektomiye basit bir yöntemdir. Entübasyon bir non-invaziv ve kolay tekrarlanabilir yöntemle gerçekleştirilir ve pnömotoraks önlemek için pozitif basınçlı ventilasyon ve plevra kesintileri en aza indirmek için dikkatli timus diseksiyon için yeterli zaman sağlar kontrollü hava yolu için izin verir. Hala timus tam görselleştirme sağlarken bir 1,5 cm sternum insizyon, mediastinal damarlar ve plevra ile temas azalır. Mediasten ortaya çıkmasının ardından, timus büyütme altında künt diseksiyon ile kaldırılır. plevral boşluk daha sonra cerrahi yapıştırıcı uygulanması ve ardından ön-trakeal kas dikiş kapatma ile sızdırmaz kılınmıştır.Toraks sonra cilt sütür kapanması ardından sternum sütür kapanması ile kapatılır. Akış sitometrisi ile saf T-hücrelerinin immünohistokimyasal (IHK), mediastinal doku boyama ve olmaması ile kanıtlandığı gibi tüm timektomi tamamlandı ve prosedür,% 96 hayatta kalma oranlarına sahipti. En az komplikasyon ile tam timektomi atimik yetişkin farelerde de immünolojik çalışmalar için arzu edilir, bu yöntem uygundur.
Giriş
1960'ların başından beri, timus merkezi immünolojik tolerans gelişiminde kritik rol için kabul edilmiştir. Kemirgen timektomi organ transplantasyonu ve tümör metastazının bir ortamda lenfosit farklılaşması, kendi kendine tolerans ve bağışıklık toleransı, timus rolünü tanımlamak için gerekli bir yöntem olduğu kanıtlanmıştır. Fare timus çıkarılması, T-hücresi kaybı ya da doğal saf T hücrelerinin yeniden ortaya çıkması tarif edilmiş T hücre popülasyonlarının adoptif transfer edilmesini içeren çalışmalar için izin verir.
Yenidoğan kemirgenlerde timektomi güvenilir sonuçlar 1 bir emme tekniği kullanılarak gerçekleştirilebilir. Yetişkin farelerde, bu yöntem yaklaşık% 20 ölüm oranı ile ilişkilidir ve sıklıkla yetersiz timektomi 2 ile sonuçlanır. Sürekli yetişkin sıçanlarda tam timektomi ulaşmak için, medyan sternotomi ile mediasten açık poz gereklidir. Bununla birlikte, bu% 6 2- 4 - prosedürü 1.5 arasında değişen bir genel mortalite oranı açan trakea yaralanması, kanama ve pnömotoraks dahil komplikasyonlar ile ilişkilidir.
Son iki yıldır timektomi teknikleri gelişmeler perioperatif komplikasyonlar azalmış ve sağkalım oranları düzeldi. Pozitif basınçlı ventilasyon sağlayan Endotrakeal entübasyon pnömotoraks oranları 5 azalmıştır. Entübasyon Yöntemleri önceden doğrudan vokal kord görselleştirme kullanarak daha az invaziv yöntemler trakea açık maruz aralığı nitelendirdi. Entübasyon prosedürü ile ilişkili komplikasyonlar kardiyak delme veya vena kava kesiden kaynaklanan trakeal yaralanma, vokal kord rüptürü, istenmeyen özofagus entübasyon ve kanama sayılabilir. Buna ek olarak, plevral astar alt timik lob yakınlığı pnömotoraks neden olabilir.
Burada bir teknik tarifBir körelmiş sonu angiocatheter ve deri trakea aydınlatma kullanarak entübasyon basit bir yöntemi izlenerek minimal invaziv 2 cm'lik cilt kesisi ile timektomi. timektomi 1.5 cm sternotomi ve mediasteni mühür ve kanama ve solunum komplikasyonları en aza indirmek için cerrahi tutkal uygulaması ile üç katmanlı kapatma içerir. Timektomi ve IHC boyamada timik doku aradan sonra CD4 + ve CD8 + naiv T hücrelerinin yok olması ile kanıtlandığı gibi bu yöntem, güvenilir bir tam bir timektomi sonuçlanır. Operatif kez ve peri-prosedürel ölüm minimumda tutulur.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Not: sıçan kullanımını kapsayan tüm deney prosedürleri, Duke Üniversitesi Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır protokollere uygun olarak yapıldı.
Trakeal Entübasyon Kanül 1. Hazırlık
- Pense kesme ile 2 inç 14 G angiocathether iğnenin iğne ucunu kes.
- İğnenin lümen iğne burunlu pense ile kapalı sıkıştırın.
- Kesme pense ile açık-lümen bölümünün kenarına aşağı sıkışmak bölümü kesin, ve sonra 30 kalan sonu her iki tarafında kenarları kesilmiş - İğne kenarına 45 ° açı.
- Düz kayma-eklem pense açık alana kanül 4 mm ve yukarı doğru hafif bir eğri ucunda oluşmuş kadar yukarı çekin - alt 3 koyun.
NOT: Bu trakea (Şekil 1) içine kateter yönetmenlik kolaylaştıracaktır. - Kanül sonunda kenarlarını aşağı pürüzsüz ince zımpara kağıdı kullanın.
- Anjiyokateter tüp içine küntleşmiş enstrüman dönün. Boru küntleşmiş iğne biraz daha kısa olduğundan emin olun.
2. Ön-Cerrahi İşlemleri
- Çalışma alanı üzerinde 10X büyütme ayarlanmış bir işletim mikroskop yerleştirerek prosedür için site kurmak.
- Çalışma alanında bir ısınma yastık yerleştirin ve temiz bir emilim ped ile kaplayın.
- Cerrahi alan yakın bir kalp hızı ve kan oksijenlenme monitörü ayarlayın.
- Ağırlık esaslı ilaç doz (örn, postoperatif analjezi, antibiyotikler veya lenfosit tüketen antikor) için sıçan tartılır.
NOT: - 450 gr Tipik erişkin sıçan 350 arasında tartın. - Bir indüksiyon odacığı kullanılarak buharlaştırılmış% 3 izofluran-O 2 (3 L / dak) ile oturaklı sıçan aktif kömür ihtiva eden bir atık anestezi gazı tahliye sisteminden tahliye edilebilir. Anestezi indüksiyonu için 5 dakika entübasyon için gerekli derin anestezi sağlamaktayız.
- Subkutan sıçan önce entübasyon ve cerrahi ile devam etmek Carprofen veya Meloxicane (4.4 mg / kg) uygulayınız.
- Entübasyon öncesi anestezi sıçan boyun ve göğüs tıraş elektrik makasları kullanın.
3. Entübasyon
- Entübasyon kanül ucunda yağlama küçük bir miktar (örneğin, KY jel) sürterek entübasyon kurulumu hazırlayın. Konnektör tüp yoluyla izofluran gaz akışını başlatmak için ventilatör açın.
- Entübasyon aparatı sıçan aktarın ve üst kesici dişlerin (Şekil 2A) tarafından metal çubuğun üzerine sıçan askıya.
NOT: Bazı entübasyon aygıtları çevrimiçi satın alınabilir. Burada gösterilen model bütan meşale kullanarak 2 x 4 inç lomber parçasının bölümler etrafında kalıp bir akrilik sayfasını kullanarak ev yapımı olduğu ve takviyeler kloroform ile bağlıdırlar. bar (ya da metal tel) s yerleştirilen maskeleme bandı üzerinde sondaj delikleri ile bağlıakrilik ide parçalanmayı veya çatlamasını önlemek için. - Boyun (Şekil 2B) ventral yüzeyinden 2 cm - esnek, yüksek yoğunluklu ışık kaynağını 1 konumlandırarak sıçan boynunu Trans-aydınlatmak.
- Yavaşça yukarı ve alt dişlerin tarafına dilini çekin öğrenci standart desen forseps bir çift kullanın. Kavrama baş ve bir elin işaret parmağı dilin alt ucuna karşı forseps bir tarafında düz iç yüzeyi yerleştirerek arasında dilidir. Basın ventral gırtlak (Şekil 2C) epiglottis ve diyafram ortaya çıkarmak.
- Ses telleri görselleştirmek ve angiocatheter göbek kesiciler dokunana kadar trakea içine açık glottisin ile öne entübasyon kanül kalkık, körelmiş ucunu kılavuz.
- Metal stile çıkarın ve izofluran ile havalandırma başlamak için anjiyokateter açılması için anestezi boru takın.
NOT: Tipik oksijen floventilatöre w oranı% 3 izofluran ile 3 L / dk.- 14 mmHg - ~ 12 bir basınç elde hacim kontrol ventilatör modunda 60 respirations / dakikalık bir oranda ventilatörü ayarlayın. 3 cm H 2 O bir pozitif ekspirasyon sonu basıncı (PEEP) kullanın
- Endotrakeal tüpün doğru yerleşimi sağlamak için ventilatör ile senkronize ikili göğüs duvarı genişleme gözlemleyin.
- Anestezi altında iken kuruluğu önlemek için sıçan gözlerine veteriner tarafından önerilen göz merhemi sürün.
- Anestezi altında iken kuruluğu önlemek için sıçan gözleri veteriner merhem sürün.
- Bez bant şerit ile sıçan başkanı endotrakeal tüp sabitleyin. Endotrakeal tüp ve anestezik giriş tüp arasında sıkı bir bağlantı sağlayın.
- Sıçan ayak kan oksijenasyonu ve kalp hızı monitörü takın ve izleme başlar. Hiçbir tepki için orada onaylayarak uygun anesthetization onaylayınE-tutam.
4. Torakotomi ve Timektomi
- Prosedürün bütünlüğü için standart aseptik teknik izleyin.
- Çalışma alanı ve çalışma masası temizleyin ve% 70 etanol çözeltisi ile dezenfekte edin.
- İşlem sırasında steril cerrahi eldiven kullanın ve işlem sırasında kullanılan tüm alet ve malzemeleri otoklav.
- Tüm göğüs bölgesine providon-iyot uygulayın ve kurumaya bırakın. Daha sonra tül üzerinde% 70 etanol ile cildin temizlenmesi gerekir. Steril çalışma alanını ortaya çıkarmak için bir delik kesim şeffaf plastik wrap ile sıçan örtün.
- Üst torakal bölgede Suprasternal çentik belirleyin. Suprasternal çentik üstünde 3 mm ve künt uçlu Shea makas kullanarak sternum boyunca distale orta hat uzanan - 2 başlangıç deri yoluyla 2 cm orta hat kesi olun.
- Yine künt uçlu Shea makas kullanarak Suprasternal çentik bir 1,5 cm medyan sternotomi gerçekleştirin. KSadece yavaş yavaş sternum ve peşin altında makas alt kenarını EEP.
- Ön-trakeal kayış kasları (sternohyoid ve sternothyroid kasları) ortaya çıkarmak için sadece ayrılmış sternum ve açık altında küçük bir Alm retraktör yerleştirin. Künt Graefe forseps kullanarak ön-trakeal kayış kasları ayırın. NOT: Bu noktada, nefes borusu görülebilir ve entübasyon tüp nefes borusuna içinde görsel edilmelidir.
- Ayrılmış kayış kasları ve sternum altında küçük Alm retraktörün çatallar yerleştirin. Timus üstün yönünü ortaya çıkarmak için retraktör açın.
- Alt timik lobları timus dokusunun yan kenarlarını serbest ve ortaya çıkarmak için ince Dumont forseps kullanın.
- Vena kava, subklavian ve karotid gemileri ile temasını engellemek için özen, açık kesi içine yavaşça superiorda timus çekin ve timus ve akciğerler arasındaki hassas plevral astar kesintileri en aza indirmek için.
- T AdıO, gemiler disseke ve ortaya çıkar timik onları bölmek için mikro-makas kullanın. Gerekirse hemostaz için gemilerin üzerindeki baskıyı tutmak için pamuklu bir bez kullanın.
- Kesi içine alt timik lobları sunun ve sonra keskin arka ekleri parçalanmayabilir. Sağlam timus çıkarın ve dikkatlice eksik bölümler için kaldırılmıştır timus inceleyin.
NOT: Küçük göğüs lenf düğümleri timus çevreleyen görsel ve genellikle timik doku ayırt etmek zordur olabilir. Bu timik dokuya benzer bir görünüme sahip ayrık yuvarlak düğümleri olacak ama timus ile süreklilik içinde olmayacaktır. - Alm retraktörü çıkarın ve iki 5-0 Maxon sütür kesintiye ile sternohyoid ve sternothyoid kasları kapatın.
- Pozitif basınçlı ventilasyon altında mediasteni mühür dikişlerle arasında cerrahi sınıf siyanoakrilat doku yapıştırıcısı 2 damla uygulayın.
NOT: Bu pnömotoraks ve hematom insidansını azaltacaktır. - St kapatıniki ile ernum bir kesim iğne 4-0 ipek sütür kesildi. Altta yatan kas tabakası önlemek için hemen sternum altında iğneyi rehberlik özen, kaburga arasındaki boşluklar yoluyla iğne takın.
- Bir çalışan 4-0 Naylon sütür ile cilt katmanı kapatın. Post-operatif anestezi iyileşme süresini kısaltmak için bu noktada izofluran durdurun.
- Tuzlu-nemlendirilmiş gazlı bez ile kesi yeri ve çevresindeki cildi temizleyin.
- Kesi mühür kesi üzerinde siyanoakrilat tutkal 2 damla - 1 ardından lokal anestezi için bupivakain (% 0.25) birkaç damla uygulayın.
- Sıçan bağımsız solunum çaba belirtileri gösterir ve ekstremitelerde hareket etmeye başlayana kadar havalandırmak için devam edin. Sıçan ekstübe ve bir ısınma pad üzerinde yerleştirilen bir kafes yakın gözlem altında kurtarmak için izin verir.
- Buprenorphine yönetme (0,01-0,05 mg / kg) deri sıçan hemen ameliyat sonrası ve 48 saat po için her 8-12 saat tekrarst-operatif (normalde 5 toplam doz). 24 ve 48 saat post-operatif, karprofen veya Meloxicane (4.4 mg / kg) deri (pre-operatif doz olmak üzere 3 doz toplam) yönetmek.
- Sıçan kafes etrafında hareket kadar izlemeye devam edin. Solunum sıkıntısı herhangi bir işaret anda, yeniden entübasyon ve göğüs yeniden keşif yapmak.
- Sternal yatma korumak için yeterli bilinci yerine kadar gözetimsiz bir hayvan bırakmayın.
- Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir hayvan iade etmeyin.
- Cilt tabakası dikişler 1 hafta operasyon sonrası çıkarın.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu prosedür, yetişkin Lewis sıçanlarına (n = 26) uygulandı. Ortalama operasyon süresi 15 ± 3 dk oldu. İntraoperatif mortalite yoktu. Ortalama entübasyon süresi - Havalandırma kurulmasına entübasyon cihazında sıçan yerleştirme - 45 ± 5 sn. 24 sıçan post-operatif gün (POD) POD 4 14. Bir sıçan geliştirilen solunum güçlüğü ile solunum güçlükleri ya da kanama bulgusu ile operasyon tam bir iyileşme vardı ve mediasteni keşfetmek için yeniden ameliyata alındı. Sıçan çökmüş akciğer lobu olduğu tespit edildi. Akciğerin yeniden ge...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
tam Timektomiye mevcut protokol komplikasyonları en aza indirmek için tasarlanmış cerrahi tutkal uygulaması ile üç katmanlı kesi kapatılması ile minimal invaziv bir yaklaşım sağlar. Timus tamamen çıkarılması saf T hücrelerinin kaybı ve sitokeratin mediastinal lenf dokusu IHC boyamasıyla gösterilmiştir.
20% nedeniyle plevra, kalp ve timus ile alt lob samimi derneğe ilişkilendirilebilen çoğu peri-operatif komplikasyonlar için - yetişkin sıçan Timektomiye prosedürü 1.5 arasında değişen mortalit...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nden (TVB) AI101263 ve Hartwell Vakfı'ndan (MLM) bir hibe ile desteklenmiştir. M.L.M., Duke Kapsamlı Kanser Merkezi'nin bir üyesidir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 2 inç 14 G anjiyokateter | |||
| Çalışma mikroskobu | Zeiss | ||
| Isıtma pedi | |||
| Ayak sensörlü kemirgenler için kalp atış hızı ve kan oksijenasyon monitörü | Harvard Aparatı | ST1 72-8010, ST1 72-8098 (Sıçan ayak sensörü) | |
| Entübasyon aparatı (üstte metal çubuklu plastik) | Bkz. Şekil 2 | ||
| >indüksiyon kutulu, izofluran tanklı ve O2 tanklı küçük hayvan anestezi sistemi | Harvard Aparatı | ST1 72-6420 | |
| CWE | 12-02000 (ventilatör) ve 12-04000 (fareler/sıçanlar için harici valf tertibatı) | borulu küçük hayvan ventilatörü | |
| Yüksek yoğunluklu fiber optik aydınlatıcı | Dolan Jenner | EEG 2823M | |
| Öğrenci standart desen forseps | Güzel Bilim Araçları | 91100-16 | |
| İnce düz makas | Güzel Bilim Araçları | 14060-09 | |
| Küt uçlu Shea makası | Güzel Bilim Araçları | 14105-12 | |
| Küçük Alm ekartör (sternum için) | Güzel Bilim Araçları | 17008-07 | |
| Künt Graefe forseps | Güzel Bilim Araçları | 11050-10 | |
| İnce Dumont forseps | Güzel Bilim Araçları | 11254-20 | |
| 5-0 Maxon sütürler | Ethicon | ||
| 4-0 İpek sütürler (kesme iğnesi ile) | Ethicon | ||
| 6-0 Naylon sütür | Ethicon | ||
| Siyanoakrilat yapıştırıcı (Endermil) | |||
| Yağlama jeli | Akorn Animal Sağlık | NDC 17478-162-35 |
Kaynaklar
- Hard, G. C. Thymectomy in the neonatal rat. Lab. Anim. 9 (2), 105-110 (1975).
- Kobayashi, E., et al. A technique for complete thymectomy in adult rats. J. Immunol. Methods. 1759 (94), 0-3 (1994).
- Delrivière, L., Gibbs, P., Kobayashi, E., Kamada, N., Gianello, P. New technique of complete thymectomy in adult rats without tracheal intubation. Microsurgery. 18 (1), 6-8 (1998).
- Walker, K. G., Jacques, B. C., Tweedle, J. R., Bradley, J. A. A simpler technique for open thymectomy in adult rats. J. Immunol. Methods. 175 (1), 141(1994).
- Na, N., Zhao, D., Huang, Z., Hong, L. An improved method for rat intubation and thymectomy. Chin. Med. J. (Engl). 124 (17), 2723-2727 (2011).
- Kastl, S., et al. Simplification of rat intubation on inclined metal plate). Adv. Physiol. Educ. 28 (1-4), 29-34 (2004).
- Weksler, B., Ng, B., Lenert, J., Burt, M. A simplified method for endotracheal intubation in the rat. J. Appl. Physiol. 76 (4), 1823-1825 (1994).
- Jou, I. M., et al. Simplified rat intubation using a new oropharyngeal intubation wedge. J. Appl. Physiol. 89 (5), 1766-1770 (2000).
- Rivard, A. L., et al. Rat intubation and ventilation for surgical research. J. Invest. Surg. 19 (4), 267-274 (2006).
- Zhao, D., et al. A model of isolated, vascular whole thymus transplantation in nude rats. Transplant Proc. 44 (5), 1394-1398 (2012).
- AbuAttieh, M., et al. Affinity maturation of antibodies requires integrity of the adult thymus. Eur. J. Immunol. 42 (2), 500-510 (2012).
- Reeves, J. P., Reeves, P. A., Chin, L. T. Survival surgery: removal of the spleen or thymus. Curr. Protoc. Immunol. 1 (Unit 1.10), (2001).
- Siemionow, M., Izycki, D., Ozer, K., Ozmen, S., Klimczak, A. Role of thymus in operational tolerance induction in limb allograft transplant model. Transplantation. 81 (11), 1568-1576 (2006).
- Satoh, E., et al. Immunosuppressive effect of long-term drainage of thoracic duct on immunological memory in adult thymectomized rats. Transplant. Proc. 37 (4), 1947-1948 (2005).
- Groen, H., Klatter, F., Pater, J., Nieuwenhuis, P., Rozing, J. Temporary, but Essential Requirement of CD8+ T Cells Early in the Pathogenesis of Diabetes in BB Rats as Revealed by Thymectomy and CD8 Depletion. Clin. Dev. Immunol. 10 (2-4), 141-151 (2003).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
